產品名稱:: 谷氨酸脫氫酶(GDH)活性檢測試劑盒產品(pin)英文(wen)名: Glutamic Acid Dehydrogenase(GDH)Assay Kit產品貨號:BC1460 產地(di):北京市通州區馬駒橋聯(lian)東U谷8三(san)樓(lou)產品(pin)規格:50管/48樣 產品商(shang)標:solarbio 保(bao)存(cun)(cun)與運輸:4℃保(bao)存(cun)(cun)或(huo)-20℃保(bao)存(cun)(cun); 參考(kao)價格:650 庫(ku)存(cun)狀態:現貨 關鍵字: 谷氨酸脫(tuo)氫(qing)酶(mei)檢(jian)測(ce)試劑盒|GDH檢測試劑(ji)盒|谷氨酸脫氫酶(mei)|試劑盒(he)
簡要介紹: GDH(EC 1.4.1.2)廣泛分布于植(zhi)物中,和谷氨(an)酸合成酶(GOGAT)共同參與谷氨(an)酸的合成,在氨(an)同化和轉化成有機氮化合物的代(dai)謝中起重要作用。 GDH催化NH4+、α-酮戊二(er)酸和NADH,生成(cheng)谷氨酸和NAD+,引起340nm吸光(guang)度下(xia)降。通(tong)過測定(ding)340nm吸光(guang)度的(de)下(xia)降速率,計(ji)算GDH活(huo)性。
產品詳細描述 產品內(nei)容: 提取(qu)液:液體60mL×1瓶,4℃保存(cun); 試劑一:液體60mL×1瓶,4℃保存; 試劑(ji)二(er):粉劑(ji)×1瓶,-20℃保存。 產品說(shuo)明: GDH(EC 1.4.1.2)廣泛分布于(yu)植物中,和谷氨(an)酸合成酶(GOGAT)共同(tong)參與谷氨(an)酸的合成,在氨(an)同(tong)化和轉化成有機(ji)氮化合物的代(dai)謝中起重(zhong)要作(zuo)用(yong)。 GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和(he)NADH,生(sheng)成谷(gu)氨酸和(he)NAD+,引起340nm吸光度下降。通過測(ce)定340nm吸光度的下降速率,計(ji)算GDH活(huo)性。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計、臺(tai)式離心(xin)機、水浴鍋、移液器(qi)、1mL石(shi)英比色皿、研(yan)缽、冰和(he)蒸(zheng)餾水。 操作步驟: 一、粗酶液提取(qu): 1、收集細(xi)菌或細(xi)胞(bao)到離心(xin)管內,離心(xin)后(hou)棄上清;按照每500萬細(xi)菌或細(xi)胞(bao)加入1mL提(ti)取液,超聲(sheng)波破碎(sui)細(xi)菌或細(xi)胞(bao)(功(gong)率(lv)20%,超聲(sheng)3秒,間隔10秒,重(zhong)復30次(ci));8000g4℃離心10分鐘,取上(shang)清,置冰上(shang)待測。 2、稱取約0.1g組織,加入(ru)1mL提取液進行冰浴勻(yun)漿。8000g 4℃離心10分鐘,取上(shang)清,置冰上(shang)待測(ce)。 二、測定步(bu)驟: - 紫外分光(guang)光(guang)度計預熱30min以上(shang),調(diao)(diao)節(jie)波長340nm,蒸餾水調(diao)(diao)零。
- 樣本測定
(1)工作液的配制:臨用前(qian)將試劑(ji)一加入試劑(ji)二中(zhong)混合溶解(jie),置于37℃(哺乳動(dong)物)或25℃(其它物種(zhong))水浴(yu)5min; (2)取(qu)1mL工作液和(he)0.05mL樣(yang)本于(yu)光(guang)徑為1cm的(de)(de)(de)1mL石(shi)英比色皿(min)中,混勻,加樣(yang)本的(de)(de)(de)同時(shi)(shi)(shi)開始計(ji)時(shi)(shi)(shi),在340 nm波長下記(ji)錄20秒時(shi)(shi)(shi)的(de)(de)(de)初始吸(xi)光(guang)度A1和(he)5分20秒時(shi)(shi)(shi)的(de)(de)(de)吸(xi)光(guang)度A2,計(ji)算(suan)ΔA=A1-A2。注:當ΔA大(da)于(yu)0.5時(shi)(shi)(shi),將樣(yang)本進行稀釋后測量。 三、GDH活性計算: (1)按樣本(ben)蛋白濃度計算(suan): 單(dan)(dan)位的(de)定義:每(mei)(mei)mg組織蛋(dan)白每(mei)(mei)分鐘消(xiao)耗1 nmol NADH定義為一個(ge)酶活力單(dan)(dan)位。 GDH(U/mg prot)=[ΔA×V反總(zong)÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V樣) ÷T=675×ΔA÷Cpr (2)按樣(yang)本鮮重計算: 單位(wei)的定(ding)義:每(mei)g組織每(mei)分鐘消耗1 nmol NADH定(ding)義為一(yi)個酶(mei)活力單位(wei)。 GDH(U/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣(yang)÷V樣(yang)總×W)÷T=675×ΔA÷W (3)按(an)細菌(jun)或細胞密度計(ji)算(suan): 單位的定(ding)(ding)義:每1萬個細菌或細胞每分鐘(zhong)消耗(hao)1 nmol NADH定(ding)(ding)義為一個酶活力(li)單位。 GDH(U/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣(yang)÷V樣(yang)總(zong)×500)÷T=1.35×ΔA V反總:反應體系(xi)總體積,1.05×10-3 L;ε:NADH摩爾消(xiao)光(guang)系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿(min)光徑(jing),1cm;V樣:加入(ru)(ru)樣本(ben)體積,0.05 mL;V樣總(zong):加入(ru)(ru)提取液體積,1 mL;T:反應時間(jian),5 min;Cpr:樣本(ben)蛋白(bai)質濃度,mg/mL;W:樣品(pin)質量(liang),g;500:細菌或(huo)細胞總(zong)數,500萬。
相關文獻: 《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作(zuo)者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影(ying)響因子:4.183 PMID:30558146 谷氨酸脫氫酶(GDH)活性檢測試劑盒 |