產品名稱:谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)活性檢測試劑盒產(chan)品英文名(ming):Glutathione Peroxidase (GPX) Assay Kit產品貨號:BC1190 產地:北京市通州區馬駒(ju)橋聯東U谷8三(san)樓產品(pin)規格:50管(guan)/48樣 產品商標:solarbio 保(bao)存(cun)(cun)與運(yun)輸:4℃保(bao)存(cun)(cun)或-20℃保(bao)存(cun)(cun); 參考(kao)價格:1600 庫存狀態:現貨(huo) 關鍵字:谷胱甘肽(tai)過氧化物酶試劑盒|活性檢測試劑盒|GPX含量檢測|試劑盒| 簡要(yao)介紹: 氧(yang)(yang)化(hua)型谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(GSSG)是(shi)谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(GSH)的氧(yang)(yang)化(hua)形式,又稱為二硫(liu)代谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai),是(shi)兩分(fen)子的谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)氧(yang)(yang)化(hua)而成。GSSG會被谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)還原(yuan)酶還原(yuan)成GSH,因此機體中大(da)多數是(shi)以還原(yuan)型形式存在。測定(ding)細(xi)胞內(nei)GSH和(he)GSSG含量以及GSH/GSSG比值(zhi),能夠很(hen)好地反(fan)映細(xi)胞所處的氧(yang)(yang)化(hua)還原(yuan)狀態。本試劑盒利(li)用谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)能和(he)5,5’-二硫(liu)代-雙-(2-硝(xiao)基(ji)ben甲(jia)酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反(fan)應產生2-硝(xiao)基(ji)-5-巰(qiu)基(ji)ben甲(jia)酸,2-硝(xiao)基(ji)-5-巰(qiu)基(ji)ben甲(jia)酸在波長412nm處具有(you)大(da)光吸收的特點,通過(guo)2-乙烯吡dian抑制樣品中原(yuan)有(you)的還原(yuan)型谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai),然(ran)后利(li)用谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)還原(yuan)酶將GSSG還原(yuan)為GSH,借此測定(ding)氧(yang)(yang)化(hua)型谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)的含量。
產品詳細描述 產(chan)品內容: 試劑(ji)一(yi):液體×1瓶,4℃保存。 試劑(ji)二:粉劑(ji)×1瓶,4℃保存。 試(shi)劑三:液體×1支,-20℃保存。 試劑四(si):液體×1瓶,4℃保存。 工(gong)作液配制:臨用前,在試(shi)劑(ji)二中(zhong)加入試(shi)劑(ji)一40 mL,充分震蕩溶(rong)解(jie)后加入全(quan)部(bu)試(shi)劑三,混勻。(當天用完) 產(chan)品說明(ming): 谷胱甘(gan)肽過氧化物(wu)酶(mei)(glutathione peroxidase, GSH-Px)是谷胱(guang)甘肽氧化(hua)還原循環(huan)中(zhong)催化(hua)還原型谷胱(guang)甘肽(GSH)氧化(hua)的主要酶之一(yi)。GSH-Px不僅能夠特異地催化還原(yuan)型谷胱甘肽與(yu)ROS反應,生成(cheng)氧化(hua)型谷胱甘(gan)肽GSSG,從(cong)而(er)保護生物膜免受ROS的損害,維持細胞的正常功能;而且具有保(bao)護肝臟、提(ti)高機體(ti)免(mian)疫力、拮抗有害金屬(shu)離(li)子對(dui)機體(ti)的傷害和增加機體(ti)抗輻(fu)射等能力。 GSH-Px催化H2O2氧化GSH,產生(sheng)GSSG;谷(gu)胱甘肽還原酶(GR)催化NADPH還原GSSG,再(zai)生(sheng)GSH,同時NADPH氧化生成(cheng)NADP+;NADPH在340 nm有特(te)征吸收 谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)活性檢測試劑盒 自(zi)備儀(yi)器和用品: 紫外-可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋(guo)、可調(diao)節移(yi)液器、1mL石英比色(se)皿和蒸餾水。 操(cao)作步驟(zou): 一、粗酶液(ye)提取: - 組織:按照組織質量(g):試劑一體(ti)積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱(cheng)取0.1g 組(zu)織,加入1mL 試(shi)劑一)進行冰浴勻(yun)漿。10000rpm,4℃離心10min,取上(shang)清置冰上(shang)待測(如上清不(bu)清澈,再離心3min)。
- 細菌(jun)(jun)、真菌(jun)(jun):按照細胞數量104個(ge):試劑一體(ti)積(ml)500~1000:1 的比例(li),建議500 萬(wan)細胞加入1mL 試(shi)劑一),冰(bing)浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3 s,間隔7s,總時間(jian)3min)然后10000rpm,4℃,離心10min,取(qu)上清置冰上待測(ce)(如上清不清澈(che),再離心3min)。
- 血清等(deng)液(ye)體:直接測定。
