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2,3,5氯化三苯基四氮唑 TTC

2,3,5-氯化三(san)苯基四氮唑，又稱(cheng)(cheng)四唑紅(hong)，簡(jian)稱(cheng)(cheng)TTC，TTZ，或(huo)(huo)(huo)TPTZ，一(yi)(yi)種(zhong)脂(zhi)溶(rong)性光敏(min)感復合(he)物(wu)(wu)，即可(ke)(ke)用來檢(jian)測(ce)(ce)種(zhong)子的(de)生(sheng)存能力，也(ye)可(ke)(ke)用來檢(jian)測(ce)(ce)哺(bu)乳動物(wu)(wu)組(zu)(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)的(de)缺血(xue)梗(geng)塞。檢(jian)測(ce)(ce)機制在于(yu)TTC本身可(ke)(ke)作(zuo)為一(yi)(yi)種(zhong)氧(yang)化還(huan)原指示劑，活(huo)細(xi)胞內的(de)脫(tuo)氫(qing)酶(mei)（尤其是線粒(li)體內的(de)琥珀酸脫(tuo)氫(qing)酶(mei)）可(ke)(ke)以將TTC還(huan)原為紅(hong)色(se)(se)(se)甲臢化合(he)物(wu)(wu)TPF（1,3,5-triphenylformazan）。對于(yu)種(zhong)子或(huo)(huo)(huo)者植物(wu)(wu)組(zu)(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)來說，染色(se)(se)(se)結果為活(huo)組(zu)(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)被(bei)染成不同程度的(de)紅(hong)色(se)(se)(se)，死組(zu)(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)或(huo)(huo)(huo)者無生(sheng)命力的(de)組(zu)(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)不著色(se)(se)(se)。對于(yu)缺血(xue)梗(geng)塞組(zu)(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)，因組(zu)(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)壞(huai)死脫(tuo)氫(qing)酶(mei)活(huo)力喪(sang)失呈現蒼白色(se)(se)(se)，而正常組(zu)(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)呈深紅(hong)色(se)(se)(se)。TTC常用的(de)染色(se)(se)(se)濃度為2%（w/v）(貨(huo)號：G3005)，也(ye)可(ke)(ke)根據組(zu)(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)類(lei)型做濃度的(de)適(shi)當(dang)調整。

染色方法

1.1  染色工(gong)作(zuo)液(ye)的配(pei)制

TTC通(tong)常用磷酸緩(huan)沖鹽溶(rong)液來配制，pH范圍為6.5-7.5之間，常用的(de)工作(zuo)濃度為2%，也可用1%或者更低的(de)濃度，根(gen)據(ju)自身實驗體系(xi)調整(zheng)。

可(ke)使用以下的緩沖(chong)鹽(yan)體(ti)系配制：

1）取9.078g KH2PO4（Mw：136.09）溶(rong)(rong)于1L去離子水內(nei)，制備成66.7mM KH2PO4儲存(cun)液(ye)；取9.472g Na2HPO4·H2O（Mw：137.99）溶(rong)(rong)于1L去離子水內(nei)，制備成68.6mM Na2HPO4儲存(cun)液(ye)；將兩(liang)份KH2PO4儲存(cun)液(ye)與1份Na2HPO4儲存(cun)液(ye)充分混合，即(ji)得到(dao)需要(yao)的(de)磷酸緩沖液(ye)溶(rong)(rong)液(ye)。

2）根據需(xu)要的(de)(de)TTC工(gong)作液(ye)濃(nong)度來制備，如加(jia)入2g TTC粉末(mo)到(dao)100ml混(hun)合的(de)(de)磷酸鹽緩沖液(ye)中，即得到(dao)2%的(de)(de)染色工(gong)作液(ye)。此(ci)時的(de)(de)溶液(ye)pH值(zhi)在6.5-7.5之間(jian)。此(ci)工(gong)作液(ye)可裝到(dao)不透明的(de)(de)白色瓶(ping)或者棕色瓶(ping)子內，4℃保存幾(ji)個月穩定。

【注意：TTC染色液的(de)緩沖體系(xi)可根據自己的(de)實(shi)驗習慣來調(diao)整；也可用去離(li)子水來溶解配置成10mg/ml的(de)儲存液，過濾除菌，建議(yi)此法染色液當天使用。】

1.2 染色方法（動(dong)物組織）

1）取(qu)新(xin)鮮組織(zhi)切片放到裝有TTC染色液的染色容器(qi)內，37℃避光孵育15-30min，邊(bian)孵育邊(bian)觀(guan)察顏色變化；【注(zhu)意：TTC染色液可重復使用(yong)2-3次，可將用(yong)過的TTC染色液放到新(xin)的容器(qi)內繼續使用(yong)。】

2）【可選】輕柔的(de)吸取緩沖(chong)液（如(ru)1×PBS）將組織表面多余(yu)的(de)染色(se)液沖(chong)洗(xi)掉(diao)；

3）此(ci)時即可觀察或者拍照。若需長(chang)久保(bao)存，用4%多聚甲醛(quan)溶液（貨號(hao)：P1110）固定10-20min。

注意事項

1）本品(pin)具(ju)有微量(liang)的(de)光和(he)熱敏感性，使用以及存放的(de)過程中避免(mian)長時間曝光或(huo)者(zhe)接觸到過高溫度下。

2）為了(le)您的(de)安全和健康(kang)，請穿實(shi)驗服并戴(dai)一次性手套(tao)操作。

參考文獻：
《Regulation of VDAC1 contributes to the cardioprotective effects of penehyclidine hydrochloride during myocardial ischemia/reperfusion》 作者:Duomao Lin,Boqun Cui,Jiayue Ren,Jun Ma 期刊:Experimental Cell Research 影響因子:3.309 PMID:29630893
《Luteoloside attenuates neuroinflammation in focal cerebral ischemia in rats via regulation of the PPARγ/Nrf2/NF-κB signaling pathway》 作者:Qiaoling Li,Zixia Tian,Minghui Wang,Jiejian Kou,Chunli Wang,Xuli Rong,Jing Li,Xinmei Xie,Xiaobin Pang 期刊:International Immunopharmacology 影響因子:3.361 PMID:30502652
《The IRE1 signaling pathway is involved in the protective effect of low-dose LPS on myocardial ischemia-reperfusion injury》 作者:Ting Wu,Nan Jiang,Zhenhua Ji,Guoyu Shi 期刊:Life Sciences 影響因子:3.448 PMID:31202841

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