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PCR純化Kit
貨號：D6492-01
規格：100/盒
品牌：omega

     聚(ju)合酶(mei)鏈式反應(Polymerase Chain Reaction，PCR)是(shi)80年代中(zhong)(zhong)期(qi)發(fa)展(zhan)起來的(de)(de)體外核酸擴(kuo)增技術(shu)。它(ta)具有(you)特(te)異、敏感、產(chan)率高、快(kuai)速、簡便、重復(fu)性好(hao)、易自動化等突(tu)出(chu)優點；能(neng)在一(yi)(yi)(yi)個試管(guan)內將所要研究的(de)(de)目的(de)(de)基(ji)因(yin)或某一(yi)(yi)(yi)DNA片段于數(shu)小(xiao)時(shi)內擴(kuo)增十萬乃(nai)百萬倍，使肉眼能(neng)直(zhi)接觀察和判斷(duan)；可從一(yi)(yi)(yi)根毛發(fa)、一(yi)(yi)(yi)滴(di)血(xue)、甚一(yi)(yi)(yi)個細胞中(zhong)(zhong)擴(kuo)增出(chu)足量(liang)的(de)(de)DNA供分析研究和檢測鑒定。過去幾(ji)天(tian)幾(ji)星期(qi)才能(neng)做到的(de)(de)事情，用PCR幾(ji)小(xiao)時(shi)便可完成。PCR技術(shu)是(shi)生物(wu)醫學領域中(zhong)(zhong)的(de)(de)一(yi)(yi)(yi)項革命性創舉和里程碑(bei)。

    PCR技術的(de)(de)(de)(de)基本原(yuan)理類似于(yu)DNA的(de)(de)(de)(de)天然復制過(guo)程，其特異性(xing)(xing)(xing)依賴于(yu)與(yu)(yu)靶(ba)序列(lie)兩端(duan)互補(bu)的(de)(de)(de)(de)寡核苷酸引(yin)(yin)物(wu)。PCR由變(bian)(bian)(bian)性(xing)(xing)(xing)→退火(huo)→延伸三個基本反應(ying)步(bu)驟構成(cheng)：①模(mo)(mo)(mo)板(ban)(ban)(ban)(ban)DNA的(de)(de)(de)(de)變(bian)(bian)(bian)性(xing)(xing)(xing)：模(mo)(mo)(mo)板(ban)(ban)(ban)(ban)DNA經(jing)加(jia)(jia)熱(re)94℃左右一(yi)定時間后(hou)，使(shi)模(mo)(mo)(mo)板(ban)(ban)(ban)(ban)DNA雙鏈(lian)(lian)或經(jing)PCR擴(kuo)增(zeng)形成(cheng)的(de)(de)(de)(de)雙鏈(lian)(lian)DNA解離，使(shi)之成(cheng)為(wei)單鏈(lian)(lian)，以(yi)便(bian)它與(yu)(yu)引(yin)(yin)物(wu)結(jie)合，為(wei)下輪反應(ying)作準備；②模(mo)(mo)(mo)板(ban)(ban)(ban)(ban)DNA與(yu)(yu)引(yin)(yin)物(wu)的(de)(de)(de)(de)退火(huo)(復性(xing)(xing)(xing))：模(mo)(mo)(mo)板(ban)(ban)(ban)(ban)DNA經(jing)加(jia)(jia)熱(re)變(bian)(bian)(bian)性(xing)(xing)(xing)成(cheng)單鏈(lian)(lian)后(hou)，溫(wen)度降55℃左右，引(yin)(yin)物(wu)與(yu)(yu)模(mo)(mo)(mo)板(ban)(ban)(ban)(ban)DNA單鏈(lian)(lian)的(de)(de)(de)(de)互補(bu)序列(lie)配(pei)對(dui)結(jie)合；③引(yin)(yin)物(wu)的(de)(de)(de)(de)延伸：DNA模(mo)(mo)(mo)板(ban)(ban)(ban)(ban)-引(yin)(yin)物(wu)結(jie)合物(wu)在TaqDNA聚合酶的(de)(de)(de)(de)作用下，以(yi)dNTP為(wei)反應(ying)原(yuan)料(liao)，靶(ba)序列(lie)為(wei)模(mo)(mo)(mo)板(ban)(ban)(ban)(ban)，按堿基配(pei)對(dui)與(yu)(yu)半保(bao)留(liu)復制原(yuan)理，合成(cheng)一(yi)條新的(de)(de)(de)(de)與(yu)(yu)模(mo)(mo)(mo)板(ban)(ban)(ban)(ban)DNA 鏈(lian)(lian)互補(bu)的(de)(de)(de)(de)半保(bao)留(liu)復制鏈(lian)(lian)。重(zhong)復循(xun)(xun)環(huan)變(bian)(bian)(bian)性(xing)(xing)(xing)→退火(huo)→延伸三過(guo)程，就(jiu)可獲得(de)更多的(de)(de)(de)(de)“半保(bao)留(liu)復制鏈(lian)(lian)”，而且這種新鏈(lian)(lian)又可成(cheng)為(wei)下次循(xun)(xun)環(huan)的(de)(de)(de)(de)模(mo)(mo)(mo)板(ban)(ban)(ban)(ban)。每完(wan)成(cheng)一(yi)個循(xun)(xun)環(huan)需(xu) 2～4分(fen)鐘，2～3小時就(jiu)能(neng)將待擴(kuo)目的(de)(de)(de)(de)基因擴(kuo)增(zeng)放(fang)大幾百萬倍。