二(er)、GSH-Px測定(ding)操作: 1. 分光光度計預熱(re)30 min,調節波長到340 nm,蒸餾水調零。 2. 混合(he)試劑(ji)在25℃或(huo)者37℃(哺乳動(dong)物)水(shui)浴(yu)中預熱30min以上(shang)。 3. 空白管:依次在1mL石英比色皿中(zhong)加入100μL蒸餾水、800μL預熱的工作液,100μL試(shi)劑四(si),迅(xun)速混勻后于340nm處測定(ding)第10 s處的吸(xi)光值,37℃水浴3min后(hou)迅速拿出測量吸(xi)光度,分別記為A空1和A空(kong)2。計算△A空=A空1-A空2。(空白管只需做(zuo)1~2個) 4. 測定管:依次在(zai)1mL石英比色皿中加入(ru)100μL上清(qing)液、800μL預熱的工作(zuo)液,100μL試劑四,迅速(su)混勻后于340nm處測(ce)定第10 s處(chu)的(de)吸光值(zhi),37℃水浴3min后迅速拿出測量吸光(guang)度,分別(bie)記為A測1和A測2。計算△A測=A測(ce)1-A測2。 三、GSH-Px活(huo)性計算(suan): (1)按蛋白濃度計(ji)算 GSH-Px活力(li)單(dan)位定義:一定溫度下,每mg蛋白(bai)在(zai)反應體系中每分鐘催化(hua)1nmol NADPH氧化定義為(wei)一個酶活力單位。 GSH-Px (U/mg prot) =[ (△A測(ce)定(ding)管-△A空白管(guan))÷ε÷d×V反總(zong)×106] ÷[Cpr×V樣]÷T =536×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr (2)按樣(yang)本鮮重計算 GSH-Px活力(li)單位定(ding)義:一定(ding)溫度中,每g樣(yang)品在反(fan)應(ying)體系(xi)中每分(fen)鐘催(cui)化1μmol NADPH氧化定義(yi)為一(yi)個酶活力單位(wei)。 GSH-Px (U/g 鮮(xian)重)=[ (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反(fan)總×106] ÷(V樣÷V樣總×W)÷T =536×(△A測定管-△A空白管)÷W (3) 按細(xi)胞數量計(ji)算 GSH-Px 活力(li)單(dan)位定義:一定溫度(du)中(zhong),每104個細胞每分鐘催化1μmol NADPH 氧化(hua)定義為一個酶活力單位。 GSH-Px (U/104 cell)=[(△A 測(ce)定(ding)管(guan)-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×109]÷(細胞數量(liang)×V 樣÷V樣總)÷T =536×(△A 測定管(guan)-△A 空白管)÷細胞數量 (4) 按液體體積計算(suan) GSH-Px 活力單位定義:一定溫(wen)度中,每(mei)毫(hao)升液(ye)體每(mei)分鐘催化1μmol NADPH 氧(yang)化定義為一(yi)個酶活力單位。 GSH-Px (U/ml)=[(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反(fan)總×109]÷V 樣÷T =536×(△A 測定管-△A 空白管) △A空白(bai)管=A空(kong)1-A空2;△A測定管=A測1-A測2。 ε:NADPH摩爾消(xiao)光(guang)系數(shu)6.22×103L/mol/cm;d:比色(se)皿光(guang)徑,1 cm;V反總:反應體系總體積,0.001 L;106:1 mol=1×106μmol;Cpr:上清液(ye)蛋白濃度(mg/mL);V樣:加入反應體系(xi)中(zhong)上(shang)清液體積(ji),100μL =0.1 mL;T:反應時(shi)間,3 min;W :樣品質量,g。 注意(yi)事項(xiang): (1)樣品(pin)處理等過程均(jun)需(xu)要在(zai)冰上進行,且須(xu)在(zai)當日(ri)測定酶(mei)活力; (2)混合試劑和底(di)物液(ye)須臨(lin)用(yong)前配(pei)制,配(pei)完(wan)后置于冰上; (3)測定過(guo)程操作須迅速; (4)細胞中(zhong)GSH-Px活性測定時(shi),細胞數目須在300萬(wan)-500萬(wan)之間,細胞中GSH-Px的提取時可加試劑一后研磨或(huo)超(chao)聲波(bo)處理(li),不能(neng)用細(xi)胞(bao)裂解液(ye)處理(li)細(xi)胞(bao)。
相關文獻: 《Amelioration of nonalcoholic fatty liver disease by swertiamarin in fructose-fed mice》 作者:Yang Yang,Li Jing,Wei Cong,He Ying,Cao Yixin ,Zhang Yongmin,Sun Wenjia,Qiao Boling,He Jiao 期刊:Phytomedicine 影響因子:4.18 PMID:31005808 《Antioxidant activity of whole grain Qingke (Tibetan Hordeum vulgare L.) toward oxidative stress in d-galactose induced mouse model》 作者:Xuejuan Xia,Yuxiao,Xing,Guannan Li,Jinsong Wu,Jianquan Kan 期刊:Journal of Functional Foods 影響因子:3.197 PMID: 《Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development》 作者:Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen, Huihui Du, Linping Wang,Dongqin Guo & Tingzhang Hu 期刊:Toxicological & Environmental Chemistry 影響因子:3.547 PMID:28189720 《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者(zhe):JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子(zi):5.657 PMID:31022448 |