單脫氫抗壞血酸還原酶活性檢測試劑盒

產(chan)品名(ming)稱：單脫氫抗(kang)壞血酸還原酶(mei)(MDHAR)活(huo)性檢測試劑(ji)盒(he) 微量法

產品英文名： Micro Monodehydroascorbate Reductase (MDHAR) Assay Kit

產(chan)品貨號(hao)：BC0655      ;      產(chan)地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓(lou)

產品(pin)規格：100管/96樣          產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或(huo)-20℃保存；            參考價格：1900
庫存狀態(tai)：現貨                          
關(guan)鍵字(zi)：單脫氫抗壞血酸(suan)還原酶|抗壞血酸(suan)還原酶|MDHAR活性檢測(ce)|試劑盒(he)|微量法

簡要(yao)介(jie)紹：
MDHAR 催化(hua) MDHA 還原(yuan)MDHA 生(sheng)成(cheng) AsA；在(zai)抗壞血(xue)酸氧化(hua)還原(yuan)代謝(xie)中具有(you)重要作用。MDHAR 催化(hua) NADH 還原(yuan)MDHA 生(sheng)成(cheng) AsA和NAD＋，NADH在(zai)340nm有(you)特征吸收峰，但NAD＋沒有(you)。通過測定340nm光吸收下降速率(lv)，來計算MDHAR活性。

產(chan)品(pin)詳細描述

商品貨號(hao)：	商(shang)品品牌(pai)：	規格	基(ji)本售價：	選擇規格
BC0655-100管(guan)/96樣	Solarbio	100管/96樣	1900.00元

產品內(nei)容： 
提取液：液體 110mL×1 瓶，4℃保存。
試劑(ji)一：液(ye)體 15mL×1 瓶，4℃保存。
試劑(ji)二：粉劑(ji)×1 瓶，4℃避光(guang)保存。臨(lin)用前(qian)加入 2 mL 蒸餾水充(chong)分溶解。
試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃避(bi)光保存。臨用前加入 2.5 mL 蒸(zheng)餾水充分(fen)溶解。
試(shi)劑四：液體×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前(qian)加 2mL 試(shi)劑一(yi)充分溶解(jie)。
產品說(shuo)明： 
MDHAR 催化(hua) MDHA 還原生成(cheng) AsA，在(zai)抗壞血(xue)酸氧(yang)化(hua)還原代謝中具有(you)重(zhong)要作用。 MDHAR 催化(hua) NADH 還原 MDHA 生成(cheng) AsA 和 NAD+，NADH 在(zai) 340 nm 有(you)特征(zheng)吸(xi)收峰，但 是 NAD+沒有(you)。通過測(ce)定 340 nm 光(guang)吸(xi)收下降(jiang)速(su)率，來(lai)計算出 MDHAR 活性。
實(shi)驗中所(suo)需儀器及(ji)設(she)備： 研缽、冰、臺式離(li)心機、紫外分(fen)光光度計/酶(mei)標儀、微量(liang)石英比色皿/96 孔 UV 板、可調式移液 槍和雙(shuang)蒸水(shui)

操作步驟: 
一、粗酶液(ye)提取：
1. 組(zu)(zu)織：按照組(zu)(zu)織質量（g）：提(ti)取(qu)(qu)液(ye)(ye)體積（mL）1：5-10 的比例（建議稱取(qu)(qu)約 0.1g 組(zu)(zu)織，加(jia)入(ru) 1mL 提(ti)取(qu)(qu)液(ye)(ye)進行(xing)冰(bing)浴(yu)勻漿。10000rpm，4℃離(li)心(xin) 10min，取(qu)(qu)上(shang)清(qing)置冰(bing)上(shang)待(dai)測。
2. 細(xi)菌、真菌：按照(zhao)細(xi)胞數量（10 4個）：提(ti)取液體積（mL）為 500-1000：1 的比例（建議 500 萬(wan) 細(xi)胞加入 1mL 提(ti)取液），冰浴超聲(sheng)超聲(sheng)破(po)碎細(xi)胞（功率(lv) 300w，超聲(sheng) 3s，間隔 7s，總(zong)時間 3min）； 然后 10000rpm，4℃，離心 10min，取上清置(zhi)于冰上待(dai)測。
二、MDHAR 測定操作：
1. 分(fen)光(guang)光(guang)度計預熱 30 min，調(diao)(diao)節波長到 340 nm，蒸餾水調(diao)(diao)零。
2. 試劑一(yi)在 25℃水浴鍋中(zhong)預熱 30 min。
3. 依次(ci)在石英比色皿(min)中加入下列(lie)試劑
 

 迅(xun)速混(hun)勻(yun)后于 340nm 比(bi)色，記錄(lu) 30s 和 150s 的吸(xi)光值。分(fen)別記為 A1、A2，ΔA=A1-A2，得到 △A 測定、△A 空白。

