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T1320 胰蛋白酶-EDTA消化液

在組織細胞的體外培養和原代細胞培養中的組織細胞分散（將組織塊制備成單個細胞懸液）和傳代細胞培養中，貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶，EDTA，其功能主要是使細胞間的蛋白質水解，使組織或細胞分散成單個細胞，制成細胞懸液用于進一步的實驗。
胰蛋白酶（Trypsin）簡稱胰酶，是由動物豬胰臟中提取的一種蛋白酶制劑。胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健，除去細胞間粘蛋白及糖蛋白，影響細胞骨架，打開細胞-細胞，細胞-基質之間的連接從而使細胞從培養板上脫落下來并使細胞分散成單個細胞。胰蛋白酶液濃度越高，作用越強，但超過一定限度會損傷細胞。細胞消化用胰蛋白酶常用的工作濃度為0.25％，pH為7.2-7.4之間，用濾器過濾除菌。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。注意EDTA不能被血清中和，使用后培養瓶要*清洗，否則再培養時細胞容易脫壁。
胰蛋白酶液消化時間：2-10分鐘。用含血清培養液終止其對細胞的消化作用。
使用說明：1、貼壁細胞的消化：貼壁細胞在培養瓶中長成致密單層后，繼續生長的空間不足，培養基中的營養成份也消耗較多，同時代謝廢物也有較多堆積，需要分瓶培養，擴增、傳代。對于懸浮生長細胞和貼壁不太緊的細胞如SP2/0，293等，可直接吹散后分瓶；而對于貼壁較緊的細胞如Hela，HepG2，CHO等，則需要以細胞消化液消化后，才能脫落和分散，擴瓶。一般操作過程為（以下操作均必須嚴格按無菌操作的要求進行）：
   （1）將長成致密單層細胞的細胞瓶中原來的培養液棄去； 
   （2）加入0.25％胰酶溶液，視細胞瓶的大小加入體積為0.5ml或更多（依培養器皿的大小而定），以使充分浸潤； 
   （3）一般消化時間約為13分鐘，肉眼觀察瓶底由半透明（細胞單層連接成片）轉為點狀透明（出現細小空隙）時，棄去細胞消化液，并加入適量的*培養液終止消化，吹打分散；  
   （4）視實驗目的分入多瓶繼續培養，一般比例為一傳二到一傳四的。 
2、組織的消化：不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

注意事項：1．由于組織或細胞性質不同，實驗人員應依據具體情況，確定佳消化時間；消化細胞時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁和生長狀況；
2、分裝胰蛋白酶-EDTA消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染；
3、胰蛋白酶-EDTA消化液建議-20℃保存，切忌反復凍融，
4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套進行試驗操作。

相關文(wen)獻：

《Dexmedetomidine attenuates the neurotoxicity of propofol toward primary hippocampal neurons in vitro via Erk1/2/CREB/BDNF signaling pathways》 作者(zhe):Youbing Tu,Yubing Liang,Yong Xiao,Jing Lv,Ruicong Guan,Fei Xiao,Yubo Xie,and Qiang Xiao 期刊:Drug Design, Development and Therapy 影響因(yin)子:3.486 PMID:30858699

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