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抗壞血酸(AsA)含量檢測試劑盒

測定意義：AsA又稱維生素C。AsA是輔酶、自由基清除劑、電子共體/受體和草酸鹽與酒石酸鹽生物合成的底物等。作為植物細胞中重要的抗氧化劑，AsA在保護葉綠體免于氧化損傷起著舉足輕重的作用，也是衡量農作物產品品質的重要指標之一。 
測定原理：抗壞血酸氧化酶（AAO）催化AsA氧化生成DHA，通過測定AsA的氧化速率，即可計算出AsA含量。 
自備儀器和用品：研缽、冰、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、1 mL石英比色皿、可調式移液器和蒸餾水。 

抗壞血酸(AsA)含量檢測試劑盒
操作步驟：
一、樣品中AsA提取：

按(an)照組織(zhi)質量（g）：試(shi)劑一(yi)體積(ji)(mL)為1：5~10的比例(li)（建(jian)議稱取約0.1g組織(zhi)，加入1mL試(shi)劑

一）進(jin)行冰浴勻漿，10000rpm 4℃離心(xin)20min，取(qu)上清液待(dai)測。

二、AsA測定(ding)操作： 
1.分光(guang)光(guang)度計預(yu)熱30 min，調節(jie)波長(chang)到265 nm，蒸(zheng)餾(liu)水調零。 
2.試劑二在25℃水(shui)浴鍋中預熱(re)30 min以上(shang)。 
3.標準管：依次在(zai)比色皿中加入100μL標準液(ye)、800μL試劑(ji)二和(he)100μL試劑(ji)三，迅速混勻(yun)，在(zai)265nm測定(ding)，記錄30s和(he)150s的(de)吸光值A1和(he)A2，△A標準管= A1-A2。 
4.測定管(guan)：依(yi)次在比色皿中(zhong)加入100μL上清液、800μL試(shi)劑二和100μL試(shi)劑三，迅速混勻，在265nm測定，記錄30s和150s的吸光(guang)值A3和A4，△A測定管(guan)= A3-A4。 
三、AsA含量計算: 
a.使用微量石英(ying)比色皿測定(ding)的(de)計算公式如下 
（1）按(an)蛋(dan)白(bai)濃度(du)計算 
AsA (μmol/mg prot) =[C標準(zhun)液×（△A測(ce)定管÷△A標準(zhun)管×V標準(zhun)）÷（Cpr ×V樣）
=0.1 ×△A測定管÷△A標(biao)準管÷Cpr 
（2）按樣本(ben)鮮重計算 
AsA (μmol/g ) =[C標準液×（△A測(ce)定管(guan)÷△A標準管(guan)×V標準）÷（W ×V樣÷V樣總）
=0.1 ×△A測定管÷△A標準管÷W 
 

相關文獻：

《Effect of 1α, 25-dihydroxyvitamin D3 on the osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cells and the underlying regulatory mechanism》 作者:Yawen Ji， Panpan Zhang， Yixiao Xing， Linglu Jia， Yunpeng Zhang， Tingting Jia， Xuan Wu， Bin Zhao， Xin Xu 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30365053
 

C標準液：100μmol/L；V 標準：標準液體(ti)，0.1mL；V樣總：上清液總體(ti)積，1.0 mL=1 ×10-3 L；

V 樣：加入(ru)反應體系中(zhong)上清液(ye)體積，0.1mL ；Cpr：上清液(ye)蛋白質濃度(du)，mg/mL；W：樣品質量（g）。