三、MDHAR 活(huo)性(xing)計算：
a.使(shi)用微量石英(ying)比色皿測定的計(ji)算公式(shi)如(ru)下 
（1）按蛋(dan)白濃度計算
MDHAR 活性單位(wei)定(ding)義：25℃中每(mei)毫(hao)克蛋(dan)白(bai)每(mei)分鐘氧化(hua) 1μmol NADH 為(wei) 1U。
MDHAR (U/mg prot) = [(△A 測定(ding)(ding)-△A 空(kong)白)÷(ε×d)×V 反總×10 6]÷（Cpr×V 樣(yang)）÷T =0.804×(△A 測定(ding)(ding)-△A 空(kong)白)÷Cpr
（2）按(an)樣本(ben)鮮(xian)重計算(suan)
MDHAR 活性單位定義：25℃中每(mei)克樣(yang)品(pin)每(mei)分鐘氧化 1μmol NADH 為 1U。
MDHAR (U/g 鮮(xian)重) =[(△A 測定(ding)-△A 空白)÷(ε×d)×V 反總×10 6]÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T =0.804×(△A 測定(ding)管(guan)(guan)-△A 空白管(guan)(guan)) ÷W
 (3)按細胞數量計算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每 10 4個細胞每分(fen)鐘氧化 1μmol NADH 為 1U。
MDHAR (U/10 4 cell) =[ (△A 測定管(guan)-△A 空白管(guan))÷ε÷d×V 反(fan)總(zong)(zong)×106]÷（細胞數(shu)量(liang)×V 樣÷V 樣總(zong)(zong)）÷T =0.804×(△A 測定管(guan)-△A 空白管(guan)) ÷細胞數(shu)量(liang) ε：NADH 摩爾消光系(xi)(xi)數(shu)，6220L/mol/cm；d：比色皿光徑(jing)，1cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V 反(fan) 總(zong)(zong)：反(fan)應體系(xi)(xi)總(zong)(zong)體積，0.2mL=2×10 -4L；V 樣：加(jia)入反(fan)應體系(xi)(xi)中上清(qing)(qing)液體積，20μL=0.02mL；V 樣總(zong)(zong)： 提取液體積，1 mL；Cpr：上清(qing)(qing)液蛋(dan)(dan)白濃(nong)度(du)，mg/mL，蛋(dan)(dan)白質(zhi)濃(nong)度(du)需要另外測定，建議使(shi)用(yong)本公(gong)司 蛋(dan)(dan)白質(zhi)含量(liang) BCA 試劑盒；W ：樣品質(zhi)量(liang)，g；T：反(fan)應時間，2min；細胞數(shu)量(liang)：萬個。

 b.使(shi)用(yong) 96 孔板測定(ding)的計算公(gong)式如下： 
（1）按(an)蛋白濃度計算(suan)
MDHAR 活性單(dan)位(wei)定義(yi)：25℃中每毫克蛋(dan)白每分鐘氧化 1μmol NADH 為 1U。
MDHAR (U/mg prot) = [(△A 測定(ding)(ding)-△A 空白)÷(ε×d)×V 反總×10 6]÷（Cpr×V 樣）÷T =1.340×(△A 測定(ding)(ding)-△A 空白) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
MDHAR 活性(xing)單位定義：25℃中每克樣品(pin)每分(fen)鐘氧(yang)化 1μmol NADH 為 1U。
MDHAR (U/g 鮮重)=[(△A 測定-△A 空白)÷(ε×d)×V 反總(zong)(zong)×10 6]÷(V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)(zong)×W)÷T =1.340×(△A 測定-△A 空白) ÷W
(3)按(an)細胞(bao)數量計算
MDHAR 活性單位(wei)定義：25℃中每(mei) 10 4個細胞每(mei)分鐘氧化 1μmol NADH 為 1U。
MDHAR (U/10 4 cell) =[ (△A 測定(ding)管(guan)(guan)-△A 空白(bai)管(guan)(guan))÷ε÷d×V 反總(zong)×106]÷（細(xi)胞數量×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)）÷T =1.340×(△A 測定(ding)管(guan)(guan)-△A 空白(bai)管(guan)(guan)) ÷細(xi)胞數量
ε：NADH 摩爾消光系數，6220 L/mol/cm；d：96 孔板光徑，0.6cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V 反總：反應體系總體積，0.2mL=2×10 -4L；V 樣：加入反應體系中上清液體積，20μL=0.02mL；V 樣 總：提取液體積，1 mL；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，蛋白質濃度需要另外測定，建議使用本 公司蛋白質含量 BCA 試劑盒；W ：樣品質量，g；T：反應時間，2min；細胞數量：萬個。

相關文獻：
《Exogenous 24-Epibrassinolide alleviates oxidative damage from copper stress in grape (Vitis vinifera L.) cuttings》 作者(zhe):Ya-li Zhou,Su-fang Huo,Li-ting Wang,Jiang-fei Meng,Zhen-wen Zhang,Zhu-mei Xi 期刊:Plant Physiology and Biochemistry 影響因(yin)子(zi):3.404 PMID:30099273

單脫氫抗壞血酸還原酶活性檢測試劑盒