產(chan)品名稱:氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量檢測試劑盒產品英文(wen)名: Oxidized Glutathione(GSSG)Assay Kit產品貨號:BC1180 產地(di):北京市通州區馬駒橋聯東U谷(gu)8三樓(lou)產品規格(ge):50管/48樣 產(chan)品(pin)商標:solarbio 保(bao)存(cun)與運輸:4℃保(bao)存(cun)或-20℃保(bao)存(cun); 參考價格:320 庫存狀態:現貨 關鍵(jian)字:氧化型谷胱甘肽試劑盒|活(huo)性檢測試劑盒|GSSG含量(liang)檢測|試劑盒
簡要介(jie)紹: 氧化(hua)(hua)(hua)型谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)肽(tai)(tai)(GSSG)是谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)肽(tai)(tai)(GSH)的(de)(de)(de)氧化(hua)(hua)(hua)形式,又稱為二(er)硫代谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)肽(tai)(tai),是兩分子的(de)(de)(de)谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)肽(tai)(tai)氧化(hua)(hua)(hua)而(er)成。GSSG會(hui)被谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)肽(tai)(tai)還(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)酶還(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)成GSH,因此機體中大多數是以(yi)還(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)型形式存(cun)在(zai)(zai)。測(ce)定(ding)細胞(bao)(bao)內GSH和GSSG含(han)量以(yi)及GSH/GSSG比值(zhi),能(neng)夠(gou)很好地反映細胞(bao)(bao)所處(chu)的(de)(de)(de)氧化(hua)(hua)(hua)還(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)狀態(tai)。本試劑盒利用谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)肽(tai)(tai)能(neng)和5,5’-二(er)硫代-雙-(2-硝基(ji)(ji)ben甲(jia)酸(suan))(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反應(ying)產生2-硝基(ji)(ji)-5-巰基(ji)(ji)ben甲(jia)酸(suan),2-硝基(ji)(ji)-5-巰基(ji)(ji)ben甲(jia)酸(suan)在(zai)(zai)波長412nm處(chu)具有大光吸收(shou)的(de)(de)(de)特點,通過2-乙烯吡dian抑(yi)制(zhi)樣品(pin)中原(yuan)(yuan)(yuan)有的(de)(de)(de)還(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)型谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)肽(tai)(tai),然后(hou)利用谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)肽(tai)(tai)還(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)酶將GSSG還(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)為GSH,借此測(ce)定(ding)氧化(hua)(hua)(hua)型谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)肽(tai)(tai)的(de)(de)(de)含(han)量。
