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琥珀酸脫氫酶（SDH）活性檢測試劑盒

操作步驟：

一、樣(yang)本的(de)前處理：組織、細(xi)菌或細(xi)胞中胞漿蛋白與線粒(li)體蛋白的(de)分離：

1、 稱(cheng)取約0.1g 組織(zhi)或(huo)收集(ji)500 萬(wan)細菌或(huo)細胞(bao)，加入1mL 試劑一和10uL 試劑三，用(yong)冰浴勻漿(jiang)器(qi)或(huo)研缽勻漿(jiang)。

2、 將勻漿600g，4℃離心5min。

3、 棄沉淀，將上清液(ye)移(yi)另一離(li)(li)心管中(zhong)，11000g，4℃離(li)(li)心10min。

4、 上(shang)清液(ye)即胞漿提取物，可用于測定(ding)從線(xian)粒體泄漏的SDH（此步可選做）。

5、 在步(bu)驟④的沉淀中加(jia)入200uL 試(shi)劑二(er)和(he)2uL 試(shi)劑三，超(chao)聲波破(po)碎(sui)（冰浴(yu)，功率20％或200W，超(chao)聲3 秒(miao)，間隔10 秒(miao)，重復(fu)30 次），用(yong)于(yu)線粒體SDH 活性測定(ding)。

二(er)、測定步(bu)驟(zou)和加樣表

1、 分光光度(du)計或酶標(biao)儀預(yu)熱(re)30min 以上(shang)，調(diao)節波長600nm，蒸餾(liu)水調(diao)零。

2、 樣(yang)本(ben)測定(ding)（1）在試(shi)劑(ji)四中(zhong)加入18mL 蒸餾水(shui)充分溶解，置于37℃（哺乳動物(wu)）或25℃（其它物(wu)種）水(shui)浴10min； 用(yong)不完的試(shi)劑(ji)4℃保(bao)存(cun)一周；（2）在試(shi)劑(ji)五(wu)中(zhong)加入1mL 蒸餾水(shui)，充分溶解待用(yong)；用(yong)不完的試(shi)劑(ji)4℃保(bao)存(cun)一周；（3）在微量石(shi)英比(bi)色皿或96 孔板(ban)中(zhong)加入10μL 樣(yang)本(ben)、10μL 試(shi)劑(ji)五(wu)和180μL 試(shi)劑(ji)四，混勻，立即記錄600nm 處(chu)20s 時的吸光值(zhi)A1 和 1min20s 后的吸光值(zhi)A2，計算ΔA=A1-A2。

琥珀酸脫氫酶(SDH)活性檢測試劑盒

a. 用微量(liang)石英(ying)比色皿(min)測(ce)定的計算公式(shi)如下

（1） 按樣本蛋白(bai)濃度計(ji)算單位的(de)定義：每mg 組(zu)織(zhi)蛋白(bai)每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯(lv)酚(fen)靛(dian)酚(fen)定義為(wei)一個酶(mei)活性單位。 SDH 活性（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=952×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本(ben)鮮重計算單位(wei)的定(ding)(ding)義：每g 組(zu)織每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚(fen)靛酚(fen)定(ding)(ding)義為一個酶活(huo)性單位(wei)。 SDH 活(huo)性（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×10 9]÷(W× V 樣÷V 樣總(zong)) ÷T=192×ΔA÷W

（3） 按細(xi)(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)(xi)胞(bao)密度計算單位的定(ding)義：每(mei)1 萬(wan)個(ge)細(xi)(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)(xi)胞(bao)每(mei)分(fen)鐘(zhong)消(xiao)耗1 nmol 2,6-二氯(lv)酚靛酚定(ding)義為一(yi)個(ge)酶活性單位。 SDH 活性（nmol/min/10 4 cell）＝[ΔA×V 反總(zong)(zong)÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)(zong))÷T=0.385×ΔA V 反總(zong)(zong)：反應體系(xi)總(zong)(zong)體積(ji)，2×10 -4 L；ε：2,6-二氯(lv)吲哚酚摩(mo)爾消(xiao)光系(xi)數，2.1×10 4 L / mol /cm；d：比(bi)色皿光徑，1cm；V 樣(yang)：加入樣(yang)本(ben)體積(ji)，0.01 mL；V 樣(yang)總(zong)(zong)：加入提取液體積(ji)，0.202 mL；T：反應時間，1 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白質濃度，mg/mL；W：樣(yang)本(ben)質量(liang)，g；500：細(xi)(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)(xi)胞(bao)總(zong)(zong)數，500 萬(wan)。

b. 用96 孔板測定的計算(suan)公(gong)式如下

（1） 按樣(yang)本蛋(dan)白濃(nong)度計(ji)算(suan)單(dan)位的定(ding)義：每mg 組織蛋(dan)白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定(ding)義為一個酶活性(xing)單(dan)位。 SDH 活性(xing)（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=1904×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本(ben)鮮重(zhong)計算單位的定義：每g 組織每分鐘消耗(hao)1 nmol 2,6-二(er)氯(lv)酚(fen)(fen)靛(dian)酚(fen)(fen)定義為一個(ge)酶活性單位。 SDH 活性（nmol/min/g 鮮重(zhong)）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=384×ΔA÷W

（3） 按細(xi)(xi)(xi)(xi)菌或細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)密度計算單位的定義：每(mei)1 萬個細(xi)(xi)(xi)(xi)菌或細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)每(mei)分鐘消(xiao)耗(hao)1 nmol 2,6-二氯酚(fen)(fen)靛(dian)酚(fen)(fen)定義為一個酶活性(xing)單位。 SDH 活性(xing)（nmol/min/10 4 cell）＝[ΔA×V 反(fan)總÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.77×ΔA V 反(fan)總：反(fan)應(ying)體(ti)(ti)(ti)(ti)系總體(ti)(ti)(ti)(ti)積，2×10 -4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚(fen)(fen)摩爾消(xiao)光系數(shu)，2.1×10 4 L / mol /cm；d： 96 孔(kong)板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體(ti)(ti)(ti)(ti)積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體(ti)(ti)(ti)(ti)積，0.202mL；T：反(fan)應(ying)時間，1 min；Cpr：樣本蛋白(bai)質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細(xi)(xi)(xi)(xi)菌或細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)總數(shu)，500 萬。

試劑(ji)一：100mL×1 瓶，-20℃保(bao)(bao)存；試劑(ji)二：20mL×1 瓶，-20℃保(bao)(bao)存；試劑(ji)三：1.5mL×1 支，-20℃保(bao)(bao)存；試劑(ji)四：粉(fen)劑(ji)×1 瓶，4℃保(bao)(bao)存；試劑(ji)五：粉(fen)劑(ji)×1 支，-20℃保(bao)(bao)存；

相關文獻： 

《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作(zuo)者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊(kan):Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448