產(chan)品名稱:還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測試劑盒 常量產品(pin)英文名: Reduced Glutathione (GSH) Assay Kit產品貨號:BC1170 產地:北京市(shi)通州區(qu)馬駒(ju)橋(qiao)聯東U谷8三樓產(chan)品(pin)規格(ge):50管/48樣(yang) 產品商標:solarbio 保(bao)存與(yu)運輸:4℃保(bao)存或(huo)-20℃保(bao)存; 參考價(jia)格:240 庫存(cun)狀態(tai):現貨(huo) 關鍵字:還(huan)原型谷胱甘肽試劑盒|活性檢測(ce)試劑盒|GSH含量檢(jian)測|試劑盒(he)
簡要介紹(shao): GSH 是(shi)細胞內主(zhu)要(yao)的抗氧化(hua)(hua)巰基(ji)物(wu)質,在抗氧化(hua)(hua)、蛋(dan)白質巰基(ji)保護和氨基(ji)酸跨膜(mo)運輸等中具有重要(yao)作用。還(huan)原型與氧化(hua)(hua)型比值(GSH/GSSG)是(shi)細胞氧化(hua)(hua)還(huan)原狀(zhuang)態的主(zhu)要(yao)動態指標。因此,測定細胞內 GSH 和 GSSG 含量以及(ji) GSH/GSSG 比值,能夠(gou)很好地反映細胞所處的氧化(hua)(hua)還(huan)原狀(zhuang)態。 DTNB 與 GSH 反應(ying)生成(cheng)復(fu)合物,在 412nm 處(chu)有特(te)征吸(xi)收(shou)峰;其吸(xi)光度(du)與 GSH 含量成(cheng)正比。
產(chan)品詳細(xi)描述(shu) 產品內容: 試劑一(yi):液(ye)體(ti)1瓶,50mL,4℃保存。 試劑二:液體1瓶(ping),50 mL,4℃保存。 試劑三:液體1瓶,15 mL,4℃避(bi)光保存。 標準品:粉劑1支,10mg,4℃避光保(bao)存(cun)。 產品說明: 谷(gu)胱甘肽是由谷(gu)氨酸(Glu)、半胱氨(an)酸(Cys)和甘氨酸(Gly)組成(cheng)的天然三肽,是一種含巰基(ji)(—SH)的化合物(wu),廣泛存在(zai)于動物(wu)組(zu)織、植物(wu)組(zu)織、微生物(wu)和(he)酵母(mu)中。谷(gu)胱甘肽能和(he)5,5’-二硫代-雙-(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反應產(chan)生2-硝基-5-巰基(ji)ben甲酸(suan)和谷胱甘肽二硫化物(wu)(GSSG)。2-硝基(ji)-5-巰基ben甲(jia)酸為黃(huang)色產物(wu),在(zai)波長412nm處(chu)具有大光(guang)吸收(shou)。 自(zi)備儀器和用品: 分(fen)析天平、微量勻(yun)漿器(規格(ge)2ml)、低溫離(li)心機、水浴鍋、移(yi)液(ye)器、可見分光(guang)光(guang)度(du)計(ji),1ml比色皿。 樣品的處理 1、組織處(chu)理: 新鮮組織先用PBS沖(chong)洗(xi)2次,然后(hou)稱(cheng)取動(dong)物(wu)組織或者植物(wu)組織0.1g。加入用試劑一潤洗過的(de)勻漿器中(勻漿器提前放冰(bing)上(shang)預冷);然后加入1ml試劑一(組織/試劑一比例(li)保持不變即可),迅(xun)速(su)冰上充(chong)分研磨(使用液氮研磨效果更好);8000g 4℃離心(xin)10min;取(qu)上清液放置于4℃待測(ce),若暫時不(bu)能完成測(ce)試可放(fang)于-80℃保(bao)存(cun)(可(ke)保(bao)存(cun)10天(tian))。 2、血液處理 血漿:將收集的抗凝血于4℃,600g離心(xin)10分(fen)鐘,吸取上層血漿到另一支試管中,加入等(deng)體積(ji)的(de)試劑一, 4℃,8000g離心10分(fen)鐘,將上(shang)清移入新的(de)試管中(zhong)放置于4℃待測(ce),若(ruo)暫時不能完成測(ce)試(shi)可放于-80℃保存(cun)(可(ke)保存(cun)10天(tian))。 血細胞:將收集的(de)抗(kang)凝血于4℃,600g離心(xin)10分鐘,棄去上層血(xue)漿用(yong)3倍(bei)體(ti)積的PBS清洗3次(用(yong)PBS重懸(xuan)血細胞,600g離心10分鐘(zhong)),加入(ru)等體積試劑(ji)一,混勻后(hou)4℃放置10分鐘,8000g離心10分鐘,吸取上清放于(yu)4℃待測(ce),若暫(zan)時不(bu)能完成測(ce)試可放于-80℃保存(可保存10天)。 3、細胞處理(li) 收集不少于106個細胞,先用PBS清洗細胞2次(ci)(PBS重懸細胞,600g離心10分(fen)鐘),加入3倍細(xi)胞(bao)沉淀體積(ji)的(de)試劑一重懸細(xi)胞(bao),反復凍融2-3次(可在液(ye)氮(dan)中凍結(jie),37℃水浴中(zhong)溶(rong)解(jie)),8000g離心10分鐘,收集上清于(yu)4℃待測(ce),若暫時不(bu)能完(wan)成測(ce)試可放于-80℃保存(可(ke)保存10天)。 操作(zuo)步驟 - 分光光度計預(yu)熱30min以上,分光光度計調節波長412nm,蒸餾水調零。
- 試劑二放置37℃(哺乳(ru)動物)或25℃(一般物(wu)種(zhong))水浴中保溫30min。
- 空(kong)白管檢測:取(qu)1ml比(bi)色(se)皿,依次(ci)加(jia)入100μL蒸(zheng)餾水(shui),700μL試(shi)劑二,200μL試(shi)劑三(san),混勻,放(fang)置2min后測定412nm吸光度A1。
