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細(xi)胞(bao)培(pei)養試(shi)劑人或各種動物外周血及臟(zang)器組(zu)織中性粒細(xi)胞(bao)分離液
規格：200ml/kit
保存：室溫避光儲存，有效期少 2 年。

產品簡介：
    本品為帶有乳光或微乳光的滅菌水溶液。主要成分是Ficoll 400與泛影酸葡甲胺。適用于從人或各種動物血液及臟器組織中分離中性粒細胞，在醫療和醫學生物學研究中廣泛應用。
其他人及動物多種比重細胞分離液。注：因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數及細胞帶電不同，所以用戶在定制分離液時應提供所需分離液的比重、動物的種屬及被分離細胞的名稱。
一、  分離方法說明及圖例
     A． 取1ml新鮮抗凝血，與全血及組織稀釋液1:1 混勻后小心加于1份本分離液之液面上；
或取 1ml 組織單細胞懸液（具體制備方法詳見二、組織單細胞懸液的制備）小心加于1份本分離液之液面上；
     B. 以500g（約1800轉/分）離心25分鐘(半徑15cm水平轉子)。
此時離心管中由上下細胞分為四層。*層；為血漿層。第二層；為環狀乳白色單個核細胞層。第三層；為略帶渾濁的分離液層（富集一定量的中性粒細胞）。第四層；為紅細胞層。棄去*層血漿層及第二層細胞，收集第三層分離液層和第四層紅細胞層，放入含細胞洗滌液10ml的試管中，充分混勻后，以500g（約1800轉/分）離心30分鐘，沉淀經1次洗滌后用紅細胞裂解液裂解紅細胞，再經3次洗滌去除紅細胞內溶物和碎片后取沉淀細胞即為所需中性粒細胞。
     注：A. 細胞提取率約 80%。
         B. 紅細胞裂解過程參考“紅細胞裂解液使用說明” 。

二、組織單細胞懸液的制備
     注：A.本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法，酶消化法由于各實驗室選取的消化酶種類各不相同，請各實驗室自行選擇進行試驗。
     B. 全過程及所需試劑要求無菌環境 全過程及所需試劑要求無菌環境。
剪碎法：將組織塊放入平皿后，加入少量組織勻漿液及20%胎牛血清；用眼科剪將組織剪勻漿狀，加入5ml組織勻漿液及20%胎牛血清；用吸管吸取組織勻漿，用100目不銹鋼濾網過濾到試管內；離心沉淀1500轉/分×3 min，再用細胞洗滌液清洗3次，每次以500rpm短時低速離心除去細胞碎片，以200目不銹鋼濾網過濾去細胞團塊。作細胞計數并調整細胞濃度為（2～5）×10 7 個/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為2×108-1×10 9 個/ml的單細胞懸液備用。
      勻漿器法：用眼科剪將組織剪成小塊；放入70ml組織研磨器內，加入2ml組織勻漿液及20%胎牛血清；緩慢轉動研棒，研磨勻漿；用5ml組織勻漿液及20%胎牛血清沖洗研器；收集細胞懸液，經200目不銹鋼濾網過濾；離心沉淀800rpm×2min ，再用細胞洗滌液洗3次，離心沉淀。作細胞計數并調整細胞濃度為（2～5）×10 7 個/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個/ml的單細胞懸液備用。

細胞計數方法:
    細胞計數法是用來計數細胞懸液中細胞數量的一種方法。一般利用計數板（血球計數板）進行。既可用于分離（散）細胞培養接種前計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，也可用于對培養物的細胞數量進行計數。不論計數的對象如何，均須制備分散的細胞懸液。

計數與計算過程
    1）、在細胞計數板中央放置計數的蓋玻片。
    2）、用玻璃虹吸管吸取細胞，讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數板凹蹧處流出懸液，蓋玻片被液體充滿為止。
    3）、置顯微鏡下計數四角大方格內的細胞總數。對于壓線的細胞只計數在上線和左線者，對于細胞團按單個細胞計數。
    4）、按下式計數細胞懸液的密度： 細胞密度＝（4個大格細胞總數/4）×10 4 個/ml×稀釋倍數公式中乘以10 4 因為計數板中每一個大格的體積為：
      1.0mm（長）×;1.0mm（寬）×0.1mm（高）＝0.1mm 3 而 1ml＝1000mm 3
 

細胞計數要點：
    A． 進行細胞計數時，要求懸液中細胞數目不低于10 4 個/ml，如果細胞數目很少要進行離心再懸浮于少量培養液中；顯微鏡下計數時，遇到2個以上細胞組成的細胞團，應按單個細胞計算。如果細胞團>10％，說明細胞分散不充分; 或細胞數<200個/10mm 2 或>500個/10 mm 2 時，說明稀釋不當，需重新制備細胞懸液。
    B． 要求細胞懸液中的細胞分散良好，否則影響計數準確性。
    C． 取樣計數前，應充分混勻細胞懸液，尤其是多次取樣計數時更要注意每次取樣都要混勻，以求計數準確；
    D． 數細胞的原則是只數完整的細胞，若細胞聚集成團時，只按照一個細胞計算。如果細胞壓在格線上時，則只計上線，不計下線，只計左線，不計右線。
    E． 操作時，注意蓋玻片下不能有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中，否則要重新計數。
 

三、  注意事項
    A． 本分離液是敏光型的，在運輸和貯藏過程中應在18℃-25℃避光保存，啟封后置4℃保存避免微生物污染。另外，本品為真空包裝，未啟封前置于10℃ 以下易出現白色結晶，影響分離效果。
    B． 待分離的樣本要求新鮮，避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時分離效果好，且所有操作過程一定要在無菌條件下進行。
    C． 由于各品牌離心機的性能不同，國內南北地區溫度環境和四季的差異，可能影響分離效果，用戶可以調節離心轉數，調節離心的時間，摸索的分離條件（具體分離條件各實驗室自定）。
    D． 好使用無靜電反應的離心管，推薦使用未經過堿處理的玻璃離心管。
    E． 優抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素。應注意在血液稀釋過程中應去除抗凝劑體積 。
 

四、產品性能指標

pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內毒素 ≤0.5EU/ml
無菌 直接接種培養14 天后培養基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每50ml 溶液中含10μm 以上的不溶性微粒20 粒以下，
含25μm 以上的不溶性微粒5 粒以下

五、貯藏及保存期限
    18℃-25℃避光保存，有效期兩年。啟封后置4℃保存，有效期一周。
    注：若保證無微生物污染，啟封后可置4℃長期保存。但應注意保存溫度較低時本分離液易
出現白色結晶，影響分離效果。

細(xi)胞培養試劑人(ren)或(huo)各種(zhong)動物外周(zhou)血及臟器組織中性粒細(xi)胞分(fen)離液訂(ding)購說明(ming)：

1、絕大部分產品備有現貨，一般情況下都能訂貨當日發貨。 
2、部分非常用產品，需提前1－2日預訂，海外期貨則需要提前3-6周預訂。 
3、部分產品價格會因貨期、批次等因素發生變化，若有變動以訂貨當日新價格為準。 
4、每日訂單截止時間為16點整，部分城市可到17點整，因超過截止時間造成當日不能發貨的將于次日安排發貨。
5、請辦理完貨款后，將收據、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運(yun)輸說明：

1、極低溫產品：極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產品：低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
3、常溫產品：常溫產品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產品由公司庫房人員快速配貨，準確快速高效的快遞保證產品快速送達您的手中。