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丙酮酸羧化酶（PC）檢測試劑盒

操作步驟：

一、 樣本的前處理組(zu)織、細菌(jun)或細胞(bao)(bao)中(zhong)胞(bao)(bao)漿(jiang)(jiang)蛋白與(yu)線(xian)(xian)粒(li)體(ti)(ti)蛋白的分離： 1、 稱(cheng)取(qu)約0.1g 組(zu)織或收集500 萬細菌(jun)或細胞(bao)(bao)，加(jia)入1mL 提(ti)取(qu)液(ye)，用冰浴勻漿(jiang)(jiang)器或研缽勻漿(jiang)(jiang)。 2、 將勻漿(jiang)(jiang)600g，4℃離心(xin)5min。 3、 棄沉(chen)淀，將上(shang)清液(ye)移另一離心(xin)管中(zhong)，11000g，4℃離心(xin)10min。 4、 上(shang)清液(ye)即胞(bao)(bao)漿(jiang)(jiang)提(ti)取(qu)物，可用于(yu)測定(ding)從線(xian)(xian)粒(li)體(ti)(ti)泄漏的PC（此(ci)步可選做）。 5、 在步驟④的沉(chen)淀中(zhong)加(jia)入1mL 提(ti)取(qu)液(ye)，超聲(sheng)波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲(sheng)3秒(miao)，間(jian)隔10 秒(miao)，重復30 次），用于(yu)線(xian)(xian)粒(li)體(ti)(ti)PC 活性測定(ding)。

二(er)、測(ce)定(ding)步驟(zou) 1、 分光(guang)光(guang)度計(ji)預熱30min 以上，調節(jie)波長340nm，蒸餾水調零。

2、 工作液的配(pei)制：臨用前將(jiang)試(shi)(shi)劑(ji)(ji)二和試(shi)(shi)劑(ji)(ji)三轉移到試(shi)(shi)劑(ji)(ji)一(yi)(yi)中混合溶解待(dai)(dai)用；置于37℃(哺乳(ru)動物) 或25℃(其它物種)預(yu)熱5 分鐘；用不(bu)完(wan)的試(shi)(shi)劑(ji)(ji)4℃保(bao)存一(yi)(yi)周；試(shi)(shi)劑(ji)(ji)四的配(pei)制：在試(shi)(shi)劑(ji)(ji)四瓶中加入(ru)2.5mL 蒸餾水充分溶解待(dai)(dai)用；用不(bu)完(wan)的試(shi)(shi)劑(ji)(ji)4℃保(bao)存一(yi)(yi)周；

3、 在1mL 石英比(bi)色皿中加入50μL 樣本(ben)、50μL 試劑四和900μL 工作液，立即混勻，記錄340nm 處初(chu)始吸光(guang)(guang)值A1 和 2min 后的吸光(guang)(guang)值A2，計算A=A1-A2。注意：在該試劑盒(he)中，若ΔA 大(da)于0.5，需將樣本(ben)用提取液稀釋(shi)適當倍數(shu)后測(ce)定，使ΔA 小于0.5 可提高檢測(ce)靈敏(min)度。計算公式(shi)中乘以相應稀釋(shi)倍數(shu)。