產品詳細描述 產品(pin)內容: 試劑一:液體1瓶,50ml,4℃保存(cun)。 試劑二:液(ye)體1支,170μl,4℃保(bao)存(cun)。 試劑(ji)三:液體1瓶 60ml,4℃保存。 試劑(ji)四:液體1瓶(ping) 8ml,4℃保存。 試劑五(wu):粉(fen)劑(ji)1支,4℃保存,用前8ml蒸餾(liu)水溶解。溶(rong)解后-20℃分裝保存。 試劑六:液體(ti)1支,40μl,用前0.8ml蒸餾(liu)水稀釋。 標準品:粉劑1支,10mg,4℃避(bi)光保存(cun)。 產品說明: 氧(yang)化型(xing)(xing)(xing)谷(gu)(gu)胱(guang)(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(GSSG)是谷(gu)(gu)胱(guang)(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)(GSH)的氧(yang)化形(xing)式(shi),又稱為二(er)(er)硫代谷(gu)(gu)胱(guang)(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai),是兩(liang)分子的谷(gu)(gu)胱(guang)(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)氧(yang)化而成(cheng)。GSSG會被谷(gu)(gu)胱(guang)(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)還(huan)(huan)原(yuan)酶還(huan)(huan)原(yuan)成(cheng)GSH,因此機體中大(da)多數是以還(huan)(huan)原(yuan)型(xing)(xing)(xing)形(xing)式(shi)存在。測(ce)定細胞(bao)內GSH和(he)GSSG含(han)量以及GSH/GSSG比值,能夠很好(hao)地反(fan)映細胞(bao)所處的氧(yang)化還(huan)(huan)原(yuan)狀態。本試劑盒利(li)用(yong)(yong)谷(gu)(gu)胱(guang)(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)能和(he)5,5’-二(er)(er)硫代-雙(shuang)-(2-硝(xiao)基(ji)ben甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反(fan)應產(chan)生2-硝(xiao)基(ji)-5-巰基(ji)ben甲酸,2-硝(xiao)基(ji)-5-巰基(ji)ben甲酸在波長412nm處具有(you)大(da)光吸收的特點,通(tong)過2-乙(yi)烯吡dian抑(yi)制樣品中原(yuan)有(you)的還(huan)(huan)原(yuan)型(xing)(xing)(xing)谷(gu)(gu)胱(guang)(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai),然(ran)后利(li)用(yong)(yong)谷(gu)(gu)胱(guang)(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)還(huan)(huan)原(yuan)酶將GSSG還(huan)(huan)原(yuan)為GSH,借(jie)此測(ce)定氧(yang)化型(xing)(xing)(xing)谷(gu)(gu)胱(guang)(guang)(guang)(guang)甘(gan)(gan)肽(tai)(tai)的含(han)量。 自備儀器和用品: 分(fen)析天平(ping)、微量(liang)勻漿器(規格2ml)、低溫離(li)心機、水浴鍋、移液(ye)器、可見(jian)分(fen)光光度計、1ml比色皿。 操作步驟: (1)組織(zhi)處理 新鮮組織先用(yong)PBS沖洗2次,然后稱(cheng)取動物組織或者植物組織0.1g。加入用(yong)試劑一潤洗過(guo)的(de)勻(yun)(yun)漿器中(勻(yun)(yun)漿器提(ti)前放冰上預冷(leng));然后加入1ml試劑一(組(zu)織/試劑一比例保持不變即可),迅速(su)冰上充分研磨(mo)(使(shi)用液氮研磨(mo)效果更好(hao));10000rpm 4℃離心10min;取上清液放置于4℃待測(ce),若暫時不能完成測(ce)試(shi)可放于(yu)-80℃保存(可(ke)保存10天)。 (2)血液處(chu)理 血(xue)漿:將收集的抗凝(ning)血(xue)于4℃,600g離心10分鐘,吸取上層血漿到另一(yi)支試(shi)管中(zhong),加入等體積的(de)試(shi)劑一(yi),4℃,8000g離心10分(fen)鐘,將上清移入(ru)新的試管中放置于(yu)4℃待測,若暫時不能完成測試(shi)可(ke)放于(yu)-80℃保存(可保存10天)。 血細胞:將收集的抗凝(ning)血于4℃,600g離(li)心10分鐘(zhong)(zhong),棄去上層血漿(jiang)用(yong)3倍體積(ji)的(de)PBS清(qing)洗3次(用(yong)PBS重(zhong)懸(xuan)血細胞,600g離(li)心10分鐘(zhong)(zhong)),加入(ru)等(deng)體積(ji)試劑一(yi),混勻(yun)后(hou)4℃放置10分鐘,8000g離心10分鐘,吸取上清放于4℃待(dai)測,若暫時不(bu)能完成測試可放(fang)于-80℃保(bao)存(cun)(可保(bao)存(cun)10天)。 (3)細(xi)胞處理 收集不少于108個細(xi)胞,先用PBS清洗細(xi)胞2次(PBS重懸細(xi)胞,600g離心(xin)10分鐘),加入3倍細(xi)胞沉淀體(ti)積(ji)的試劑一重懸細胞,反復凍(dong)融2-3次(ci)(可(ke)在液氮中凍(dong)結,37℃水浴(yu)中溶解),8000g離(li)心(xin)10分鐘,收集上清(qing)于4℃待(dai)測(ce),若暫時不能完成(cheng)測(ce)試可放于-80℃保存(cun)(可保存(cun)10天)。 二、實驗操(cao)作(zuo): - 分光光度計預熱30min以(yi)上,調節(jie)波長412nm,蒸餾(liu)水(shui)調零。
- 試劑二放置37℃(哺乳動(dong)物)或(huo)25℃(一般物種(zhong))水浴中保溫30min。
- 標(biao)準品(pin)(pin)的稀釋:將標(biao)準品(pin)(pin)用1ml蒸餾水溶解(4℃保存),濃度為10mg/ml。取適當溶(rong)液配制濃(nong)度(du)為25μg/ml、20μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、3.125μg/ml、0μg/ml的標準(zhun)品(試劑(ji)一十倍(bei)稀釋后進行(xing)稀釋)。
- 取1.5ml離心管,加入100μL稀釋好的(de)標準品或(huo)樣品,加入(ru)2μL試劑二,混勻(yun)后37℃孵育30分(fen)鐘。
- 制作標準曲線
孵育完(wan)成后標準管依次加入700μL試劑(ji)三,100 μL試劑(ji)四,100 μL試劑五,10 μL試劑(ji)六,迅速混勻(yun)后,測定412nm處30 s和(he)150 s光吸(xi)收A1和(he)A2。吸(xi)光度(A2-A1)為橫坐標(x),濃(nong)度為縱坐標(y)做(zuo)標準曲線。 - 樣品(pin)管(guan)依次(ci)加入700μL試劑三(san),100 μL試劑四,100 μL試(shi)劑五,10 μL試劑(ji)六,迅速(su)混勻后(hou),測定412nm處(chu)30 s和(he)(he)150 s光(guang)吸收(shou)A1和(he)(he)A2,△A= A2- A1。
三、GSSG含量計算 根(gen)據(ju)標準曲線,將樣(yang)品△A帶(dai)入公(gong)式中(zhong)(x),計算出樣品濃度y(μg/ml)。 (1)按蛋白濃度計算 GSSG(μg / mg prot)=y×V 反(fan)總(zong)÷V 樣÷Cpr =y×10.12÷Cpr (2)按樣(yang)本(ben)質量(liang)計算 GSSG(μg /g)= y×V 反總÷(V 樣(yang)÷V 樣總×W)= y×10.12 ÷W (3)按細胞數量(liang)計算(suan) GSSG(μg /104 cell)= y×V 反(fan)總÷(V 樣÷V 樣總×細胞(bao)數量(liang))= y×10.12 ÷細胞數(shu)量 (4)按液(ye)體(ti)(ti)體(ti)(ti)積計算(suan) GSSG(μg / mL)= y×V 反總÷V 樣= y×10 V 反(fan)總(zong):反(fan)應總(zong)體積,1.012mL;V 樣總(zong):上(shang)清液(ye)總(zong)體積,1 mL;V 樣(yang):加入反(fan)應(ying)體(ti)(ti)系中上清液(ye)體(ti)(ti)積,100μL=0.1 mL;W:樣品質(zhi)量(liang),g ;Cpr:上清(qing)液蛋白質濃度,mg/mL。 注意事項: - 樣(yang)品處理(li)需勻漿*,若(ruo)當天不能完成(cheng)測量(liang),可放(fang)-80℃保存。
- 若不確定樣品(pin)中GSSG含量的高低,可(ke)稀釋(shi)幾個梯度(du)后再進(jin)行測(ce)量。
- 此方法利用酶促反應速率計(ji)算底物濃(nong)度,盡量準確在(zai)30秒(miao)和(he)150秒(miao)處完(wan)成讀數。
- 因為試劑一中(zhong)含有蛋白(bai)質沉(chen)淀劑,因此上清液不(bu)能(neng)用于蛋白(bai)濃(nong)度測定。
相關文獻: 《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》 作者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影(ying)響因子:3.06 PMID:30301226 氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量檢測試劑盒 |