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魚全血單核細胞分離液試劑盒
貨號：P5330
規格：2×200ml/KIT
保存 ：室溫避光儲存，有效期少 2 年(nian)。

魚全血單核細胞分離液試劑盒

本品用于(yu)分離魚全血單核細(xi)胞。

本品易感染細菌，需無(wu)菌條件操作(zuo)。無(wu)菌條件下操作(zuo)，啟封后置常溫保(bao)存。如 4℃保(bao)存，本分(fen)離液易出現白色結晶(jing)，影(ying)響分(fen)離效(xiao)果。

操作步驟：

1. 取新鮮抗凝(ning)全(quan)血(xue)（EDTA、枸櫞酸鈉(na)或肝素抗凝(ning)均(jun)可）或者去(qu)纖維(wei)蛋白血(xue)液(ye)，用等(deng)體積(ji)的全(quan)血(xue)及組織稀釋液(ye)或者PBS稀釋全(quan)血(xue)。

2. 在(zai)離(li)(li)(li)(li)心(xin)管中加(jia)入(ru)適量分(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)液(ye)(ye)（當(dang)稀(xi)釋(shi)后血液(ye)(ye)體(ti)積(ji)(ji)小(xiao)于(yu)3mL時，加(jia)入(ru)3mL分(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)液(ye)(ye)；大于(yu)等于(yu)3mL，加(jia)入(ru)等體(ti)積(ji)(ji)分(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)液(ye)(ye)。但二(er)者的(de)總體(ti)積(ji)(ji)不(bu)能超過(guo)離(li)(li)(li)(li)心(xin)管的(de)三分(fen)(fen)(fen)之二(er)，否(fou)則會(hui)影響分(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)效果），將稀(xi)釋(shi)后的(de)血液(ye)(ye)平鋪到(dao)分(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)液(ye)(ye)液(ye)(ye)面(mian)上(shang)方，注意保持兩液(ye)(ye)面(mian)界面(mian)清晰(xi)。（可以使用巴(ba)氏(shi)德(de)吸(xi)管吸(xi)取血液(ye)(ye)，然后將血液(ye)(ye)小(xiao)心(xin)的(de)平鋪于(yu)分(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)(li)液(ye)(ye)上(shang)，因為(wei)兩者的(de)密度(du)差異(yi)，將形(xing)成(cheng)明(ming)顯的(de)分(fen)(fen)(fen)層界面(mian)。如果樣品(pin)較多加(jia)樣時間較長，在(zai)離(li)(li)(li)(li)心(xin)之前出現(xian)紅細胞(bao)成(cheng)團下沉屬正常現(xian)象。）

3. 室溫，水平轉子500~1000g，離(li)(li)(li)心20~30min（血(xue)液的(de)體積(ji)越(yue)大所(suo)需的(de)離(li)(li)(li)心力越(yue)大，離(li)(li)(li)心時間越(yue)長，分(fen)離(li)(li)(li)條件需摸索，離(li)(li)(li)心轉速不超過1200g）。

4. 離心(xin)后將(jiang)出現明顯的(de)(de)分(fen)層(ceng)：上(shang)層(ceng)是(shi)(shi)稀釋的(de)(de)血漿層(ceng)，中間(jian)是(shi)(shi)透明的(de)(de)分(fen)離液(ye)層(ceng)，血漿與(yu)分(fen)離液(ye)之間(jian)的(de)(de)白膜層(ceng)即為單(dan)個核細(xi)胞層(ceng)，離心(xin)管底部是(shi)(shi)紅細(xi)胞與(yu)粒細(xi)胞。

5. 小心的吸取白(bai)膜層(ceng)細(xi)胞到15mL潔凈的離(li)心管(guan)中， 10mL PBS或細(xi)胞洗滌液(ye)洗滌白(bai)膜層(ceng)細(xi)胞。250g，離(li)心10min。

6. 棄(qi)上清，5mL的(de)PBS或細胞清洗液(ye)重(zhong)懸(xuan)細胞，250g，離(li)心10min。分(fen)離(li)前 分(fen)離(li)后水平離(li)心 血漿層單個(ge)核細胞層紅細胞層分(fen)離(li)液(ye)層

7. 重復步驟6

8. 棄上清(qing)，細胞重懸備用。

注意事項：

A. 開(kai)封前(qian)顛倒混勻，本分離(li)液為(wei)(wei)無(wu)菌產品，為(wei)(wei)延長分離(li)液保(bao)存時間，請在無(wu)菌條件(jian)下啟封，避免微生物污染。

B. 分離(li)液使用時應始(shi)終(zhong)保持室(shi)溫(wen)（18℃~25℃），如室(shi)內溫(wen)度較低，可將分離(li)液預(yu)熱。4℃或者是溫(wen)度較低的條件下離(li)心(xin)，可能會(hui)導致(zhi)白膜層中紅細(xi)胞(bao)污染加(jia)重。

C. 血(xue)液(ye)樣本為新鮮抗(kang)凝血(xue)（采血(xue)2 h以內），為保持單個核細胞的(de)活性，應(ying)避免冷凍(dong)和冷藏。

D. 稀釋血液(ye)(ye)或(huo)洗滌(di)細(xi)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液(ye)(ye)及(ji)培(pei)養液(ye)(ye)，其成分會導致血細(xi)胞凝集(ji)，大大降低細(xi)胞得率及(ji)純度。

E. 部分塑料制(zhi)品(pin)（如聚苯乙烯）因其(qi)帶有(you)的靜電作用，可能會(hui)導致細(xi)胞掛壁影響分離效果(guo)。

F. 血液樣本(ben)的粘稠度(du)或者是溫度(du)差異(yi)，可能(neng)會影響分(fen)離效果，可以調節離心轉數和離心時間，摸(mo)索jia的分(fen)離條件(jian)。

G. 吸取(qu)過多的(de)單個(ge)核(he)細胞(bao)層(ceng)及分離液(ye)層(ceng)會(hui)導致分離液(ye)交界處的(de)粒細胞(bao)被吸出從而使混(hun)雜的(de)粒細胞(bao)數量增加；吸取(qu)過多的(de)血漿層(ceng)可(ke)能(neng)會(hui)導致單個(ge)核(he)細胞(bao)中血漿蛋白(bai)及血小板(ban)污染。

H. 如果(guo)要進(jin)一步對分離的細胞進(jin)行(xing)培養(yang)，那(nei)在收集血液(ye)和分離過程中(zhong)，注(zhu)意無菌操作，避(bi)免微生(sheng)物污染。

I. 不(bu)同(tong)動物血液在不(bu)同(tong)比(bi)重分(fen)離(li)液中的(de)(de)細(xi)胞(bao)離(li)散系數及(ji)細(xi)胞(bao)帶電不(bu)同(tong)，用(yong)戶在制定分(fen)離(li)液時應提(ti)供所(suo)需分(fen)離(li)液的(de)(de)比(bi)重、動物種(zhong)屬及(ji)被分(fen)離(li)細(xi)胞(bao)的(de)(de)名稱。