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脂肪酸合成酶(FAS)活性檢測試劑盒

操作步驟：

一、粗酶液提取：

1. 組織(zhi)：按照(zhao)組織(zhi)質量（g）：試劑(ji)一體積（mL）為 1:5-10 的比例（建議(yi)稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組織(zhi)，加入(ru) 1mL 試劑(ji)一）進行(xing)冰(bing)浴勻漿。16000rpm，4℃離心 40min，取(qu)上清置于冰(bing)上待測。

2. 細(xi)菌(jun)、真菌(jun)：按照(zhao)細(xi)胞數量(liang)（10 4個）：提取液體積（mL）為 500-1000:1 的比例（建議 500 萬細(xi)胞加入 1mL 試劑一(yi)），冰浴超聲波破(po)碎細(xi)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間(jian)隔 7 秒，總(zong)時(shi)間(jian) 3 分鐘）；然后 16000rpm，4℃離心(xin) 40min，取上清置于冰上待測。

二(er)、FAS 測定操作：

1. 分光光度(du)計預熱 30min，調節波長到(dao) 340 nm，蒸餾水調零(ling)。

2. 試劑(ji)四置于 40℃水(shui)浴中預熱 30 min 以上。

3. 空(kong)白(bai)管：在 500μLEP 管中依次(ci)加入 20μL 蒸餾水、4μL 試(shi)劑(ji)二、4μL 試(shi)劑(ji)三、164μL 試(shi)劑(ji)四和(he) 8μL 試(shi)劑(ji)五，迅速混勻(yun)后(hou)于 340nm 處測(ce)定吸(xi)光值，記(ji)(ji)錄(lu)第 30s 和(he) 90s 時吸(xi)光值，分別記(ji)(ji)錄(lu)為 A1 和(he) A2。△A 空(kong)=A1-A2。

4. 測定(ding)管：在 500μLEP 管中(zhong)依次(ci)加入 20μL 上清液、4μL 試(shi)劑(ji)二、4μL 試(shi)劑(ji)三、164μL 試(shi)劑(ji)四和(he) 8μL 試(shi)劑(ji)五，迅速混勻后于 340nm 處測定(ding)吸光(guang)值(zhi)，記錄第 30s 和(he) 90s 時吸光(guang)值(zhi)，分(fen)別記錄為 A1 和(he) A2。△A 測=A3-A4。

脂肪酸合成酶(FAS)活性檢測試劑盒

FAS 活(huo)性計(ji)算：使用(yong)微量石(shi)英比(bi)色皿測定的計(ji)算公式如下：

（1） 按照蛋白(bai)(bai)(bai)(bai)濃度計算活性單位定(ding)(ding)義(yi)：37℃中(zhong)每毫克(ke)蛋白(bai)(bai)(bai)(bai)每分(fen)鐘氧化 1μmol NADPH 為 1U。 FAS(U/mg prot) =[(△A 測(ce)定(ding)(ding)管(guan)(guan)–△A 空白(bai)(bai)(bai)(bai)管(guan)(guan))÷ε÷d×V 反總×10 6] ÷(Cpr×V 樣)÷T=1.61×(△A 測(ce)定(ding)(ding)管(guan)(guan) –△A 空白(bai)(bai)(bai)(bai)管(guan)(guan)) ÷Cpr

（2） 按照樣(yang)本質量計算活性單位定義：37℃中每克(ke)組織每分(fen)鐘氧化(hua) 1μmol NADPH 為 1U。 FAS(U/g) =[(△A 測(ce)定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×10 6] ÷(W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T=1.61×(△A 測(ce)定管 –△A 空白管) ÷W

（3） 按細胞數(shu)量(liang)計算活性單(dan)位定(ding)義：37℃中每 10 4個細胞每分(fen)鐘氧化(hua) 1μmol NADPH 為 1U。 FAS(U/10 4 cell ) =[(△A 測 定(ding) 管 –△A 空(kong) 白 管 )÷ε÷d×V 反 總(zong) ×10 6] ÷( 細 胞 數(shu) 量(liang) ×V 樣(yang) ÷V 樣(yang)總(zong))÷T=1.61×(△A 測定(ding)管–△A 空(kong)白管) ÷細胞數(shu)量(liang) ε：NADPH 摩爾消光(guang)系數(shu)，6.22×10 3L/mol/cm；d：比色皿光(guang)徑(jing)，1 cm；V 反總(zong)：反應(ying)體系總(zong)體積， 200μL=2×10 -4 L；Cpr：上清(qing)液蛋白質濃(nong)度，mg/mL；W：樣(yang)本質量(liang)，V 樣(yang)：加入反應(ying)體系中上清(qing)液體積，20μL=0.02mL；T：反應(ying)時間，1min。

