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1.West Pico ECl超敏發光液是目前靈敏的商業化熒光ECL檢測試劑：
(1) 具有靈敏度和(he)高信噪比，可檢(jian)測10～100 fg抗原;
(2) 可在日光燈下進行發光操(cao)作(zuo);
(3) 發(fa)光迅(xun)速(su)，熒光可使X光膠片感光達(da)12小時以上(shang)，特(te)別適用(yong)于痕量蛋白或核酸檢測;
(4) 可使用更高的抗(kang)體稀釋(shi)倍數(shu)(1:2000～1:10000)，極其節(jie)省抗(kang)體。
2. West Pico ECl超敏發光液用途：用于HRP標記抗體的Western Blot和HRP標記探針的核酸(suan)雜交。
3. West Pico ECl超敏發光液使用方法(fa):
(1)執(zhi)行常規SDS-PAGE、轉(zhuan)膜(mo)和(he)Western Blot步驟。注意用HRP標記lgG或用一抗(kang)-鏈親和(he)素-生物(wu)素-HRP夾(jia)法(fa)。
(2)Western Blot后一次洗膜的同時新鮮配制發(fa)光工(gong)作液：分別取等(deng)體(ti)積的溶液A和B，放入干(gan)凈容器中混合。建議(yi)立(li)即使用工(gong)作液，室溫放置數小(xiao)時后仍可使用但(dan)靈敏度略(lve)有(you)降低。
(3)用鑷子取出膜，搭在濾紙上(shang)(shang)瀝干洗液但勿使膜*干燥。將膜*浸入發(fa)(fa)光(guang)工作(zuo)液(0.125mL發(fa)(fa)光(guang)工作(zuo)液/cm2膜)中，與(yu)發(fa)(fa)光(guang)工作(zuo)液充分接觸(chu)。室溫孵育3分鐘，準(zhun)備立即(ji)壓片曝光(guang)。孵育時間過長不(bu)會(hui)增加靈(ling)敏度，有時還會(hui)導(dao)致(zhi)曝光(guang)條(tiao)帶(dai)異常。發(fa)(fa)光(guang)過程的(de)本質是酶促反應(ying)，使用過少的(de)發(fa)(fa)光(guang)工作(zuo)液不(bu)利反應(ying)進行(xing)，也(ye)會(hui)導(dao)致(zhi)膜上(shang)(shang)條(tiao)帶(dai)曝光(guang)不(bu)均和明顯降低(di)靈(ling)敏度。為(wei)達節(jie)約(yue)目的(de)可將膜剪小但勿降低(di)發(fa)(fa)光(guang)液用量。
(4)用鑷(nie)子夾起膜，搭(da)在濾紙上瀝(li)干發光(guang)工(gong)作液。但(dan)勿洗(xi)去發光(guang)液。
(5)打開X光(guang)膠(jiao)片暗(an)(an)盒(he)，在暗(an)(an)盒(he)內表面鋪一張面積大于膜(mo)的保(bao)鮮膜(mo)。將(jiang)(jiang)Western Blot膜(mo)貼在保(bao)鮮膜(mo)上(shang)，將(jiang)(jiang)保(bao)鮮膜(mo)折起來*包裹Western Blot膜(mo)，去(qu)除氣(qi)泡和皺褶，可剪去(qu)邊緣部多(duo)余(yu)的保(bao)鮮膜(mo)。用濾紙吸去(qu)多(duo)余(yu)的發光(guang)工(gong)作液(ye)。用膠(jiao)帶將(jiang)(jiang)覆(fu)蓋Western Blot膜(mo)的保(bao)鮮膜(mo)固定在暗(an)(an)盒(he)內，蛋白帶面向上(shang)。
(6)暗(an)房(fang)內壓X光膠(jiao)片，分別曝光不同的(de)時間如(ru)數(shu)(shu)秒到數(shu)(shu)分鐘。顯影沖洗。
4. West Pico ECL超敏發光液儲存：4  oC密封(feng)避(bi)光保存一(yi)年以上。短期可放置室溫。
