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谷氨酰胺酶(GLS)活性檢測試劑盒

一(yi)、粗酶液提取：細(xi)(xi)菌(jun)或培養細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)：先收集細(xi)(xi)菌(jun)或細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)到離(li)心管內(nei)，離(li)心后棄上(shang)清(qing)；按(an)照(zhao)細(xi)(xi)菌(jun)或細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)數量（10 4 個(ge)）：試(shi)劑一(yi)體積(ji)（mL）為500~1000：1 的比例(li)(li)（建(jian)議500 萬細(xi)(xi)菌(jun)或細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)加入1mL 試(shi)劑一(yi)），超聲波(bo)破碎細(xi)(xi)菌(jun)或細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔(ge)10s，重復30 次）；8000g 4℃離(li)心10min，取上(shang)清(qing)，置(zhi)冰上(shang)待(dai)(dai)測。組(zu)織(zhi)(zhi)(zhi)：按(an)照(zhao)組(zu)織(zhi)(zhi)(zhi)質量（g）：試(shi)劑一(yi)體積(ji)(mL)為1：5~10 的比例(li)(li)（建(jian)議稱取約0.1g 組(zu)織(zhi)(zhi)(zhi)，加入 1mL 試(shi)劑一(yi)），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離(li)心10min，取上(shang)清(qing)，置(zhi)冰上(shang)待(dai)(dai)測。

二、測定步驟：

1、 分光(guang)(guang)光(guang)(guang)度計預熱(re)30min 以上，調節(jie)波長420nm，蒸餾水調零。

2、 樣(yang)品測(ce)定（在 EP 中(zhong)加入下列(lie)試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)）：試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)名稱（uL） 測(ce)定管(guan)(guan) 對照(zhao)管(guan)(guan)樣(yang)本(ben) 25 蒸餾(liu)水(shui) 25 試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)一(yi) 100 100 試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)二 400 400 混(hun)勻，37℃水(shui)浴1 小時試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)三 525 525 混(hun)勻，8000 g，25℃離(li)心(xin)10 min；取上清液，在EP 管(guan)(guan)中(zhong)加入下列(lie)試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)上清液 650 650 試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)四 150 150 試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)五 100 100 試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)六 100 100 混(hun)勻，420nm 處讀取吸光值 A，計算ΔA=A 測(ce)定管(guan)(guan)-A 對照(zhao)管(guan)(guan)。對照(zhao)管(guan)(guan)只要做一(yi)管(guan)(guan)

三、計算：

1、 血清（漿）GLS 活(huo)性單位定(ding)(ding)義(yi)：每mL 血清（漿）每小時催(cui)化谷氨(an)酰胺生成1μmol 氨(an)定(ding)(ding)義(yi)為一個酶活(huo)力(li)單位。 GLS（μmol /min/mL）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷T=363.1×(ΔA-0.1301)

2、 組織、細菌或細胞GLS 活性

（1） 按樣本蛋白(bai)濃度計算：單位(wei)定義(yi)(yi)：每(mei)mg 蛋白(bai)質(zhi)每(mei)小時催化谷(gu)氨(an)酰胺生成1μmol 氨(an)定義(yi)(yi)為(wei)一個酶活(huo)力單位(wei)。 GLS（μmol /min /mg prot）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷Cpr÷T=363.1×(ΔA-0.1301)÷Cpr。

（2） 按樣本鮮重(zhong)計算：單(dan)位定義(yi)：每(mei)g 組(zu)織每(mei)小時催(cui)化谷氨酰胺生(sheng)成(cheng)1μmol 氨定義(yi)為一(yi)個酶(mei)活力單(dan)位。 GLS（μmol /min /g 鮮重(zhong)）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷(W÷V 樣總) ÷T=363.1×(ΔA-0.1301)÷W。

（3） 按細(xi)菌(jun)或細(xi)胞密度計算單位定義：每1 萬(wan)個細(xi)菌(jun)或細(xi)胞每小時(shi)(shi)催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定義為一個酶活(huo)力單位。 GLS（μmol /min /10 4 cell）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷(500÷V 樣總(zong)(zong))÷T =0.7262×(ΔA -0.1301) V 樣總(zong)(zong)：加入提(ti)取液體積，1 mL；T：反應時(shi)(shi)間，1h；Cpr：樣本(ben)蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本(ben)質量，g；500：細(xi)菌(jun)或細(xi)胞總(zong)(zong)數，500 萬(wan)。

谷氨酰胺酶(GLS)活性檢測試劑盒

GLS（EC 3.5.1.2）存在于高(gao)等動物和(he)某些(xie)細菌以及植物根中，催化(hua)谷(gu)(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)水解成谷(gu)(gu)氨(an)酸(suan)和(he)氨(an)，在氮(dan)素代謝中具有重要調(diao)控(kong)作用，尤其是調(diao)節游離氨(an)含量和(he)尿素代謝。 GLS 催化(hua)谷(gu)(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)水解成L-谷(gu)(gu)氨(an)酸(suan)和(he)氨(an)，利用奈氏試劑(ji)檢測氨(an)增加(jia)的(de)速(su)率，即可計算(suan)其酶活性(xing)。

谷氨酰胺酶(GLS)活性檢測試劑盒

試(shi)劑(ji)(ji)一(yi)×1 瓶(ping)，60 mL，4 ℃保(bao)存(cun)(cun)；試(shi)劑(ji)(ji)二×1 瓶(ping)，20 mL，4 ℃保(bao)存(cun)(cun)；試(shi)劑(ji)(ji)三×1 瓶(ping)，30 mL，常溫保(bao)存(cun)(cun)；試(shi)劑(ji)(ji)四(si)×1 瓶(ping)，10 mL，常溫保(bao)存(cun)(cun)；試(shi)劑(ji)(ji)五(wu)×1 瓶(ping)，6 mL，常溫保(bao)存(cun)(cun)；試(shi)劑(ji)(ji)六×1瓶(ping)，6 mL，常溫避光保(bao)存(cun)(cun)。