產品名稱：雙熒光(guang)素(su)酶報(bao)告基因檢測試劑盒 分子生物學
產品型號：D0010
產品報價：
產品特點：雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒 分子生物學螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）大小為61 KDa，單亞基蛋白，能夠催化熒光素（luciferin）氧化，生成氧化熒光素oxyluciferin；海腎熒光素酶（Renilla luciferase）為36 KDa的單亞基蛋白，能夠催化腔腸素（coelenterazine）氧化形成coelenteramide。二者在翻譯后均無需修飾即
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雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒 分子生物學
雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒( Dual-Lucy Assay Kit )
貨號：D0010
規格：100T
保存：低溫運輸，冰袋運輸。-20℃保存 12 個月。長期保存推薦 -80℃。
產品內容：
組分編號 名稱 100 次 1000 次
A 細胞裂解液 60 mL 60 mL×10
B 螢火蟲熒光素酶緩沖液 10 mL 10 mL×10
C 螢火蟲熒光素酶底物（50 X） 200 µL 200 µL×10
D 海腎熒光素酶緩沖液 10 mL 10 mL×10
E 海腎熒光素酶底物（50 X） 200 µL 200 µL×10
注意：螢火蟲熒光素酶反應工作液和海腎熒光素酶反應工作液現配現用。
產品說明：
螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）大小為61 KDa，單亞基蛋白，能夠催化熒光素（luciferin）氧化，生成氧化熒光素oxyluciferin；海腎熒光素酶（Renilla luciferase）為36 KDa的單亞基蛋白，能夠催化腔腸素（coelenterazine）氧化形成coelenteramide。二者在翻譯后均無需修飾即可發揮作用。
Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙熒光(guang)素(su)(su)酶報(bao)告基(ji)因檢(jian)測試劑(ji)盒(he)先(xian)以熒光(guang)素(su)(su)為(wei)(wei)底(di)物(wu)來檢(jian)測螢火蟲熒光(guang)素(su)(su)酶報(bao)告基(ji)因的(de)活性(xing)，之后在淬滅該熒光(guang)反應(ying)的(de)同時，以腔腸(chang)素(su)(su)為(wei)(wei)底(di)物(wu)檢(jian)測海腎熒光(guang)素(su)(su)酶報(bao)告基(ji)因的(de)活性(xing)。其檢(jian)測機理(li)機理(li)如(ru)圖所示：
螢火蟲螢光素酶催化luciferin發光的發光波長為560 nm。海腎螢光素酶催化coelenterazine發光
的發光波長為465 nm。
通常(chang)將目的(de)(de)(de)基因的(de)(de)(de)5´UTR或者(zhe)啟動子克隆Firefly Luciferase的(de)(de)(de)上游，或者(zhe)3´UTR克隆FireflyLuciferase的(de)(de)(de)下游，通過檢(jian)測螢火蟲熒光素酶(mei)的(de)(de)(de)量來檢(jian)測啟動子或者(zhe)調控元件的(de)(de)(de)轉錄(lu)調控作(zuo)用。RenillaLuciferase作(zuo)為內參(can)，來消除細胞(bao)數量或者(zhe)轉染效率的(de)(de)(de)差異。
實驗步驟
1：裂解細胞
1）將細胞裂解液充分混勻，按如下方式加入細胞裂解液，充分裂解細胞。
a: 對于貼壁細胞，吸盡細胞培養液，按照下表比例加入細胞裂解液，輕輕旋轉培養皿或者培養板使裂解液*覆蓋細胞；
b: 對于懸浮細胞，離心棄去上清，按照下表比例加入裂解液，細胞培養板 96 孔板 48 孔板 24 孔板 12 孔板 6 孔板裂解液加入量 100 µL 150 µL 200 µL 300 µL 500 µL
2）冰上孵育 5 min，充分裂解細胞。
3）（選作）10000-16000rpm 離心 1 min，取上清。
2：熒光檢測
1）取20 µL 細胞裂解液，加黑色酶標板中。按照實驗需要，可設置 3 孔-5 孔重復。
2）配制螢火蟲熒光素酶反應工作液和海腎熒光素酶反應液，即螢火蟲熒光素酶底物（50 X）和海腎熒光素酶底物（50 X） 分別用對應的緩沖液稀釋 1 X 工作液。并孵育室溫。
3）加入 100 µL 螢火蟲熒光素酶反應液，震板混勻，檢測螢火蟲熒光素酶的活力，檢測盡量在 30 min 內完成。
4）加入 100 µL 海腎熒光素酶反應液，震板混勻，檢測海腎熒光素酶的活力，檢測盡量在 30 min 內完成。
5）分析數據。
相關文獻：
《Long non-coding RNA MBNL1-AS1 regulates proliferation, migration, and invasion of cancer stem cells in colon cancer by interacting with MYL9 via sponging microRNA-412-3p》 作者:Kongxi Zhu，Yunxia Wang，Lan Liu，Shuai Li，Weihua Yu 期刊:Clinics and Research in Hepatology and Gastroenterology 影響因子:2.807 PMID:31255531
《Effects of Srxn1 on growth and Notch signalling of astrocyte induced by hydrogen peroxide》 作者:Lan Li, Guangjun Lin, Huizi Gu, Lei Yu & Changwei Ni 期刊:Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology 影響因子:4.462 PMID:31079497
雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒 分子生物學
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