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瓊脂糖凝膠親和層析介質 rProtein A

核酸電泳是進行核酸研究的重要手段，是核酸探針、核酸擴增和序列分析等技術所*的組成部分。核酸電泳通常在瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠中進行，濃度不同的瓊脂糖和聚丙烯酰胺可形成分子篩網孔大小不同的凝膠，可用于分離不同分子量的核酸片段。以下中間介紹的是瓊脂糖核酸電泳操作步驟。

瓊脂糖凝膠親和層析介質 rProtein A

    瓊脂糖核酸電泳操作步驟 

    1.用蒸(zheng)餾水將制膠(jiao)(jiao)模具(ju)和梳子沖洗干凈，放在制膠(jiao)(jiao)平板上(shang)，封閉(bi)模具(ju)邊緣(yuan)，架好梳子；

    2.根(gen)據欲分離DNA片段大小用凝膠緩(huan)沖(chong)液(ye)配(pei)制適宜濃度的(de)瓊脂糖(tang)凝膠：準(zhun)確稱量(liang)瓊脂糖(tang)干粉(fen)，加入(ru)到配(pei)膠用的(de)三角燒瓶(ping)內，定(ding)量(liang)加入(ru)電泳緩(huan)沖(chong)液(ye)（一(yi)般20~30?ml）；

    3.放(fang)入(ru)到微波爐內加熱(re)熔(rong)化。冷卻片(pian)刻，加入(ru)一(yi)滴熒光染料，輕輕旋轉(zhuan)以充(chong)分(fen)混勻凝(ning)膠溶液，倒入(ru)電泳槽中，待(dai)其凝(ning)固；

    4.室溫下30~45分鐘后凝(ning)膠(jiao)*凝(ning)結，小心拔出梳(shu)子，將(jiang)凝(ning)膠(jiao)安放在(zai)電泳槽內；

    5.向電(dian)泳槽(cao)中倒入電(dian)泳緩沖液，其量以沒過(guo)膠面1mm為宜(yi)，如樣品孔內有氣(qi)泡，應設(she)法除去；

    6.在DNA樣品(pin)中加(jia)(jia)入10×體積的載(zai)樣緩(huan)(huan)沖液（loading?buffer），混勻(yun)后，用(yong)槍將樣品(pin)混合液緩(huan)(huan)慢加(jia)(jia)入被浸沒的凝膠加(jia)(jia)樣孔內；

    7.接通電(dian)源，紅色為正極(ji)，黑色為負極(ji)，切記DNA樣(yang)品由負極(ji)往正極(ji)泳動(靠近加樣(yang)孔的一(yi)端為負)。一(yi)般60～100V電(dian)壓，電(dian)泳20～40min即可；

    8.根據指示劑泳動的位置，判斷是否終(zhong)止電泳；

    9.電泳(yong)完畢，關上(shang)(shang)電源，在凝膠成像儀上(shang)(shang)觀察電泳(yong)帶及其位置(zhi)，并(bing)與(yu)核酸分子量標準Marker比較被擴增產物(wu)的大小(xiao)。

    瓊脂糖凝膠分離DNA片度大小范圍較廣,瓊脂糖核酸電泳操作步驟中要注意的是，不同濃度瓊脂糖凝膠可分離長度從200bp近50kb的DNA片段。瓊脂糖通常用水平裝置在強度和方向恒定的電場下電泳。