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PCR試劑 SYBR Green I核酸染(ran)料（PCR級，10000X）
貨號：SR4110
規格：50/100ul
保存：-20℃避光保存，有效期少一(yi)年。

產品說明 ：
    SYBR Green I 染(ran)料(liao)(liao)是(shi)(shi)一種(zhong)直(zhi)接與(yu)雙鏈(lian)(lian) DNA (dsDNA) 結合(he)的(de)(de)熒(ying)光(guang)染(ran)料(liao)(liao)，是(shi)(shi)熒(ying)光(guang)定量 PCR 常用的(de)(de) DNA結合(he)染(ran)料(liao)(liao)。在定量 PCR 中(zhong)(zhong)，SYBR Green I 可與(yu)雙鏈(lian)(lian) DNA（dsDNA）非特異性結合(he)后發出(chu)熒(ying)光(guang)，則可以(yi)通過(guo)檢(jian)測反(fan)(fan)應體(ti)系(xi)中(zhong)(zhong)的(de)(de) SYBR Green I 熒(ying)光(guang)強度，達到檢(jian)測 PCR 產物(wu)擴(kuo)增(zeng)量的(de)(de)目(mu)的(de)(de)。游(you)離狀(zhuang)態下，SYBR Green I 發出(chu)微弱(ruo)的(de)(de)熒(ying)光(guang)，一旦與(yu) dsDNA 結合(he)，其熒(ying)光(guang)增(zeng)加 1000 倍，一個反(fan)(fan)應發出(chu)的(de)(de)全部熒(ying)光(guang)信號與(yu)出(chu)現(xian)的(de)(de) dsDNA 量成比例，且會隨(sui)擴(kuo)增(zeng)產物(wu)的(de)(de)增(zeng)加而增(zeng)加；所以(yi)通過(guo)檢(jian)測 PCR 反(fan)(fan)應液中(zhong)(zhong)的(de)(de)熒(ying)光(guang)信號強度，可以(yi)對目(mu)的(de)(de)基因進行(xing)準確(que)定量，同(tong)時(shi)還可以(yi)測定擴(kuo)增(zeng)的(de)(de)目(mu)的(de)(de) DNA 段(duan)的(de)(de)熔(rong)解溫度。

使用說明 ：
    使用時，配置PCR反應混合液， 將10000×SYBR Green I濃縮液加入到PCR反應體系， 使終濃度為0.5× （0.2×到 1×之間調整） 。以上操作建議在冰上進行。
注： ① 反應液配制方法和 PCR 擴增條件請參照 DNA 聚合酶使用說明。
     ② Realtime PCR 擴增(zeng)儀(yi)的使用方法，請參照各(ge)儀(yi)器說明書。

注意事項 ：
    使用濃度對熒光 PCR 結果的影響
    SYBR Green I 的使用濃度是保證熒光定量 PCR 實驗成功非常關鍵的因素。如果 SYBR Green I 的濃度過低會使熒光信號的變化降低，這就意味著低拷貝的樣品可能無法檢出；而在高濃度時，將會抑制 PCR 反應，降低PCR 反應效率。所以一般在使用 SYBR Green I 時應根據實際情況優化使用濃度，反應的終濃度為 0.2×到 1×之間。
    鎂離子濃度的影響
    提(ti)高鎂離(li)子濃度可以降(jiang)低SYBR Green I對PCR反(fan)(fan)應的(de)抑制作用。 我(wo)們建議在用SYBR Green I進行(xing)熒光PCR反(fan)(fan)應時(shi)，鎂離(li)子濃度比(bi)無 SYBR Green I 的(de)普通(tong) PCR 反(fan)(fan)應高出 0.5～3mM。

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 SYBR Green I是高靈敏的DNA熒光染料，適用于各種電泳分析，操作簡單：無須脫色或沖洗。少可檢出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 與dsDNA 結合熒光信號會增強800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝膠樣品熒光信號強，背景信號低。可適用于多種電泳分析。
用QPCR來做miRNA的擴增其實是一件比較難的事，因為miRNA是只有18-23個堿基的單鏈RNA，普通的PCR擴增方法是無法直接用的，所以目前有兩種主流的解決思路：
方法1、設計頸環引物，反轉錄得到cDNA，然后結合探針的方法在PCR擴增時進行熒光定量，這種方法以ABI公司為代表，優點是擴增特異性好，缺點是成本太高，所以ABI的miRNA技術服務是很貴的 
方法2、通過在miRNA 3‘端進行加A，以延長片段的長度，然后通過特殊設計的RT引物反轉錄得到cDNA，后用SYBR為熒光染料進行定量PCR，此法優點是價格便宜，操作簡單，靈敏度高，尤其對低豐度miRNA的檢測要明顯優于探針法；缺點是特異性稍差，不過近研究發現miRNA 的3’端有多樣性。
總的(de)來說方法(fa)(fa)2要(yao)好于方法(fa)(fa)1 ，因(yin)為一(yi)旦miRNA 3‘端增(zeng)加(jia)或減少一(yi)兩個堿基，頸環引物則無法(fa)(fa)使用，也(ye)就是說方法(fa)(fa)1只能檢測某種miRNA的(de)一(yi)種序列。

PCR試劑(ji) SYBR Green I核酸(suan)染料(liao)（PCR級，10000X）

 參考文獻：
《Regulation of insulin resistance by targeting the insulin‐like growth factor 1 receptor with microRNA‐122‐5p in hepatic cells》 作者:Li Dong，Xiaoyu Hou，Fengsui Liu，Hong Tao，Yunjia Zhang，Hang Zhao，Guangyao Song 期刊:Cell Biology International 影響因子:2.127 PMID:30958584
《Collagen facilitates the colorectal cancer stemness and metastasis through an integrin/PI3K/AKT/Snail signaling pathway》 作者:Xiangbin Wu，Jianhui Cai，Zhigui Zuo，Jinlei Li 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影響因子:3.743 PMID:30913493
《MMP-9 secreted by tumor associated macrophages promoted gastric cancer metastasis through a PI3K/AKT/Snail pathway》 作者(zhe):Liu Lin，Yu Ye，Xiumei Zhu 期(qi)刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影響(xiang)因子:3.743 PMID:31202170