丙酮酸羧化酶（PC）檢測試劑盒

PC 活性計(ji)算(suan)：（1） 按(an)樣(yang)(yang)本蛋白(bai)濃度(du)計(ji)算(suan)單(dan)(dan)位定(ding)義：每mg 組織(zhi)蛋白(bai)每分(fen)鐘(zhong)消耗(hao)1nmol NADH 定(ding)義為一(yi)(yi)個酶活力單(dan)(dan)位。 PC（U/mg prot）＝[ΔA×V 反(fan)(fan)總(zong)(zong)÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣(yang)(yang)×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr （2） 按(an)樣(yang)(yang)本鮮重(zhong)計(ji)算(suan)單(dan)(dan)位定(ding)義：每g組織(zhi)每分(fen)鐘(zhong)消耗(hao)1 nmol NADH 定(ding)義為一(yi)(yi)個酶活力單(dan)(dan)位。 PC（U/g 鮮重(zhong)）＝[ΔA×V 反(fan)(fan)總(zong)(zong)÷（ε×d）×10 9]÷(W ×V 樣(yang)(yang)÷V 樣(yang)(yang)總(zong)(zong))÷T=1608×ΔA÷W （3） 按(an)細(xi)菌(jun)或細(xi)胞密度(du)計(ji)算(suan)：單(dan)(dan)位定(ding)義：每1 萬個細(xi)菌(jun)或細(xi)胞每分(fen)鐘(zhong)消耗(hao)1 nmol NADH 定(ding)義為一(yi)(yi)個酶活力單(dan)(dan)位。 PC（U/10 4 cell）＝[ΔA×V 反(fan)(fan)總(zong)(zong)÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 樣(yang)(yang)÷V 樣(yang)(yang)總(zong)(zong))÷T=3.215×ΔA V 反(fan)(fan)總(zong)(zong)：反(fan)(fan)應體(ti)系總(zong)(zong)體(ti)積(ji)，1×10 -3 L；ε：NADH 摩爾消光系數，6.22×10 3 L / mol /cm；d：比色皿(min)光徑，1cm；V 樣(yang)(yang)：加(jia)入樣(yang)(yang)本體(ti)積(ji)，0.05 mL；V 樣(yang)(yang)總(zong)(zong)：加(jia)入提取液體(ti)積(ji)，1 mL；T：反(fan)(fan)應時間(jian)，2 min； Cpr：樣(yang)(yang)本蛋白(bai)質濃度(du)，mg/mL；W：樣(yang)(yang)本質量，g；500：細(xi)菌(jun)或細(xi)胞總(zong)(zong)數，500 萬。

PC 活(huo)性計算(suan)：（1） 按樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)本蛋白(bai)濃度計算(suan)單(dan)位定(ding)義(yi)(yi)(yi)：每(mei)mg 組織蛋白(bai)每(mei)分鐘消(xiao)耗1nmol NADH 定(ding)義(yi)(yi)(yi)為一(yi)個(ge)酶活(huo)力單(dan)位。 PC（U/mg prot）＝[ΔA×V 反(fan)(fan)總(zong)(zong)÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr （2） 按樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)本鮮重計算(suan)單(dan)位定(ding)義(yi)(yi)(yi)：每(mei)g組織每(mei)分鐘消(xiao)耗1 nmol NADH 定(ding)義(yi)(yi)(yi)為一(yi)個(ge)酶活(huo)力單(dan)位。 PC（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反(fan)(fan)總(zong)(zong)÷（ε×d）×10 9]÷(W ×V 樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)÷V 樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)總(zong)(zong))÷T=1608×ΔA÷W （3） 按細菌(jun)或(huo)細胞密度計算(suan)：單(dan)位定(ding)義(yi)(yi)(yi)：每(mei)1 萬個(ge)細菌(jun)或(huo)細胞每(mei)分鐘消(xiao)耗1 nmol NADH 定(ding)義(yi)(yi)(yi)為一(yi)個(ge)酶活(huo)力單(dan)位。 PC（U/10 4 cell）＝[ΔA×V 反(fan)(fan)總(zong)(zong)÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)÷V 樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)總(zong)(zong))÷T=3.215×ΔA V 反(fan)(fan)總(zong)(zong)：反(fan)(fan)應體系(xi)總(zong)(zong)體積(ji)(ji)，1×10 -3 L；ε：NADH 摩(mo)爾消(xiao)光(guang)(guang)系(xi)數，6.22×10 3 L / mol /cm；d：比(bi)色皿光(guang)(guang)徑(jing)，1cm；V 樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)：加入樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)本體積(ji)(ji)，0.05 mL；V 樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)總(zong)(zong)：加入提取液體積(ji)(ji)，1 mL；T：反(fan)(fan)應時間，2 min； Cpr：樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)本蛋白(bai)質濃度，mg/mL；W：樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)本質量，g；500：細菌(jun)或(huo)細胞總(zong)(zong)數，500 萬。

相關文獻：

《Inhibition of?α?ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in?poplar via?changes in?GABA shunt》 作者:Jianyun?Yue,Changjian?Du,Jing?Ji,Tiantian?Xie, Wei?Chen,Ermei?Chang, Lanzhen?Chen, Zeping?Jiang,Shengqing?Shi
 期刊:Planta 影響因子:3.06 PMID:
《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影響因子:3.571 PMID:29845188