產品名(ming)稱::谷胱甘肽還原酶(GR)活性檢測試劑盒 微量法產品英文名(ming): Micro Glutathion Reductases(GR) Assay Kit產品貨號:BC1165 產(chan)地(di):北京市通(tong)州區馬駒(ju)橋聯東U谷8三樓產品規(gui)格:100管/96樣 產(chan)品商標:solarbio 保(bao)存與運輸:4℃保(bao)存或-20℃保(bao)存; 參考(kao)價格(ge):900 庫(ku)存狀態:現(xian)貨(huo) 關鍵字:谷胱甘肽還原酶試劑盒|活性檢(jian)測試劑盒|GR活性檢測(ce)|試劑盒|微量法
簡要介紹: GR 是(shi)廣泛(fan)存在于(yu)真核(he)和原(yuan)(yuan)核(he)生物中的(de)一(yi)種黃素(su)蛋(dan)白氧(yang)化還原(yuan)(yuan)酶(mei),是(shi)谷胱甘肽氧(yang)化還原(yuan)(yuan)循環的(de)關鍵(jian)(jian)酶(mei)之一(yi)(通常昆蟲中 GR 被 TrxR 取代)。GR 催化NADPH 還原(yuan)(yuan) GSSG 生成 GSH,有助于(yu)維持體內(nei)GSH/GSSG比(bi)值。GR 在氧(yang)化脅迫反應中對活性氧(yang)清除起關鍵(jian)(jian)作用,此外 GR還參與抗壞血酸(suan)-谷胱甘肽循環途徑(jing)。 GR能催化NADPH還(huan)原GSSG再生(sheng)(sheng)GSH,同時不斷(duan)消耗NADPH生(sheng)(sheng)成NADP+;NADPH在340nm有特征吸(xi)收峰,相反(fan)NADP+在該波長無吸(xi)收峰;通(tong)過測(ce)定340nm吸(xi)光(guang)度下(xia)降速率;來測(ce)定NADPH脫氫(qing)速率,從而計算GR活(huo)性。
產品(pin)詳細描述(shu) 產品內容: 試劑一:液體120mL×1瓶,4℃保存。 試劑(ji)二(er):液體1mL×1支,4℃保存(cun)。 試劑三:粉劑×1瓶,4℃保(bao)存。臨用前(qian)加入2.0mL蒸餾水,混勻(yun)。 產品說明: GR是廣泛存在(zai)于真核和原核生物中的(de)一種黃素蛋白氧化還原酶,GR催化(hua)GSSG還原生成GSH,是谷(gu)胱(guang)甘肽氧化還原循環的關鍵酶(mei)之一(通常昆蟲中GR被TrxR取代(dai))。GR催化NADPH還(huan)原GSSG生成GSH,有助于維持體內(nei)GSH/GSSG比值(zhi)。GR在(zai)氧化脅迫反(fan)應(ying)中對活性氧清除起關鍵作(zuo)用,此外(wai)GR還參(can)與抗壞血酸-谷(gu)胱甘肽(tai)循環途徑。 GR能催化(hua)NADPH還原GSSG再生GSH,同時NADPH脫(tuo)氫生(sheng)成NADP+;NADPH在340 nm有(you)特征吸收峰,相(xiang)反NADP+在該波長無吸收峰;通過測(ce)定340 nm吸光度下降速率來測定NADPH脫氫速率,從而計算GR活(huo)性(xing)。 自備儀器和(he)用品: 低(di)溫(wen)離心機、水浴鍋、移液器、紫外分(fen)光光度計/酶標儀(yi)、微量石英(ying)比色皿/96孔(kong)板(ban)(UV板)和蒸餾(liu)水(shui) 操作步驟: 一(yi)、粗酶液提(ti)取: 稱約(yue)0.1g組織,加(jia)入1.0 ml試(shi)劑(ji)一(yi),冰上充分研磨,10000rpm 4℃離(li)心10min,取上(shang)清液,待測。 二、GR測定操作: 1. 分光(guang)(guang)光(guang)(guang)度(du)計或(huo)酶標儀(yi)預熱30 min以上,調節波長到340 nm,蒸餾水調零。 2. 試劑一置于25℃(普(pu)通物質)或者37℃(哺乳動物(wu))中(zhong)預熱30min以上。 3. 空(kong)白(bai)管:取微(wei)量石(shi)英(ying)比(bi)色皿(min)或96孔板,加入10μL試劑二,20μL試劑三,170μL試劑(ji)一,于340nm測定10s和190s吸光度(du),記為A空1和A空(kong)2。 4. 測定管(guan):取微量(liang)石(shi)英比色(se)皿或96孔板,加入10μL試劑(ji)二,20μL試劑(ji)三,20μL上(shang)清液,150μL試劑一,于340nm測定10s和190s吸光度,記(ji)為A測1和A測2。 注:樣品測定10s時吸光度后(hou),將(jiang)比(bi)色皿放入25℃(普通物質(zhi))或者37℃(哺乳動物)水浴,3min后拿出,吸打混勻,立即測定190s時的(de)吸(xi)光度。 三、GR活性(xing)計算: a.使用(yong)微量石英比(bi)色皿測(ce)定的計(ji)算公式如下 (1)按(an)蛋白(bai)濃度計算 活性單位定(ding)義:在一定(ding)溫(wen)度中(zhong),pH8.0條件下,每(mei)(mei)毫克(ke)蛋白每(mei)(mei)分(fen)鐘催化1μmol NADPH氧化(hua)為(wei)一個酶活力單位。 