- 制作標準(zhun)曲(qu)線
稱1mg標(biao)準(zhun)品用1ml蒸餾水(shui)溶解,濃度為1mg/ml。取適當(dang)溶液配制濃(nong)度為(wei)200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml的標準品(試劑(ji)一(yi)十倍(bei)稀釋后進(jin)行稀釋)。 取1.5mlEP管(guan)依次(ci)加入(ru)100μL標(biao)準品,700μL試劑二,200μL試劑三(san),每管(guan)混(hun)勻后(hou)靜置(zhi)2min,檢(jian)測(ce)412nm處吸(xi)光度,吸(xi)光度減去空白孔(A1)為橫(heng)坐標,根據吸(xi)光(guang)度(x)和濃度(y,μg/ml)做出標準曲(qu)線。 - 樣品管(guan)測定:取1ml比色皿(min),依次加入100μL樣品,700μL試劑二(er),200μL試劑三,混(hun)勻后靜(jing)置(zhi)2min檢測412nm處吸光度A2,△A= A2- A1。
GSH含(han)量計算 根據(ju)標準曲線,將樣品△A帶入公式(shi)中(x),計算出樣品濃度y(μg/ml)。 (1)按蛋(dan)白濃度(du)計算(suan) GSH(μg / mg prot)=y×V 反(fan)總÷V 樣÷Cpr =y×10÷Cpr (2)按樣本質(zhi)量(liang)計(ji)算 GSH(μg /g)= y×V 反總÷(V 樣(yang)÷V 樣總×W)= y×10 ÷W (3)按細胞(bao)數量計算 GSH(μg /104 cell)= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數量)= y×10 ÷細胞數量 (4)按液體(ti)體(ti)積計算 GSH(μg / mL)= y×V 反(fan)總÷V 樣= y×10 V 反(fan)總:反(fan)應總體(ti)積(ji),1mL;V 樣總:上清液總體積,1 mL;V 樣:加入反應體系中(zhong)上(shang)清液(ye)體積,100μL=0.1 mL;W:樣品質量(liang),g ;Cpr:上清液蛋白(bai)質濃度,mg/mL。 注(zhu)意(yi)事項: - 樣品處理需勻漿(jiang)*,若(ruo)當(dang)天不能(neng)完成(cheng)測(ce)量,可(ke)放(fang)-80℃保存(cun)。
- 標(biao)準品:還(huan)原型谷胱(guang)甘(gan)肽(tai)現配現用。
- 若(ruo)不確定樣(yang)品中(zhong)GSH含(han)量的高低,可稀釋幾個梯度后再進行(xing)測(ce)量。
- 因為試(shi)劑一中含有蛋白(bai)質沉(chen)淀劑,因此上(shang)清液不(bu)能(neng)用于蛋白(bai)濃度(du)測定(ding)。
相關文獻: 《Trimetazidine restores the positive adaptation to exercise training by mitigating statin‐induced skeletal muscle injury》 作者:Ming Song , Fang‐fang Chen , Yi‐hui Li, Lei Zhang , Feng Wang, Ran‐ran Qin ,Zhi‐hao Wang , Ming Zhong , Meng‐xiong Tang , Wei Zhang , Lu Han 期刊:Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle 影響因子:10.754 PMID:29152896 《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》 作者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影響因子:3.06 PMID:30301226 《MicroRNA-98 reduces amyloid β-protein production and improves oxidative stress and mitochondrial dysfunction through the Notch signaling pathway via HEY2 in Alzheimer's disease mice》 作者:Fang?Zhou Chen Ying Zhao Hui?Zhao Chen 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30365070 《Inhibition of MUC1‐C regulates metabolism by AKT pathway in esophageal squamous cell carcinoma》 作者:Xin GongSun YongQiang Zhao Bin Jiang ZhongWei Xin Mo Shi Liang Song QiMing Qin Qiang Wang XiangYan Liu 期刊:J. Cell. Physiol. 影響因子:4.522 PMID:30523643 《Light-Responsive Metal–Organic Framework as an Oxidase Mimic for Cellular Glutathione Detection》 作者:Yufeng Liu,Min Zhou,Wen Cao,Xiaoyu Wang,Quan Wang,Sirong Li and Hui Wei 期刊:Anal Chem. 影響因子:6.35 PMID:31148448 還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測試劑盒 常量 |