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本公司生產的*0感受態細胞是采用大腸桿菌*0菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達10⁸，-70℃保存六個月轉化效率不發生改變(bian)。

基因型：F_ mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15△lacⅩ74 recA1 deoR araD139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

*0感受態細胞特 點：一種用于(yu)鋪制(zhi)(zhi)與(yu)培養質(zhi)(zhi)粒平板(ban)和(he)粘粒平板(ban)的(de)重級缺(que)陷的(de)抑制(zhi)(zhi)型菌株。其中(zhong)φ80 lacZΔM15基因的(de)產物可(ke)與(yu)pUC載(zai)體(ti)編碼的(de)β-半乳糖(tang)苷酶(mei)氨基端實現α-互(hu)補，可(ke)用于(yu)藍白(bai)斑篩選(xuan)。該菌株適用于(yu)高(gao)效的(de)DNA克隆和(he)質(zhi)(zhi)粒擴(kuo)增，能保證(zheng)高(gao)拷(kao)貝質(zhi)(zhi)粒的(de)穩定(ding)遺傳。

操作方法：（以下各步驟均為無菌操作）

1，將感(gan)受態細(xi)胞置于冰(bing)上融化，以(yi)下實驗以(yi)100ul感(gan)受態細(xi)胞為例。

2、向感受(shou)態細(xi)胞(bao)懸液中(zhong)加入需轉化(hua)的目(mu)的DNA，注意目(mu)的DNA的體積不要超過(guo)感受(shou)態細(xi)胞(bao)懸液體積的十分(fen)(fen)之一(yi)，輕(qing)輕(qing)旋轉離心管以(yi)混勻內容(rong)物(wu)，冰浴放置30分(fen)(fen)鐘。

3、將離心(xin)(xin)管置于42℃水(shui)浴(yu)中60-90秒，然后快速轉移到冰浴(yu)中放置2-3分鐘，注意(yi)不要搖(yao)動離心(xin)(xin)管。

4、向(xiang)離心管(guan)中(zhong)加入500ul無菌(jun)無抗的SOC或LB培養基，37℃ 180rpm振蕩(dang)培養1小時。目的是使質粒上相(xiang)關(guan)的抗性(xing)標記基因(yin)表達，使菌(jun)體復蘇。

5、取(qu)適量(liang)(liang)已轉化的(de)(de)感受(shou)態(tai)細胞涂布含相(xiang)應抗生素的(de)(de)SOC或LB平板(ban)，37℃倒置(zhi)培養(yang)12-16小時。涂布用量(liang)(liang)可(ke)(ke)(ke)根據具(ju)體實驗來調整，如轉化的(de)(de)DNA總量(liang)(liang)較(jiao)多，可(ke)(ke)(ke)取(qu)100ul左右的(de)(de)轉化產(chan)物涂板(ban)；反之(zhi)，如轉化的(de)(de)DNA總量(liang)(liang)較(jiao)少，可(ke)(ke)(ke)取(qu)200-300ul的(de)(de)轉化產(chan)物涂板(ban)。過多菌(jun)液可(ke)(ke)(ke)以抑(yi)制(zhi)細菌(jun)生長(chang)。如果預(yu)計(ji)的(de)(de)克隆較(jiao)少，可(ke)(ke)(ke)通過離(li)心后吸除部分培養(yang)液，懸浮菌(jun)體后將其涂布于一個平板(ban)中。涂布剩余的(de)(de)菌(jun)液可(ke)(ke)(ke)4℃保(bao)存，如果次(ci)日的(de)(de)轉化菌(jun)落(luo)數(shu)過少可(ke)(ke)(ke)以將剩下(xia)的(de)(de)菌(jun)液再(zai)涂布新的(de)(de)平板(ban)。

注意事項：

1、感受態(tai)細胞(bao)應保存在-70℃，不可反復凍融(rong)，否(fou)則其轉(zhuan)化效率將會降低。

2、實(shi)驗過程(cheng)中(zhong)應嚴格無菌(jun)操作(zuo)，防止其它DNA或(huo)雜(za)菌(jun)的污染，避免為以后的篩選、鑒定(ding)帶來(lai)影響。

3、轉化時(shi)(shi)，轉化效(xiao)率與外源DNA的(de)濃度在一定(ding)范(fan)圍內成正比，但當(dang)加入的(de)外源DNA量過多或(huo)體積(ji)過大反而會降低轉化效(xiao)率。轉化時(shi)(shi)DNA體積(ji)要小于感受態細胞體積(ji)的(de)十分之一。

4、轉(zhuan)化(hua)率(lv)的計算：轉(zhuan)化(hua)率(lv)＝產生菌落(luo)的總數/鋪板DNA總量。

5、為防止轉(zhuan)化(hua)實驗不成功，可以(yi)(yi)保留部分連接(jie)產物(wu)，以(yi)(yi)重(zhong)新轉(zhuan)化(hua)，將損失(shi)降到低。