PCR反應體系：
    1、引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。引物濃度一般為0.1～0.5μM，這一引物濃度足以使1kb的DNA片段在PCR反應體系中循環擴增30T。以低引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會，但濃度過低則得不到產物或產量過低。

    2、Taq酶(mei)：目前有兩種(zhong)Taq DNA聚合酶(mei)供應(ying)， 一(yi)種(zhong)是從棲(qi)熱水(shui)生桿(gan)菌(jun)中提純的天(tian)然酶(mei)，但保真度(du)(du)較差，在復制比較長的模(mo)(mo)板時容易(yi)發生點突變(bian)。另一(yi)種(zhong)為(wei)在大腸桿(gan)菌(jun)合成的基因工程酶(mei)。能催化(hua)以(yi)DNA單鏈為(wei)模(mo)(mo)板，以(yi)堿基互(hu)補(bu)原則(ze)為(wei)基礎，按5’→3’方(fang)向逐(zhu)個(ge)將(jiang)dNTP分子(zi)連接到引物的3’端，合成一(yi)條與模(mo)(mo)板DNA互(hu)補(bu)的新(xin)的DNA子(zi)鏈。無3’→5’的外切酶(mei)活性，沒有校正功能。催化(hua)一(yi)典型的PCR反應(ying)約需酶(mei)用量(liang)一(yi)般為(wei)0.5～5U/100μl，濃(nong)度(du)(du)過(guo)高(gao)可引起非(fei)特異性擴增(zeng)，濃(nong)度(du)(du)過(guo)低(di)則(ze)合成產物量(liang)減少(shao)。

    3、dNTP：dNTP的質量(liang)(liang)與(yu)濃(nong)度(du)和PCR擴增效率(lv)有密切(qie)關系。多次凍融(rong)會使(shi)dNTP降解，一般存(cun)儲濃(nong)度(du)為(wei)10mM，小量(liang)(liang)分裝，-20℃冷凍保存(cun)。在PCR反(fan)應中(zhong)，dNTP濃(nong)度(du)一般為(wei)50～200μM，尤(you)其(qi)是注(zhu)意4種(zhong)dNTP的濃(nong)度(du)要相等(deng)(等(deng)摩(mo)爾配制)，如其(qi)中(zhong)任何一種(zhong)濃(nong)度(du)不(bu)同于其(qi)它幾種(zhong)時(偏高(gao)或偏低)，就會引起錯配。高(gao)濃(nong)度(du)dNTP可(ke)加(jia)速反(fan)應，但同時會增加(jia)錯誤(wu)摻入和實驗成(cheng)本；低濃(nong)度(du)dNTP可(ke)提高(gao)PCR的性，但反(fan)應速度(du)和PCR產(chan)物的產(chan)量(liang)(liang)會降低。dNTP能(neng)與(yu)Mg 2+ 結合(he)，使(shi)游(you)離的Mg 2+ 濃(nong)度(du)降低。

    4、模(mo)板(ban)(ban)(ban)：就模(mo)板(ban)(ban)(ban)而言，影響PCR的(de)(de)(de)主要指模(mo)板(ban)(ban)(ban)的(de)(de)(de)數量(liang)和純度。一(yi)般(ban)(ban)PCR反應中(zhong)(zhong)模(mo)板(ban)(ban)(ban)的(de)(de)(de)數量(liang)為(wei)10 2 ～10 5 個拷(kao)貝(bei)，靈敏的(de)(de)(de)PCR甚可從一(yi)個細胞、一(yi)根(gen)頭發、一(yi)個孢子或一(yi)個精(jing)子提取的(de)(de)(de)DNA中(zhong)(zhong)分析目的(de)(de)(de)序列。模(mo)板(ban)(ban)(ban)的(de)(de)(de)純度一(yi)般(ban)(ban)要求不(bu)是很高，某些(xie)擴(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)實驗中(zhong)(zhong)甚將(jiang)裂(lie)解液直接(jie)作為(wei)PCR模(mo)板(ban)(ban)(ban)。但模(mo)板(ban)(ban)(ban)中(zhong)(zhong)不(bu)能(neng)有(you)影響擴(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)反應的(de)(de)(de)物(wu)質存在(zai)，如蛋白酶、核酸酶、尿素、SDS、EDTA、卟(bu)啉(lin)類物(wu)質等，上述物(wu)質的(de)(de)(de)存在(zai)會影響擴(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)效果，甚使(shi)擴(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)失敗。模(mo)板(ban)(ban)(ban)DNA的(de)(de)(de)量(liang)不(bu)能(neng)太(tai)高，否則擴(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)可能(neng)不(bu)會成(cheng)功，在(zai)此(ci)情況下可適當稀釋模(mo)板(ban)(ban)(ban)。一(yi)般(ban)(ban)對于單拷(kao)貝(bei)的(de)(de)(de)哺乳動物(wu)基因(yin)組模(mo)板(ban)(ban)(ban)來說，100ul的(de)(de)(de)反應體系中(zhong)(zhong)有(you)100ng的(de)(de)(de)模(mo)板(ban)(ban)(ban)已足夠(gou)。

