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M1070 D2000 plus DNA Ladder

M1070 D2000 plus DNA Ladder是(shi)由(you)單獨制備的PCR產(chan)物(wu)混合(he)而(er)成，共(gong)有9條(tiao)(tiao)DNA段(duan)，已加入上(shang)樣(yang)緩沖(chong)液，可以直接(jie)電(dian)泳，每次上(shang)樣(yang)5μl。為便于電(dian)泳后觀察，特(te)異性(xing)加強750bp條(tiao)(tiao)帶(dai)，其濃度(du)約(yue)為100ng/5μl，其它條(tiao)(tiao)帶(dai)的DNA濃度(du)約(yue)為50ng/5μl。

參(can)考片段(bp)：100、250、500、750、1000、1500、2000、3000、5000

質粒是細(xi)胞內的(de)一種環(huan)狀的(de)小分子DNA，是DNA重(zhong)(zhong)組(zu)的(de)常用(yong)載(zai)體(ti)，在(zai)DNA重(zhong)(zhong)組(zu)中，質粒或經(jing)過改造(zao)后的(de)質粒載(zai)體(ti)可通過連接外源基(ji)因構成重(zhong)(zhong)組(zu)體(ti)。在(zai)質粒提取過(guo)程中，多(duo)數質(zhi)粒(li)粗(cu)提取(qu)物中含有三種構型的質(zhi)粒(li)：共價閉合環(huan)狀DNA（cccDNA）、質(zhi)粒(li)的兩(liang)條(tiao)鏈(lian)沒有斷裂(lie)、超(chao)螺旋開環(huan)DNA（ocDNA）、質(zhi)粒(li)的一條(tiao)鏈(lian)斷裂(lie)、松弛的環(huan)狀分(fen)子線(xian)形DNA（lDNA）：質(zhi)粒(li)的兩(liang)條(tiao)鏈(lian)均斷裂(lie)；線(xian)性分(fen)子質(zhi)粒(li)DNA的分(fen)子構型。

質粒小量提取的方法

1.將(jiang)3~5ml菌液13,000rpm離心30秒收集沉淀（菌體）。 如果用(yong)1.5ml或2ml離心管(guan)則需反復(fu)離心2～3次。

2.倒掉上(shang)清，將(jiang)沉(chen)淀（菌體）*懸(xuan)(xuan)浮于(yu)100μl懸(xuan)(xuan) 浮液（溶(rong)液I）中。上(shang)清要盡可能去(qu)除干凈(jing)，可用濾紙(zhi)吸干。沉(chen)淀要 用混旋(xuan)器*懸(xuan)(xuan)浮，否則(ze)將(jiang)直(zhi)接導(dao)致下一步的裂(lie) 解不*，進而影響質粒DNA的產量和純度。

3.加入150μl裂解(jie)液（溶液II），輕柔地(di)顛倒(dao)混勻10 次左(zuo)右，溶液逐(zhu)漸(jian)變得粘稠、清亮(liang)。不可用混旋器劇烈(lie)振(zhen)蕩(dang)，否則會使質粒(li)DNA斷裂； 裂解(jie)時(shi)間不宜超過5分鐘，否則會造成染色(se)體DNA 的(de)污染及(ji)質粒(li)DNA的(de)產(chan)率降低。