一、 分(fen)離方法說明(ming)及圖例(li)
A.取1ml新(xin)鮮抗凝血(xue),與全血(xue)及組織(zhi)稀釋(shi)液(ye)1:1 混勻后(hou)小(xiao)心(xin)加于1份本分離液(ye)之液(ye)面上;
B. 以500g(約1800轉/分(fen))離(li)心25分(fen)鐘(半徑15cm水平轉子)。
此時離心管中由上下細(xi)胞(bao)分四(si)層(ceng)(ceng)。*層(ceng)(ceng);為血漿(jiang)層(ceng)(ceng)。第(di)二層(ceng)(ceng);為環狀乳(ru)白(bai)色(se)的(de)白(bai)細(xi)胞(bao)層(ceng)(ceng)。第(di)三層(ceng)(ceng);為
略(lve)帶混濁(zhuo)的分離(li)液(ye)層(富集一定(ding)量(liang)的白細(xi)胞(bao))。第四層;為紅(hong)細(xi)胞(bao)層。棄去*層血(xue)漿層,收集第二層細(xi)
胞(bao)、第三層(ceng)(ceng)分離(li)液(ye)層(ceng)(ceng)和第四層(ceng)(ceng)紅細胞(bao)層(ceng)(ceng),放入含細胞(bao)洗滌液(ye)10ml的試管中,充分混(hun)勻后,以500g約(yue)(1800
轉/分)離心30分鐘。沉(chen)淀經(jing)1次洗(xi)滌(di)后用紅細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)(jie)液裂(lie)解(jie)(jie)紅細(xi)胞(bao),再經(jing)3次洗(xi)滌(di)去除紅細(xi)胞(bao)內溶(rong)物和碎(sui)片
后取沉(chen)淀細(xi)胞(bao)(bao)即為(wei)所需白細(xi)胞(bao)(bao)
注: 提取率(lv)約為80%。
二(er)、 注意事(shi)項
A. 本分離液是敏光型的,在(zai)運輸(shu)和貯藏過程(cheng)中(zhong)應在(zai)18℃-25℃避光保(bao)存(cun),啟封后置4℃保(bao)存(cun)避免微生(sheng)物污(wu)染(ran)。另外,本品為真空包(bao)裝,未啟封前置于10℃ 以下易出現(xian)白色結(jie)晶(jing),影響分離效果。
B. 待分(fen)(fen)離的樣本(ben)要求(qiu)新鮮,避(bi)免冷(leng)凍和(he)冷(leng)藏(zang)。分(fen)(fen)離液和(he)所分(fen)(fen)離樣本(ben)一定在20℃水浴箱中復(fu)溫20 分(fen)(fen)鐘保證分(fen)(fen)離液和所(suo)分(fen)(fen)離樣本溫度在20℃±2℃時分(fen)(fen)離效果好,且所(suo)有操作過(guo)程(cheng)一定要在無菌條件下進行。
C. 由于(yu)各品牌離心機的性能不同(tong),國內南北地區(qu)溫度環境和四季的差異,可能影響(xiang)分(fen)離效果,用戶可以(yi)調節(jie)離心轉(zhuan)數,調節(jie)離心的時間,摸(mo)索佳的分離條(tiao)件(jian)(具體分離條(tiao)件(jian)各實(shi)驗室自定)。
D. 好使(shi)用無(wu)靜(jing)電反應(ying)的(de)(de)離心(xin)管,推薦(jian)使(shi)用未經過堿處理的(de)(de)玻(bo)璃離心(xin)管。
E. 優抗(kang)凝劑(ji)選(xuan)擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。應注(zhu)意(yi)在血液(ye)稀釋(shi)過程中(zhong)應去除抗(kang)凝劑(ji)體積。
三、產(chan)品性能指標
pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內(nei)毒(du)素 ≤0.5EU/ml
無菌 直接接種培養(yang)14 天(tian)后培養(yang)基澄清(qing)
澄明(ming)度及(ji)不溶性顆粒物(wu) 每50ml 溶液中含10μm 以上(shang)的不溶性微粒20 粒以下(xia),
含25μm 以(yi)(yi)上(shang)的不溶性微粒5 粒以(yi)(yi)下(xia)