    5、Mg 2+ ：Mg 2+ 濃(nong)度(du)對PCR擴(kuo)增的(de)(de)(de)特(te)異性和產(chan)量(liang)有顯著的(de)(de)(de)影響。一般(ban)PCR反應(ying)中(zhong)，當dNTP濃(nong)度(du)為(wei)200μM時，Mg 2+ 濃(nong)度(du)為(wei)1.5～2.0mM為(wei)宜。Mg 2+ 濃(nong)度(du)過高，反應(ying)特(te)異性降低(di)，出現非特(te)異擴(kuo)增，Mg 2+ 濃(nong)度(du)過低(di)會降低(di)Taq DNA聚(ju)合酶的(de)(de)(de)活性，使反應(ying)產(chan)物(wu)(wu)減(jian)少。此(ci)外，Mg 2+濃(nong)度(du)還影響引(yin)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)退火、模板與PCR產(chan)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)解(jie)鏈溫度(du)、產(chan)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)特(te)異性、引(yin)物(wu)(wu)二聚(ju)體的(de)(de)(de)生成等(deng)。

PCR反應條件：
    1、變性溫度與時間：變性溫度低，解鏈不*是導致PCR失敗的主要原因。一般情況下，93℃～94℃/min足以使模板DNA變性，若低于93℃則 需延長時間，但溫度不能過高，因為高溫環境對酶的活性有影響。此步若不能使靶基因模板或PCR產物*變性，就會導致PCR失敗。
   ; 2、退火溫度與時間：退火溫度是影響PCR特異性的較重要因素。變性后溫度快速冷卻40℃～60℃，可使引物和模板發生結合。由于模板DNA 比引物復雜得多，引物和模板之間的碰撞結合機會遠遠高于模板互補鏈之間的碰撞。退火溫度與時間，取決于引物的長度、堿基組成及其濃度，還有靶基序列的長度。對于20個核苷酸，G+C含量約50%的引物，55℃為選擇適退火溫度的起點較為理想。引物的復性溫度可通過以下公式幫助選擇合適的溫度：

Tm值(解鏈溫度)=4(G+C)＋2(A+T)
   復性溫度=Tm值－(5～10℃)
   在Tm值允許范圍內，選擇較高的復性溫度可大大減少引物和模板間的非特異性結合，提高PCR反應的特異性。復性時間一般為30～60秒，足以使引物與模板之間*結合。
    3、延伸溫度與時間：PCR反應的延伸溫度一般選擇在70～75℃之間，常用溫度為72℃，過高的延伸溫度不利于引物和模板的結合。PCR延伸反應的時間，可根據待擴增片段的長度而定，一般1Kb以內的DNA片段，延伸時間1min是足夠的。3～4kb的靶序列需3～4min；擴增10Kb需延伸15min。延伸時間過長會導致非特異性擴增帶的出現。對低濃度模板的擴增，延伸時間要稍長些。
    4、循環次數：循環次數決定PCR擴增程度。PCR循環次數主要取決于模板DNA的濃度。一般的循環次數選在30～40T之間，循環次數越多，非特異性產物的量亦隨之增多。

PCR純化Kit訂購(gou)說明：

1、絕大部分產品備有現貨，一般情況下都能訂貨當日發貨。 
2、部分非常用產品，需提前1－2日預訂，海外期貨則需要提前3-6周預訂。 
3、部分產品價格會因貨期、批次等因素發生變化，若有變動以訂貨當日新價格為準。 
4、每日訂單截止時間為16點整，部分城市可到17點整，因超過截止時間造成當日不能發貨的將于次日安排發貨。
5、請辦理完貨款后，將收據、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運輸說(shuo)明：

1、極低溫產品：極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產品：低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
3、常溫產品：常溫產品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產品由公司庫房人員快速配貨，準確快速高效的快遞保證產品快速送達您的手中。