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Hoechst 33258染色液（即用型）：Hoechst 33258，也稱bisBenzimide H 33258或HOE 33258，是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低。Hoechst 33258染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst 33258也常用于普通的細胞核染色，或常規的DNA染色。Hoechst 33258的大激發波長為346nm，大發射波長為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結合后，大激發波長為352nm，大發射波長為461nm。本Hoechst 33258染色液可直接用于固定細胞或組織的細胞核染色，也可直接用于活細胞或組織的細胞核染色。
Hoechst 33258染色液（即用型）使用說明：

1. 對于固定的(de)細胞或(huo)組織：

a. 對于細(xi)胞或(huo)組織(zhi)樣品，固定后(hou)，適當(dang)洗(xi)滌去(qu)除(chu)固定劑(ji)。隨后(hou)如果需要(yao)進行免(mian)疫熒(ying)光(guang)染(ran)色，則行免(mian)疫熒(ying)光(guang)染(ran)色，染(ran)色完畢后(hou)再按后(hou)續(xu)步驟進行Hoechst 33258染(ran)色(se)。如果(guo)不需要進行其它染(ran)色(se)，則(ze)直接進行后續的(de)Hoechst 33258染色。

b. 對(dui)于貼壁細(xi)胞或組織切(qie)片(pian)，加入少(shao)量Hoechst 33258染(ran)色液，覆蓋(gai)住樣(yang)品(pin)即可；對于懸浮細胞，少加入待染色樣品體積3倍的染色液(ye)，混勻。室(shi)溫放置(zhi)3-5分鐘。

c. 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次(ci)，每(mei)次(ci)3-5分鐘。

d. 直(zhi)接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細(xi)(xi)胞發生(sheng)凋(diao)亡(wang)時，會(hui)看(kan)到(dao)凋(diao)亡(wang)細(xi)(xi)胞的(de)細(xi)(xi)胞核(he)呈致密濃(nong)染(ran)，或呈碎塊狀致密濃(nong)染(ran)。

2. 對于(yu)活細(xi)胞或組織：

a. 加入(ru)適(shi)當量Hoechst 33258染色液(ye)，必須充(chong)分覆(fu)蓋(gai)住待染色的樣品，通常(chang)對于(yu)六孔板一個孔需(xu)加入1ml染色液，對(dui)于(yu)96孔(kong)板一個(ge)孔(kong)需加入100微升染(ran)色液。

b. 在(zai)適宜于(yu)細胞培養的溫度下培養20-30分鐘。棄染色液，用(yong)PBS或(huo)培養液洗滌2-3次即可進行熒(ying)光檢測。

相(xiang)關文獻：

《Protective effect of 17β-estradiol on hydrogen peroxide induced apoptosis of rat nucleus pulposus cells》 作者:Sheng-Hua Ning, Si-Dong Yang, Xu Zhang, Huan-Liu, Hai-Kun Wei, Hai-Ying Wang, Da-Long Yang, Wen-Yuan Ding 期刊:CLINICAL 影響因子:0.848 PMID:
《Protein kinase Cα inhibits myocardin-induced cardiomyocyte hypertrophy through the promotion of myocardin phosphorylation》 作者:Weizong Li,  Nan Wang,  Man Li,  Huiqin Gong,  Xinghua Liao, Xiaolong Yang , Tongcun Zhang 期刊:Acta Biochimica et Biophysica Sinica 影響因子:1.807 PMID:26206583