產品名稱:通用RT-PCR試劑盒(he)(M-MLV)
產品型號:RP1100
產品特點:通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)適用于各種(zhong) RNA制品的(de)反(fan)(fan)(fan)轉錄(lu)反(fan)(fan)(fan)應(ying)以(yi)及隨后的(de)PCR擴增。它采用M-MLV進行反(fan)(fan)(fan)轉錄(lu)反(fan)(fan)(fan)應(ying),能夠獲(huo)得較長的(de)反(fan)(fan)(fan)轉錄(lu)產物(wu)。同(tong)時(shi),在(zai)20ul反(fan)(fan)(fan)轉錄(lu)體系(xi)和50ul PCR反(fan)(fan)(fan)應(ying)體系(xi)中(zhong),還可以(yi)一次性得到足夠量的(de)PCR產物(wu)用于后續的(de)克隆實驗(yan)
免費咨詢:010-50973159
通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)產品簡介
莫洛尼鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MLV RT)是一種RNA依賴的DNA聚合酶,能使mRNA(>5kb)轉錄為cDNA。M-MLV RT的RNase H活性相對于禽成髓細胞瘤病毒反轉錄酶較弱,更適合用來反轉錄較長的mRNA。M-MLV RT應用于以RNA為模板合成cDNA的*條鏈。
注意:M-MLV RT的延伸性要低于AMV 反轉錄酶,因此要得到和用AMV 反轉錄酶一樣產量的cDNA需加入更多單位的M-MLV反轉錄酶。
通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)使用方法
1)使用方法簡介以用2mg總RNA為例。在無RNase離心管中,加入0.5mg引物含總RNA的樣品中,總體積不大于15ml。70℃,5分鐘(zhong)打開模(mo)板鏈(lian)形成的二級(ji)結構(gou)。立即(ji)放于冰上降溫(wen)防止(zhi)二級(ji)結構(gou)恢復,隨后短暫離心(xin)(xin)使液體集中(zhong)在離心(xin)(xin)管底。
2)加入以下成分到已退火后的引物-模板混合物中。
注意:不要改(gai)變(bian)引物的加入(ru)比(bi)率(lv)。
M-MLV 5×Reaction Buffer 5ml
dATP,10mM 1.25ml
dCTP,10mM 1.25ml
dGTP,10mM 1.25ml
dTTP,10mM 1.25ml
Recombinant RNasin Ribonuclease Inhibitor 25 units
M-MLV RT 200 units
無核酸水后體積 25ml
3)輕輕混勻離心管,如果使用隨機引物在37℃孵育60分鐘,其他引物則42℃孵育。延伸溫度在37~42℃之間佳。
4)M-MLV RT 用于合成cDNA的(de)*鏈(lian)。往后的(de)合(he)成則(ze)需要(yao)根據需要(yao)自行設計(ji)引物(wu)再次合(he)成。
通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)Buffer組成
M-MLV RT 5×Reaction Buffer
250mM Tris-HCl(PH 8.3 室溫下)
375mM KCl
15mM MgCl2
50mM DTT
通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)來源
大腸桿菌表達純化
通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)保存條件
-20℃保(bao)存。避免(mian)經常凍融。
相關同類產品: |