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For research use only. Not for use in diagnostic procedures.

MANUFACTURED AND DISTRIBUTED BY:

Country︱Company: China︱Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd

Address: NO.8, Liandong U Valley, Tongzhou District, Beijing, P.R.China.

TABLE OF CONTENTS SECTION

人白細胞介素2 ELISA試劑盒?

人白細胞介素-2 ELISA 試劑盒
產品編號：SEKH-0008
適用于人血清、血漿或細胞培養上清液等樣本

人白細胞介素2 ELISA試劑盒

背景介紹：
     白細(xi)(xi)胞(bao)介素(su) 2（IL-2）是一(yi)種(zhong)(zhong)在機體免(mian)疫應(ying)答(da)中(zhong)(zhong)扮演重中(zhong)(zhong)之重角色的多效(xiao)性細(xi)(xi)胞(bao)因子(zi)。其于 1976 年被 Morgan 在小(xiao)鼠脾(pi)細(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養上清(qing)中(zhong)(zhong)發現，由于它(ta)能很(hen)好地促進和維持(chi) T 細(xi)(xi)胞(bao)長期培(pei)(pei)養, 故(gu)將其稱(cheng)之為(wei)(wei)為(wei)(wei) T 細(xi)(xi)胞(bao)生長 因子(zi)，1979 年統(tong)一(yi)命名為(wei)(wei) IL-2。人 IL-2 含有 133 個氨基酸(suan)殘(can)基，分(fen)子(zi)量為(wei)(wei) 15.5kDa。IL-2 重要的作(zuo)用是 誘導(dao) T 淋巴細(xi)(xi)胞(bao)增殖(zhi)和分(fen)化，此外(wai)，IL-2 還(huan)可調節多種(zhong)(zhong)細(xi)(xi)胞(bao)的免(mian)疫應(ying)答(da)。在體內，IL-2 有抗腫瘤、抗微生 物(wu)感(gan)染、引起移植排斥和自身免(mian)疫以及(ji)免(mian)疫調節等作(zuo)用。

檢測原理：
      Solarbio  ELISA 試劑(ji)盒采用基于雙抗(kang)(kang)體(ti)夾心(xin)法(fa)的(de)酶(mei)聯(lian)免疫吸附檢測技(ji)術。將抗(kang)(kang)人(ren)(ren) IL-2 單克(ke) 隆抗(kang)(kang)體(ti)包被(bei)在酶(mei)標(biao)板(ban)(ban)(ban)上；分(fen)別(bie)加入梯度(du)稀(xi)釋的(de)標(biao)準品(pin)(pin)和(he)(he)預(yu)稀(xi)釋的(de)樣本(ben)(ben)，標(biao)準品(pin)(pin)和(he)(he)樣本(ben)(ben)中(zhong)(zhong)的(de)人(ren)(ren) IL-2 會與(yu)酶(mei)標(biao) 板(ban)(ban)(ban)上的(de)包被(bei)抗(kang)(kang)體(ti)充分(fen)結合(he)；洗(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)后加入生(sheng)物(wu)素化(hua)抗(kang)(kang)人(ren)(ren) IL-2 抗(kang)(kang)體(ti)，該抗(kang)(kang)體(ti)會與(yu)板(ban)(ban)(ban)子上包被(bei)抗(kang)(kang)體(ti)捕獲(huo)的(de)標(biao)準品(pin)(pin) 和(he)(he)樣本(ben)(ben)中(zhong)(zhong)的(de)人(ren)(ren) IL-2 發(fa)生(sheng)特(te)異性結合(he)；洗(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)后加入辣根過氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)（HRP）標(biao)記的(de)鏈霉親和(he)(he)素，生(sheng)物(wu)素與(yu)鏈 霉親和(he)(he)素會發(fa)生(sheng)高強(qiang)度(du)的(de)非(fei)共(gong)價結合(he)；洗(xi)(xi)板(ban)(ban)(ban)后加入顯(xian)色劑(ji)底物(wu) TMB，若反(fan)應(ying)孔中(zhong)(zhong)樣品(pin)(pin)存(cun)在不同(tong)濃(nong)度(du)的(de)人(ren)(ren) IL-2，則 HRP 會使無色 TMB 變(bian)成不同(tong)深淺(qian)（正(zheng)相關）的(de)藍色物(wu)質，加入終止液(ye)后反(fan)應(ying)孔會變(bian)成黃色；后， 在λmax=450 nm（OD=450 nm）處測定反(fan)應(ying)孔樣品(pin)(pin)吸光度(du)（OD），樣本(ben)(ben)中(zhong)(zhong)的(de)人(ren)(ren) IL-2 濃(nong)度(du)與(yu) OD 成正(zheng)比，通 過繪制標(biao)準曲線(xian)和(he)(he)四參數(shu)擬合(he)軟件(jian)便(bian)可計算出樣本(ben)(ben)中(zhong)(zhong)人(ren)(ren) IL-2 的(de)濃(nong)度(du)。