5. West Pico ECL超敏發光液安全(quan)性：無特(te)殊毒性，按(an)普通化學品處理(li)。
6. 注意事項(xiang)：
(1)步驟1～5可(ke)在日(ri)光燈下操作(zuo);但發光液曝露于強(qiang)光下時(shi)間(jian)過(guo)久(jiu)靈敏(min)度可(ke)能略有降低，移到暗(an)房操作(zuo)可(ke)避(bi)免之。戴手(shou)套(tao)可(ke)以避(bi)免在膜上留下手(shou)印。
(2)長時間曝光或(huo)蛋白過量，將加深背景并使條帶強弱(ruo)變(bian)化失(shi)去線(xian)性(xing)關系。曝光不足則條帶模糊。
(3)發(fa)光(guang)(guang)工(gong)作液(ye)孵育(yu)(yu)約3分鐘(zhong)后(hou)膜(mo)(mo)上的(de)(de)條帶(dai)(dai)發(fa)光(guang)(guang)。強(qiang)條帶(dai)(dai)發(fa)光(guang)(guang)在(zai)暗房中(zhong)肉眼(yan)(yan)可(ke)(ke)見(jian)，低(di)豐度蛋白條帶(dai)(dai)發(fa)光(guang)(guang)較弱(ruo)甚(shen)肉眼(yan)(yan)不可(ke)(ke)見(jian)但(dan)可(ke)(ke)使X光(guang)(guang)膠(jiao)片(pian)曝光(guang)(guang)。不能簡單以肉眼(yan)(yan)觀察判斷條帶(dai)(dai)發(fa)光(guang)(guang)時間。肉眼(yan)(yan)不可(ke)(ke)見(jian)的(de)(de)熒(ying)光(guang)(guang)實(shi)際上可(ke)(ke)持(chi)續(xu)數小(xiao)時并使X光(guang)(guang)膠(jiao)片(pian)感光(guang)(guang)，因而弱(ruo)帶(dai)(dai)可(ke)(ke)曝光(guang)(guang)1-10小(xiao)時。如果(guo)曝光(guang)(guang)后(hou)條帶(dai)(dai)不佳，可(ke)(ke)用洗(xi)膜(mo)(mo)緩沖液(ye)洗(xi)膜(mo)(mo)，重(zhong)新孵育(yu)(yu)二抗，然(ran)后(hou)重(zhong)新用ECL發(fa)光(guang)(guang)和曝光(guang)(guang)。
(4)由于超敏發光液極(ji)其靈敏，強(qiang)烈推薦(jian)大(da)多數進(jin)口抗(kang)體起始濃度(du)為一抗(kang)1:1000～1:4000，二抗(kang)1:2000～1:5000。抗(kang)體濃度(du)過高(gao)將造成高(gao)背景或沒有條(tiao)帶，導(dao)致失(shi)敗。
(5)某些(xie)保(bao)鮮(xian)膜(mo)包裹印跡膜(mo)時可能(neng)會淬滅熒光，應選擇高質量(liang)保(bao)鮮(xian)膜(mo)。
(6)使(shi)用肉(rou)眼可見的(de)(de)預染色蛋白(bai)Marker和熒光-放(fang)射自顯影(ying)曝光標簽(qian)可確定膠片上條(tiao)帶的(de)(de)位置和大小。
(7)NaN3能抑制HRP活性，回收第二抗體應避(bi)免使(shi)用(yong)NaN3，如必(bi)需(xu)使(shi)用(yong)勿超過0.01%。

 
參考文獻：
《IL‐37 inhibits invasion and metastasis in non‐small cell lung cancer by suppressing the IL‐6/STAT3 signaling pathway》 作(zuo)者:Mingfang Jiang,  Ye Wang,  Hua Zhang,  Youxin Ji,  Peng Zhao,  Rongli Sun,  Chunling Zhang 期刊:Thoracic Cancer 影響(xiang)因子:2.569 PMID:29575809