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Solarbio DH5α感受態細胞

本公司生產的DH5α感受態細胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝制備得到，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達108，-70℃保存3-5個月轉化(hua)效率不發生(sheng)改變。

基因型: supE44△lacU169（φ80 lacZ△M15）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1

特   點: 一種用于鋪制與培養質粒平(ping)板(ban)和粘粒平(ping)板(ban)的(de)重組(zu)缺(que)陷的(de)抑制型菌株。其φ80 lacZ△M15基因的(de)產物可(ke)與pUC載體編碼(ma)的(de) β-半乳糖苷酶氨(an)基端實(shi)現β互補(bu)，可(ke)用于藍白斑篩選。

操作方法：（以下(xia)操作均按無菌條(tiao)件的標(biao)準進行）

1、將感(gan)受態細(xi)胞(bao)置于冰上融化，以下實驗以100ul感(gan)受態細(xi)胞(bao)為(wei)例(li)。

2、向感(gan)受(shou)態細(xi)胞懸液中加入(ru)需轉(zhuan)化的(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)DNA，注意目的(de)(de)(de)(de)DNA的(de)(de)(de)(de)體積不要超過感(gan)受(shou)態細(xi)胞懸液體積的(de)(de)(de)(de)十(shi)分之一，輕(qing)輕(qing)旋轉(zhuan)離心(xin)管以混(hun)勻(yun)內(nei)容物，冰浴放置30分鐘(zhong)。

3、將(jiang)離心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速(su)轉(zhuan)移到(dao)冰(bing)浴中放置2-3分鐘，注意不(bu)要搖(yao)動(dong)離心管。

4、向離心管中加(jia)入(ru)500ul無(wu)菌(jun)無(wu)抗的SOC或LB培養基(ji)，37℃ 180rpm振蕩培養1小時。目的是使(shi)質(zhi)粒上相關的抗性標記基(ji)因表達，使(shi)菌(jun)體復蘇(su)。

5、取(qu)適量(liang)已轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)化(hua)(hua)(hua)的感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞涂(tu)(tu)(tu)布(bu)含相應抗生素(su)的SOC或LB平板，37℃倒置(zhi)培(pei)養(yang)12-16小(xiao)時。涂(tu)(tu)(tu)布(bu)用(yong)量(liang)可(ke)根據具體(ti)實驗來調(diao)整，如(ru)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)化(hua)(hua)(hua)的DNA總量(liang)較多，可(ke)取(qu)100ul左右的轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)化(hua)(hua)(hua)產物涂(tu)(tu)(tu)板；反之，如(ru)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)化(hua)(hua)(hua)的DNA總量(liang)較少，可(ke)取(qu)200-300ul的轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)化(hua)(hua)(hua)產物涂(tu)(tu)(tu)板。過(guo)(guo)多菌液可(ke)以抑(yi)制(zhi)細(xi)菌生長(chang)。如(ru)果(guo)預計的克(ke)隆較少，可(ke)通過(guo)(guo)離心后(hou)吸(xi)除部分培(pei)養(yang)液，懸(xuan)浮菌體(ti)后(hou)將其涂(tu)(tu)(tu)布(bu)于一個平板中。涂(tu)(tu)(tu)布(bu)剩(sheng)余的菌液可(ke)4℃保存，如(ru)果(guo)次日(ri)的轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)化(hua)(hua)(hua)菌落數過(guo)(guo)少，可(ke)以將剩(sheng)下(xia)的菌液再涂(tu)(tu)(tu)布(bu)新(xin)的平板。

注意事項：

      1、感受態(tai)細胞(bao)應保存在-70℃，不可反復凍(dong)融，否(fou)則(ze)其轉化效(xiao)率將(jiang)會降低。

      2、實驗過程中應嚴格無(wu)菌(jun)操作(zuo)，防止(zhi)其它(ta)DNA或雜菌(jun)的污染(ran)，避免為以后的篩(shai)選、鑒定帶來影響。

      3、轉(zhuan)化(hua)(hua)時，轉(zhuan)化(hua)(hua)效率與(yu)外源DNA的(de)(de)濃(nong)度在(zai)一(yi)定范(fan)圍(wei)內成正比，但當加入的(de)(de)外源DNA量(liang)過多或(huo)體(ti)(ti)積過大反(fan)而會降低轉(zhuan)化(hua)(hua)效率。轉(zhuan)化(hua)(hua)時DNA體(ti)(ti)積要小于感受態細胞體(ti)(ti)積的(de)(de)十分之一(yi)。

 ;    4、轉(zhuan)化(hua)率的計算(suan)：轉(zhuan)化(hua)率＝產生菌落的總(zong)數(shu)/鋪板DNA總(zong)量。

     5、為防止(zhi)轉化實(shi)驗不成(cheng)功，可(ke)以保留(liu)部分連接產物，以重新轉化，將損失降到低。

相關文獻：

《Production of l-alanyl-l-glutamine by immobilized Pichia pastoris GS115 expressing α-amino acid ester acyltransferase》 作者:Yi-Min Li, Jiao-Qi Gao, Xu-Ze Pei, Cong Du, Chao Fan, Wen-Jie Yuan and Feng-Wu Bai 期刊:Microbial Cell Factories 影響因子:4.402 PMID:30711013

Solarbio DH5α感受態細胞