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RPMI Medium 1640 細胞培養

細胞復蘇實驗準備：

主要(yao)器材(cai)：一(yi)次性滴管、打(da)火機、酒精燈、大鑷子、中鑷子、記號筆、廢液(ye)缸、封口膜、剪子。

主(zhu)要試劑： PBS、培養液、消(xiao)化酶(mei)（胰酶(mei)）、75%酒(jiu)精、雙抗。

PBS配制：NaCL :4g   KCL:0.1g   Na2HPO4 :1.745g   KH2PO4 :0.1g

三蒸水： 500mL，溶(rong)解(jie)后(hou)高壓滅菌。

培養基(ji)(ji)配制(zhi)：5mL雙抗、50mL血清，加(jia)入培養基(ji)(ji)中。

細胞復蘇操作步驟：

1.佩戴眼(yan)鏡和手套(tao)，從液氮罐中取出(chu)安(an)瓿或冷凍管。

2.迅(xun)速放入38℃水浴中(zhong)，并不時搖(yao)動，在1分鐘(zhong)內使其*融(rong)化，然(ran)后在無菌下(xia)取出(chu)細胞。

3.在1000r/min速度下離心5～10分鐘，棄去(qu)上(shang)層(ceng)液，加入(ru)適(shi)量培(pei)養(yang)液后接(jie)(jie)種于培(pei)養(yang)瓶中，接(jie)(jie)種濃度1×109/L，置37℃溫箱靜置培(pei)養(yang)，次(ci)日更換一(yi)次(ci)培(pei)養(yang)液，繼(ji)續培(pei)養(yang)，觀察生長(chang)情況。若細胞密(mi)度較高，及時傳代(dai)。或無需離心直(zhi)接(jie)(jie)將(jiang)細胞加入(ru)瓶中，并加入(ru)培(pei)養(yang)基貼壁培(pei)養(yang)12～24小時后，充去(qu)上(shang)清，換入(ru)新(xin)鮮培(pei)養(yang)基繼(ji)續培(pei)養(yang)。

平時研(yan)究(jiu)用(yong)的(de)細胞，有(you)需要冷凍保存(cun)。冷凍的(de)過程(cheng)稱為凍存(cun)，把凍上的(de)細胞化(hua)開的(de)過程(cheng)叫(jiao)細胞復蘇。細(xi)胞復蘇是一(yi)簡單(dan)的(de)試驗操作(zuo)，但操作(zuo)中(zhong)(zhong)有許多需要注意(yi)的(de)事項，在實驗操作(zuo)中(zhong)(zhong)注意(yi)細(xi)小問題，才能使復蘇后(hou)的(de)細(xi)胞狀態保持良好。

RPMI Medium 1640 細胞培養