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X-gal（20mg/ml）基因(yin)工程

X-gal溶液(20mg/ml)    此產品為X-gal用DMF溶(rong)解過濾后配成的溶(rong)液。

X-gal（20mg/ml）基因工程(cheng)使用方法：

在100 ml的瓊脂(zhi)培養基中，加入200 μl的上述溶液、40 μl的IPTG（200mg/ml）和100 μl的Amp（100 mg/ml），制作成X-Gal、IPTG、Amp平板培養基(ji)（實際上X-gal和IPTG可以直接涂抹在平板培養基表面，干半小時后就可以用，90mM的平板，X-gal(20mg/ml)涂40ul，IPTG涂7ul。150mm的板加倍）。可根據長出菌體的藍白色，而方便地挑選出基因重組體(ti)（白色為具(ju)有DNA插入片(pian)段的(de)基因(yin)重組體(ti)）。

細(xi)菌(jun)(jun)藍白斑(ban)篩(shai)選(xuan)原理：IPTG為(wei)安慰型誘導(dao)物(wu)，可誘導(dao)β-半(ban)乳(ru)(ru)糖(tang)苷(gan)酶的產(chan)生，X-gal是β-半(ban)乳(ru)(ru)糖(tang)苷(gan)酶的作用(yong)底物(wu)，在(zai)β-半(ban)乳(ru)(ru)糖(tang)苷(gan)酶的作用(yong)下(xia)X-gal被切割成半(ban)乳(ru)(ru)糖(tang)和深藍色的物(wu)質：5-溴-4-靛(dian)藍，有(you)色物(wu)質可使所在(zai)的菌(jun)(jun)落呈現藍色。但(dan)當含有(you)lac啟(qi)動子的質粒中插(cha)入了(le)外源(yuan)基因(yin)(yin)，則不能產(chan)生β-半(ban)乳(ru)(ru)糖(tang)苷(gan)酶，因(yin)(yin)此不能分解(jie)X-gal產(chan)生藍色底物(wu)，所在(zai)的菌(jun)(jun)落呈現白色（相對(dui)藍色），這樣的菌(jun)(jun)落才有(you)可能是我們(men)想要的菌(jun)(jun)株(zhu)。藍白斑(ban)篩(shai)選(xuan)減輕了(le)在(zai)篩(shai)選(xuan)陽(yang)性(xing)克(ke)隆(long)菌(jun)(jun)落時的工作量。

使用濃(nong)度(du)：IPTG濃(nong)度(du)：50mg/ml；X-gal濃(nong)度(du)：20mg/ml

直接涂(tu)板(ban)法：取IPTG溶液10l，X-gal溶液20l滴(di)在培(pei)養基上，同時(shi)滴(di)加50～100l無(wu)菌(jun)水或無(wu)菌(jun)LB，用(yong)涂(tu)布棒涂(tu)抹均勻，放表(biao)面(mian)無(wu)水后即可(ke)使用(yong)。

預制板(ban)：倒板(ban)時，在溫度降(jiang)50℃后。每100mlLB中加入250l的(de)(de)IPTG溶(rong)液(ye)和500?l的(de)(de)X-gal溶(rong)液(ye)，混勻后制板(ban)即可(ke)。

注意(yi)：

1、X-gal不溶于水，用二(er)甲基甲酰胺(DMF)溶解；

2、X-gal對(dui)光敏感，含有X-gal的平板應(ying)該避光保存，在1～2周內使用；

3、過夜培養后藍(lan)白斑顯示不明顯可將(jiang)平板放入4℃冰箱中，一段時間(jian)后藍(lan)白斑顯示會比較明顯，便于挑選