使(shi)用 96 孔板測定的計算公式如下：

（1） 按照(zhao)蛋白(bai)(bai)濃度計算活性(xing)單位(wei)定(ding)(ding)義：37℃中每(mei)毫克蛋白(bai)(bai)每(mei)分(fen)鐘氧化 1μmol NADPH 為 1U。 FAS(U/mg prot) =[(△A 測(ce)定(ding)(ding)管(guan)–△A 空白(bai)(bai)管(guan))÷ε÷d×V 反總×10 6] ÷(Cpr×V 樣)÷T=3.22×(△A 測(ce)定(ding)(ding)管(guan) –△A 空白(bai)(bai)管(guan)) ÷Cpr

（2） 按照(zhao)樣本質量計算活性單位(wei)定(ding)(ding)義：37℃中每(mei)克組(zu)織每(mei)分(fen)鐘氧化 1μmol NADPH 為 1U。 FAS(U/g) =[(△A 測定(ding)(ding)管(guan)(guan)(guan)–△A 空(kong)白管(guan)(guan)(guan))÷ε÷d×V 反總(zong)×10 6] ÷(W×V 樣÷V 樣總(zong))÷T=3.22×(△A 測定(ding)(ding)管(guan)(guan)(guan) –△A 空(kong)白管(guan)(guan)(guan)) ÷W

（3） 按細胞(bao)數(shu)(shu)量(liang)計算活(huo)性單(dan)位(wei)定義：37℃中(zhong)每 10 4個細胞(bao)每分鐘(zhong)氧(yang)化 1μmol NADPH 為 1U。 FAS(U/10 4 cell ) =[(△A 測 定 管(guan)(guan) –△A 空 白(bai) 管(guan)(guan) )÷ε÷d×V 反(fan)(fan) 總(zong) ×10 6] ÷( 細 胞(bao) 數(shu)(shu) 量(liang) ×V 樣(yang)(yang) ÷V 樣(yang)(yang)總(zong))÷T=3.22×(△A 測定管(guan)(guan)–△A 空白(bai)管(guan)(guan)) ÷細胞(bao)數(shu)(shu)量(liang) ε：NADPH 摩爾消光系數(shu)(shu)，6.22×10 3L/mol/cm；d：96 孔板光徑，0.5 cm；V 反(fan)(fan)總(zong)：反(fan)(fan)應體系總(zong)體積(ji)， 200μL=2×10 -4 L；Cpr：上(shang)清液蛋白(bai)質濃度，mg/mL；W：樣(yang)(yang)本質量(liang)，V 樣(yang)(yang)：加(jia)入反(fan)(fan)應體系中(zhong)上(shang)清液體積(ji)，20μL=0.02mL；T：反(fan)(fan)應時間，1min。

脂肪酸合成酶(FAS)活性檢測試劑盒

試(shi)劑(ji)(ji)一：液體×1 瓶(ping)(ping)，－20℃保(bao)存(cun)(cun)。用(yong)(yong)前(qian) 1 d 取(qu)出置于(yu) 4℃充分解(jie)凍后混勻。試(shi)劑(ji)(ji)二(er)：粉(fen)劑(ji)(ji)×1 瓶(ping)(ping)。臨(lin)用(yong)(yong)前(qian)加入(ru) 440 μL 試(shi)劑(ji)(ji)四(si)，充分溶解(jie)。試(shi)劑(ji)(ji)三：粉(fen)劑(ji)(ji)×1 瓶(ping)(ping)，4℃保(bao)存(cun)(cun)。臨(lin)用(yong)(yong)前(qian)加入(ru) 440 μL 試(shi)劑(ji)(ji)四(si)，充分溶解(jie)。試(shi)劑(ji)(ji)四(si)：液體×1 瓶(ping)(ping), 4℃保(bao)存(cun)(cun)。試(shi)劑(ji)(ji)五：粉(fen)劑(ji)(ji)×1 瓶(ping)(ping)，4℃保(bao)存(cun)(cun)。臨(lin)用(yong)(yong)前(qian)加入(ru) 840μL 試(shi)劑(ji)(ji)四(si)，充分溶解(jie)。