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人外周血淋巴細胞分離液（FICOLL配制）產品簡介：
本產品是一種用于分(fen)(fen)離(li)人(ren)外周(zhou)血(xue)淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)無菌、低(di)內毒素(su)水(shui)平的(de)密(mi)度(du)(du)(du)梯度(du)(du)(du)分(fen)(fen)離(li)液。其分(fen)(fen)離(li)原理是根(gen)據血(xue)細(xi) 胞(bao)(bao)(bao)的(de)密(mi)度(du)(du)(du)差異（紅細(xi)胞(bao)(bao)(bao)和粒細(xi)胞(bao)(bao)(bao)密(mi)度(du)(du)(du)為1.090g/mL左右；淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)和單(dan)核細(xi)胞(bao)(bao)(bao)密(mi)度(du)(du)(du)為1.075~1.090g/mL；血(xue)小(xiao)板為 1.030~1.035g/mL），通過(guo)離(li)心使一定密(mi)度(du)(du)(du)的(de)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)按相(xiang)應密(mi)度(du)(du)(du)梯度(du)(du)(du)分(fen)(fen)布(bu)，從而將淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)從人(ren)外周(zhou)血(xue)或臍帶血(xue)中(zhong)分(fen)(fen) 離(li)出來(lai)。

產品指標： 密度 1.077±0.001g/mL 滲透壓 290~350mOsm/kgH2O 無菌 0.1μm 濾(lv)膜過濾(lv)

人外周血淋巴細胞分離液（FICOLL配制）保存條件：
本產品對光(guang)敏感，應該室溫避光(guang)儲存，保(bao)質期 2 年(nian)。無菌開封后，保(bao)存于室溫。

操作步驟：

1. 取新鮮抗凝全(quan)血（EDTA、枸櫞酸鈉或(huo)肝素抗凝均可）或(huo)者去纖維蛋(dan)白血液，用等體(ti)積的全(quan)血及組(zu)織稀釋液 或(huo)者PBS稀釋全(quan)血。

2. 在(zai)離(li)(li)(li)心管(guan)中加入(ru)適量分(fen)離(li)(li)(li)液(ye)(ye)(ye)(ye)（當稀(xi)釋后(hou)血(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)體積小于(yu)(yu)(yu)3mL時，加入(ru)3mL分(fen)離(li)(li)(li)液(ye)(ye)(ye)(ye)；大于(yu)(yu)(yu)等(deng)于(yu)(yu)(yu)3mL，加入(ru)等(deng)體積 分(fen)離(li)(li)(li)液(ye)(ye)(ye)(ye)。但二(er)者(zhe)(zhe)的(de)總體積不能(neng)超過離(li)(li)(li)心管(guan)的(de)三分(fen)之二(er)，否(fou)則會影響分(fen)離(li)(li)(li)效(xiao)果），將稀(xi)釋后(hou)的(de)血(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)平鋪(pu)(pu)到分(fen)離(li)(li)(li) 液(ye)(ye)(ye)(ye)液(ye)(ye)(ye)(ye)面上方，注意保持(chi)兩(liang)液(ye)(ye)(ye)(ye)面界面清晰。（可以(yi)使用巴氏德(de)吸管(guan)吸取血(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)，然后(hou)將血(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)小心的(de)平鋪(pu)(pu)于(yu)(yu)(yu)分(fen)離(li)(li)(li)液(ye)(ye)(ye)(ye) 上，因為兩(liang)者(zhe)(zhe)的(de)密(mi)度差異，將形成(cheng)明顯的(de)分(fen)層界面。如果樣品較多加樣時間較長，在(zai)離(li)(li)(li)心之前出(chu)現(xian)紅(hong)細胞成(cheng) 團(tuan)下沉屬正常現(xian)象(xiang)。）

3. 室溫(wen)，水平轉子500~1000g，離心20~30min （血液的(de)(de)體積(ji)越(yue)大(da)所需的(de)(de)離心力越(yue)大(da)，離心 時間越(yue)長，佳的(de)(de)分離條件需摸索，離心轉 速大(da)不超過1200g）。

4. 離心后將出(chu)現明顯的分層(ceng)(ceng)：上層(ceng)(ceng)是稀(xi)釋(shi)的 血(xue)漿(jiang)層(ceng)(ceng)，中間(jian)是透明的分離液(ye)層(ceng)(ceng)，血(xue)漿(jiang)與分 離液(ye)之間(jian)的白膜層(ceng)(ceng)即為淋巴細(xi)胞層(ceng)(ceng)，離心管 底(di)部是紅細(xi)胞與粒細(xi)胞。

5. 小心的(de)吸取白(bai)膜層(ceng)細(xi)胞(bao)到15mL潔凈的(de)離心 管中， 10mL PBS或細(xi)胞(bao)洗(xi)滌液洗(xi)滌白(bai)膜層(ceng) 細(xi)胞(bao)。250g，離心10min。

6. 棄上(shang)清，5mL的PBS或(huo)細(xi)胞清洗液重懸細(xi)胞，250g，離心10min。

7. 重復步驟6

8. 棄上清，細胞重懸備用。

參考文獻：
《E2F1 mediates the downregulation of POLD1 in replicative senescence》 作者:Shichao Gao,Qiao Song,Jing Liu,Xiaomin Zhang,Xunming Ji,Peichang Wang 期刊:Cellular and Molecular Life Sciences 影響因(yin)子:7.014 PMID:30895337