GR酶(mei)活(huo)(U/mg prot)= [ (△A測定管-△A空白管(guan))÷(ε×d)×V反總×106] ÷(Cpr×V樣)÷T = 0.536×(△A測(ce)定(ding)管-△A空白管(guan))÷Cpr (2)按樣(yang)本鮮重計算 活性單位(wei)定(ding)義:在一定(ding)溫度中,pH8.0條件下,每(mei)克(ke)樣品每(mei)分(fen)鐘催(cui)化1μmol NADPH氧(yang)化為一個酶活力(li)單位。 GR酶活(U/g 鮮重)= [ (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反(fan)總×106] ÷(V樣÷V樣(yang)總×W)÷T = 0.536×(△A測定管-△A空(kong)白管(guan))÷W △A空白管=A空1-A空(kong)2,△A測定管=A測(ce)1-A測2;ε:NADPH摩爾消光系數6.22×103L/mol/cm;d:比(bi)色(se)皿光徑(jing),1 cm;V反總:反應體系總體積,200μL=2×10-4 L;106:1 mol=1×106μmol; Cpr:上清液蛋白濃度(mg/mL);W :樣品質量;V樣:加入反應體系中上(shang)清液體積,20μL =2×10-2 mL;V樣總(zong):提(ti)取液體積,1 mL;V樣總(zong):提取液體積, 1 mL;T:反(fan)應(ying)時間,3 min。 b.使用96孔板測定的計算公式如(ru)下 (1)按蛋(dan)白(bai)濃度計(ji)算(suan) 活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0條件下,每(mei)(mei)毫克蛋白每(mei)(mei)分鐘(zhong)催(cui)化1μmol NADPH氧(yang)化。 GR酶活(U/mg prot)= [ (△A測定-△A空白)÷(ε×d)×V反(fan)總(zong)×106]÷(Cpr×V樣)÷T =0.893×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr (2)按樣本鮮重計(ji)算 活性(xing)單位定義:在(zai)一定溫度中,pH8.0條件(jian)下,每克(ke)樣品每分(fen)鐘催(cui)化1μmol NADPH氧化。 GR酶(mei)活(U/g鮮重)= [(△A測(ce)定管-△A空(kong)白(bai)管(guan))÷(ε×d)×V反總×106]÷(V樣÷V樣總(zong)×W÷T =0.893×(△A測定管-△A空白管)÷W △A空白管=A空1-A空2,△A測定管=A測1-A測2;ε:NADPH摩爾(er)消光系數6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光徑(jing),0.6 cm;V反(fan)總:反(fan)應體系總體積,200μL=2×10-4 L;106:1 mol=1×106μmol; Cpr:上清液蛋白濃度(du)(mg/mL);W :樣品質量;V樣:加入反(fan)應體(ti)系中上清液(ye)體(ti)積,20μL =2×10-2 mL;V樣總:提取液(ye)體積,1 mL;V樣總(zong):提取液體(ti)積,1 mL;T:反應時(shi)間(jian),3 min。 注意事(shi)項: (1)樣品處理等過(guo)程均需要在冰上進行,且須在當日測定酶活力,勻漿液避免(mian)反復(fu)凍融; (2)試劑三須現配現用,配置完后,置于冰上; (3)測定前須先(xian)用1~2個樣做預(yu)實驗,確保180s內吸光值變(bian)化呈線(xian)性,哺乳動物(wu)組織一(yi)般須用試劑(ji)一(yi)稀(xi)釋2~5倍; (4)細(xi)胞(bao)中GR活性測(ce)定時,細胞數目(mu)須在300萬(wan)-500萬(wan)之間,細(xi)胞中GR的提取時可加試劑一后研(yan)磨或超(chao)聲(sheng)波(bo)處理,不能用細(xi)(xi)胞(bao)裂解液處理細(xi)(xi)胞(bao)。
相關文獻: 《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》 作者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影響因子:3.06 PMID:30301226 《A C2H2 zinc-finger protein OsZFP213 interacts with OsMAPK3 to enhance salt tolerance in rice》 作者:Zeyong Zhang,Huanhuan Liu,Ce Sun,Qibin Ma,Huaiyu Bu,Kang Chong,Yunyuan Xu 期刊:Journal of Plant Physiology 影響因子:2.825 PMID:30055519 《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448 谷胱甘肽還原酶(GR)活性檢測試劑盒 |