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通用RT-PCR試劑盒（AMV）

產(chan)(chan)品簡介：本試劑(ji)盒適(shi)用于(yu)各種 RNA 制(zhi)品的(de)(de)(de)反轉(zhuan)錄(lu)(lu)反應以(yi)及(ji)隨后的(de)(de)(de) PCR 擴(kuo)增。它采用 AMV 進行反轉(zhuan)錄(lu)(lu)反應，能夠獲得(de)更長(chang)的(de)(de)(de)反轉(zhuan)錄(lu)(lu)產(chan)(chan)物。同時，在(zai) 25ul 反轉(zhuan)錄(lu)(lu)體(ti)系和 50ul PCR 反應體(ti)系中，還(huan)可以(yi)一次(ci)性(xing)得(de)到足夠量的(de)(de)(de) PCR 產(chan)(chan)物用于(yu)后續的(de)(de)(de)克隆實驗。本試劑(ji)盒中配置(zhi)的(de)(de)(de)酶(mei)均(jun)為進口的(de)(de)(de)酶(mei)。RT 酶(mei)采用進口的(de)(de)(de) AMV，所以(yi) cDNA 更長(chang)，基因的(de)(de)(de)信息保留(liu)得(de)更完整！反轉(zhuan)錄(lu)(lu)過程中特異的(de)(de)(de) RNase 抑制(zhi)劑(ji)可有效降低(di)由于(yu)外源 RNase 污染(ran)而導致實驗失敗的(de)(de)(de)風(feng)險。本試劑(ji)盒使用方(fang)便、快捷，可廣(guang)泛(fan)用于(yu) cDNA 克隆及(ji)目的(de)(de)(de)基因檢測等(deng)分子生物學實驗。

操作步驟：

一、反轉錄反應

1、在(zai)冰(bing)浴(yu)的(de)無菌無 RNase 的(de)離心(xin)管中加(jia)入如下(xia)反應(ying)(ying)成分： 0.5ug RNA 模板 5ul Oligo(dT)16引(yin)物補 RNase-free ddH2O 11.5ul 2、70℃保溫 5min 后(hou)(hou)迅速在(zai)冰(bing)上(shang)冷卻 5min，簡短離心(xin)收集反應(ying)(ying)液后(hou)(hou)加(jia)入以下(xia)各組分： 5ul 5×AMV Buffer 2.5ul dNTPs 0.5ul RNasin 0.5ul AMV 補 RNase-free ddH2O 25ul 3、42℃溫浴(yu) 60min，如果是用隨機(ji)引(yin)物，請將離心(xin)管置 37℃溫浴(yu) 60min。 4、反應(ying)(ying)后(hou)(hou)將離心(xin)管置冰(bing)上(shang)，反應(ying)(ying)產物可(ke)用于進行后(hou)(hou)續實驗或-20℃保存。

二、PCR 反應

1、按以下(xia)各組分配(pei)制 50ul PCR 反(fan)應(ying)體系： 10×PCR Buffer 5ul dNTPs 1ul 上(shang)游引(yin)物(wu)（用(yong)(yong)戶自(zi)備(bei) 10um） 1ul 下(xia)游引(yin)物(wu)（用(yong)(yong)戶自(zi)備(bei) 10um） 1ul RT 反(fan)應(ying)產物(wu) 2ul Taq Polymerase 0.5ul ddH2O x ul Total Volume 50ul 2、混勻后短暫離心，PCR 儀擴增，瓊(qiong)脂糖(tang)凝膠電泳觀察結果(guo)。注意事項(xiang)： 1、用(yong)(yong)于 cDNA 合成反(fan)應(ying)的相(xiang)(xiang)(xiang)關(guan)試(shi)劑(ji)(ji)和耗材盡可能(neng)用(yong)(yong) DEPC 進行處(chu)理，并在高(gao)(gao)壓滅(mie)菌(jun)(jun)后使用(yong)(yong)。有些試(shi)劑(ji)(ji)不(bu)能(neng)高(gao)(gao)壓滅(mie)菌(jun)(jun)時，先用(yong)(yong)經(jing)過滅(mie)菌(jun)(jun)的器(qi)具、水(shui)等配(pei)制溶液(ye)后，再將(jiang)溶液(ye)進行過濾(lv)除(chu)菌(jun)(jun)處(chu)理。 2、RNA 樣品要避免反(fan)復(fu)多次凍融(rong)(rong)，應(ying)使 RNA 在冰浴(yu)中處(chu)于融(rong)(rong)化狀態。 3、如果(guo) PCR 效(xiao)果(guo)不(bu)理想，可以適當優化條件，比如改變退火溫度或增加模板量。相(xiang)(xiang)(xiang)關(guan)產品： R1600 DEPC 處(chu)理水(shui) SR0060 液(ye)相(xiang)(xiang)(xiang) RNase 清(qing)除(chu)劑(ji)(ji) R1200 總 RNA 提取試(shi)劑(ji)(ji)盒 SR0080 RNAsaver RNA 長效(xiao)保(bao)存液(ye) R1050 5×RNA Loading Buf er RP1100 通用(yong)(yong) RT-PCR 試(shi)劑(ji)(ji)盒(M-MLV) PC2440 Random PC2450 Oligo T16 D1020 10×DNA 上(shang)樣緩沖(chong)(chong)液(ye) T1060 50×TAE 緩沖(chong)(chong)液(ye)

通用RT-PCR試劑盒（AMV）