原理圖：

注意事項：
1. 試劑盒應在有效期內使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應保存在 2-8℃冰箱，已復溶但未用完的標準品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測，且加入試劑的順序應保持*。
5. 為避免(mian)交(jiao)叉污染，請在試驗中使用 1 次(ci)性試管(guan)，槍頭，封(feng)板膜（※）及潔凈塑料容器。

6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結果(guo)準確，每次(ci)檢測均需做標(biao)準曲線(xian)。

安全提示：
試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護；在操作過程中也要避免試
劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸，請用大量清水清洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時，請按國家生物
實驗室(shi)安(an)全防(fang)護有關管(guan)理規定執行。

自備實驗器材（不提供，可代購）
1． 酶標儀（主波長 450nm，參考波長 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板機或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 雙蒸水，去離子水，量筒等
6． 稀釋(shi)用聚丙烯試管(guan)

樣本收集及儲存：
1. 細胞培養上清：
將細胞培養基移無菌離心管，在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管于-20℃下保存（24 小時內檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復凍融。
2. 血清樣本：
室溫血液自然凝固 20 min 后，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于
-20℃下保存（24 小時內檢測可放入 2-8℃儲存），保存過程中如有沉淀，請再次離心，避免反復凍融。
3. 血漿樣本：
將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據標本的實際要求選擇 EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合 20 min ，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24小時內檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復凍融。
※注意：血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本，以免影響檢測結果；如果樣本中的靶標物檢測濃度高
于標準品(pin)(pin)的值，請將(jiang)樣品(pin)(pin)做適當倍數稀(xi)(xi)釋(shi)后檢(jian)測，建議正式(shi)實驗前做預實驗以確定稀(xi)(xi)釋(shi)倍數。

試劑準備：
1. 試劑回溫：先在實驗前 30 min 將試劑盒，待測樣本放置于室溫下，濃縮洗滌液如出現結晶，請放入
37℃溫浴直到結晶全部溶解。
2. 配制洗滌液：預先計算好稀釋后的洗滌液使用體積，然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應用液，未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存。
3. 標(biao)準(zhun)(zhun)品梯度(du)稀釋(shi)：加入標(biao)準(zhun)(zhun)品/樣本稀釋(shi)液（SR1）1ml凍干標(biao)準(zhun)(zhun)品中，靜置15分鐘待其(qi)*溶解(jie)后輕 輕混勻(濃度(du)為1000pg/ml)，然后按(an)照以下濃度(du)：250、125、62.5、31.25、15.62、7.81、3.9 pg/ml進行(xing)稀 釋(shi)。復溶過(guo)的標(biao)準(zhun)(zhun)品原液（1000pg/ml）未用(yong)完的應廢棄或(huo)根據需要按(an)照一次用(yong)量(liang)分裝(zhuang)，并將(jiang)其(qi)貯存在-20～ -80℃冰箱，具體(ti)如下圖。

4. 生物素化抗體工作液：預先計算好(hao)試驗所需用(yong)(yong)量，用(yong)(yong)檢測稀釋(shi)液（SR2）將100倍抗體濃縮液稀釋(shi)成1倍

