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過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒說明(ming)書（分光光度(du)法）

貨號：BC0090

規格(ge)：50管/48樣

產(chan)品(pin)簡介：

POD廣泛(fan)存在(zai)于動(dong)物、植(zhi)物、微生(sheng)物和(he)培(pei)養細胞中，可催化過(guo)氧化氫(qing)氧化酚(fen)類(lei)和(he)胺(an)(an)類(lei)化合(he)物，具有消除(chu)過(guo)氧化氫(qing)和(he)酚(fen)類(lei)、胺(an)(an)類(lei)毒性的雙重作用。

試驗中所(suo)需的儀器(qi)和試劑：

可(ke)見分光光度計、臺(tai)式離心機、可(ke)調式移液器(qi)、1mL玻(bo)璃比色皿(min)、研(yan)缽、冰(bing)和蒸餾水

過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒產品(pin)內容：

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一(yi)：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體(ti)×2瓶，4℃保存；用(yong)時每(mei)瓶加入5mL試劑(ji)一，現(xian)配(pei)現(xian)用(yong)；

試劑(ji)三(san)：液體(ti)10mL×1瓶(ping)，4℃保存。

操(cao)作步驟：

一、粗酶液提(ti)取：   

1、細(xi)菌、細(xi)胞或組織樣(yang)品的制(zhi)備   

收集細菌(jun)或細胞到離(li)心管內，離(li)心后棄(qi)上清；按照每500萬細(xi)菌或(huo)細(xi)胞加入1ml提取液，超(chao)聲波(bo)破(po)碎細(xi)菌或細(xi)胞(bao)（功率200w，超(chao)聲3秒(miao)，間隔10秒(miao)。重復30次）；8000g 4℃離(li)心10分鐘(zhong)，取上(shang)清，置冰上(shang)待測。

稱(cheng)取(qu)(qu)約0.1g組織，加入1mL提取(qu)(qu)液進(jin)行(xing)冰浴(yu)勻(yun)漿。8000g 4℃離(li)心10分鐘，取上清，置冰上待測(ce)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

二、POD測定(ding)操作表 

測(ce)定前將試(shi)劑(ji)一、二和三 37℃（哺乳動物）或(huo)25℃（其他(ta)物種）放置10min。在1mL玻璃比色(se)皿中按順序加入上述試(shi)劑(ji)，加入樣本后立即混勻并(bing)計時，記錄470nm下30s時的(de)吸光值A1和1min30s后的吸(xi)光值A2。計算ΔA=A2-A1

注意：如果ΔA小于0.005，可(ke)將反應(ying)時(shi)間延長到5min。如果(guo)ΔA大于0.5，可將樣本(ben)提取液(ye)稀釋后測定，計(ji)算公式(shi)中(zhong)乘(cheng)以(yi)相(xiang)應(ying)的稀釋倍數

POD活性計(ji)算(suan)：   

1、血(xue)清（漿）POD活力的計算(suan):

單位的定義：每mL血清（漿）在反應體系(xi)中每(mei)分鐘使(shi)A470變化0.01定義(yi)為一(yi)個酶(mei)活力單位。

POD（U/L）＝反應總體(ti)(ti)積(ji)（1070ul）÷樣本體(ti)(ti)積(ji)（15ul）÷0.01×ΔA=7133×ΔA

2、組織POD活(huo)力計算：

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定(ding)義：每mg組織蛋白(bai)在反應(ying)體系中(zhong)每分鐘(zhong)使A470變(bian)化0.01定義為(wei)一個酶活力單位。

POD（U/mg prot）＝反應總體(ti)積（1070ul）÷樣本(ben)體(ti)積（15ul）÷0.01×ΔA÷樣本蛋白濃度(mg/ml)=7133×ΔA÷樣本蛋白濃度(du)(mg/ml)

（2）按樣本鮮重(zhong)計算：

單位(wei)的定義：每g組織(zhi)在反應體系中每分鐘使A470變(bian)化0.01定(ding)義為一個酶活力單位。

POD（U/g mass）＝反(fan)應總體(ti)積（1070ul）÷樣本(ben)體(ti)積（15ul）÷0.01×ΔA÷樣本質(zhi)量=7133×ΔA÷樣本質量

3、按細菌(jun)或細胞密度(du)計(ji)算：

單位的定義：每1萬個(ge)細菌或(huo)細胞在反應體系中每分鐘使A470變(bian)化0.01定(ding)義為一個酶活力(li)單位。

POD（U/10⁴ cell）＝反應總體(ti)積(ji)（1070ul）÷樣本(ben)體(ti)積(ji)（15ul）÷0.01×ΔA÷500（10⁴ cell /mL）=14.27×ΔA