應(ying)用工作液(ye)（稀釋前充分混勻），請在30分鐘內加入到反應(ying)孔中(zhong)。

5. 酶(mei)結(jie)合物(wu)工作液：按每次試驗(yan)所需(xu)用(yong)量配制，用(yong)酶(mei)結(jie)合物(wu)稀釋(shi)液（SR3）將100倍濃縮酶(mei)結(jie)合物(wu)稀釋(shi)成1 倍應用(yong)工作液（稀釋(shi)前離心），請在30分鐘內(nei)使用(yong)。

6. 洗滌方(fang)法(fa)： 

自動洗(xi)(xi)板(ban)(ban)：甩盡酶標板(ban)(ban)孔中液體，在厚(hou)迭(die)吸水紙上拍干，注入洗(xi)(xi)滌(di)液為 300ul/孔,注 與吸出間隔為 30 秒(miao)，洗(xi)(xi)板(ban)(ban) 5 次。 

手工洗(xi)(xi)板：甩(shuai)(shuai)盡(jin)酶標(biao)板孔中液(ye)(ye)體，在厚迭(die)吸水(shui)紙上拍(pai)干，用洗(xi)(xi)瓶加入洗(xi)(xi)滌液(ye)(ye) 300ul/孔，靜止 30 秒(miao)后甩(shuai)(shuai) 凈酶標(biao)板孔中液(ye)(ye)體，在厚迭(die)的吸水(shui)紙上拍(pai)干，洗(xi)(xi)板 5 次。

結果判斷：

1.用酶標儀 450 nm 波長(chang)測(ce)(ce)定(ding)(ding) OD 值(zhi)。選擇雙波長(chang)檢測(ce)(ce)，參(can)考波長(chang)為 630 nm。如不能(neng)進行(xing)雙波長(chang)檢測(ce)(ce)，請 用 450 nm 的 OD 測(ce)(ce)定(ding)(ding)值(zhi)減去 630 nm 的 OD 測(ce)(ce)定(ding)(ding)值(zhi)。

2.計算標準(zhun)品(pin)、樣品(pin)的(de)平(ping)均 OD 值：每個標準(zhun)品(pin)和標本的(de) OD 值應減去零孔的(de) OD 值

3.以標(biao)準品濃(nong)度為橫坐(zuo)標(biao)，吸(xi)光(guang)度OD值為縱(zong)坐(zuo)標(biao)，用軟(ruan)件繪制(zhi)標(biao)準曲線，樣品中(zhong)IL-2含量可通過對應OD 值由標(biao)準曲線換算出相應的濃(nong)度。

4.若標(biao)本 OD 值高(gao)于標(biao)準曲線上限，應(ying)做適當稀釋后重新檢測，計算濃度時再乘以稀釋倍數。

1. 數據及標準曲線

本圖僅供參考，應以當次試驗標準品繪制的標準曲線計算人 IL-2 的樣本含量

 

2. 靈敏度：
低可檢測人 IL-2 濃度達 2pg/ml，
20 個(ge)(ge)零標準(zhun)品(pin)濃度 OD 的平均值(zhi)加(jia)上兩個(ge)(ge)標準(zhun)差(cha)，計(ji)算相(xiang)應的可(ke)檢(jian)測(ce)濃度。

3. 特異性：

不與人 IL-2、4、6、8、10 反(fan)應，小鼠 IL-2、4、6、8 等反(fan)應。

4. 重復性：
板(ban)內(nei)，板(ban)間(jian)變異系數<10%。

5. 回收率：
在選(xuan)取的健康(kang)人(ren)血漿(jiang)、細(xi)胞培養上(shang)清中加入(ru) 3 個不同(tong)濃度水平的人(ren) IL-2，計(ji)算回收率。

6. 線性稀釋：

分別(bie)在選取(qu)的 4 份健(jian)康(kang)人血(xue)漿和細胞(bao)培養上清中(zhong)加入高濃度人 IL-2，在標準曲線動力學(xue)范圍內(nei)進行稀 釋(shi)，評估線性。