產品名(ming)稱:NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測試劑盒產品(pin)英文名: NADP Malic Enzyme(NADP-ME) Assay Kit產品貨號:BC1120 產(chan)地:北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三(san)樓產品規格:50管/48樣 產品(pin)商標:solarbio 保存(cun)(cun)與運輸:4℃保存(cun)(cun)或-20℃保存(cun)(cun); 參考(kao)價格:420 庫存狀(zhuang)態:現貨 關(guan)鍵字(zi):NADP蘋果酸(suan)酶試(shi)劑(ji)盒(he)|活性檢測(ce)試劑(ji)盒|NADP-ME活性檢測|試劑盒(he)
簡要介紹: ME 廣泛存在(zai)于微(wei)生物(wu)、培養(yang)細胞、動物(wu)和(he)植(zhi)物(wu)胞漿中(zhong),尤其在(zai)植(zhi)物(wu)組織中(zhong)活(huo)性(xing)(xing)較高。ME 催 化蘋果酸(suan)氧化脫羧的(de)(de)可逆反應(ying),產生丙(bing)tong酸(suan)和(he) CO2,以及伴隨 NAD(P)+的(de)(de)還原(yuan)反應(ying),是蘋果酸(suan)代謝 的(de)(de)關(guan)鍵酶(mei)。ME 活(huo)性(xing)(xing)與生物(wu)合(he)成和(he)抗(kang)氧化密(mi)切相關(guan)。近年來植(zhi)物(wu) ME 活(huo)性(xing)(xing)測(ce)定較多,已(yi)經成為抗(kang)氧 化研究的(de)(de)熱點。根據輔酶(mei)專一性(xing)(xing)和(he)對底(di)物(wu)特異性(xing)(xing)的(de)(de)不同,可將(jiang) ME 分為 NAD-ME(EC1.1.1.38)和(he) NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME 催化 NADP+還原(yuan)成 NADPH,在(zai) 340nm 下測(ce)定 NADPH 增加速率。
產品詳(xiang)細描述(shu) 產品內容: 提(ti)取液:液體 70mL×1 瓶,4℃保存; 試劑(ji)一(yi):液(ye)體 40mL×1 瓶(ping),4℃保存(cun); 試劑二:粉(fen)劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入(ru) 20mL 提取(qu)液(ye)充分溶解備用; 試劑三:粉劑×2 支,4℃保存;用(yong)時每支加 1mL 雙蒸(zheng)水充分溶解備用(yong); 試劑四:粉(fen)劑×2 支,-20℃保存(cun);用時每支加 500μL 雙蒸水(shui)充分溶解備用。 工作液:在 15mL 試劑二中加入 2mL 試劑三(san)和 1mL 試劑四,可以根據比(bi)例現(xian)用現(xian)配(pei)。 產品說明: ME 廣(guang)泛存在(zai)(zai)于微(wei)生物(wu)、培養細胞、動物(wu)和植物(wu)胞漿中(zhong),尤(you)其在(zai)(zai)植物(wu)組織中(zhong)活性較(jiao)高(gao)。ME 催(cui)(cui) 化蘋(pin)果酸(suan)氧化脫羧的(de)可逆(ni)反(fan)應,產(chan)生丙tong酸(suan)和 CO2,以及伴隨 NAD(P)+的(de)還原反(fan)應,是蘋(pin)果酸(suan)代謝 的(de)關(guan)鍵酶。ME 活性與生物(wu)合成和抗氧化密切相關(guan)。近年來植物(wu) ME 活性測定較(jiao)多(duo),已(yi)經(jing)成為(wei)抗氧 化研究的(de)熱(re)點。根據輔酶專一性和對底物(wu)特異性的(de)不同,可將 ME 分為(wei) NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME 催(cui)(cui)化 NADP+還原成 NADPH,在(zai)(zai) 340nm 下測定 NADPH 增加(jia)速率(lv)。 試(shi)驗中所(suo)需的儀器和試(shi)劑: 紫外分光(guang)光(guang)度(du)計、低溫離心機、水(shui)浴鍋、可調節移(yi)液器、1mL 石(shi)英比(bi)色皿、勻漿器和蒸餾水(shui)
操(cao)作步驟: 細(xi)(xi)(xi)菌(jun)、細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)或(huo)組織樣品的制(zhi)備(bei): 細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或(huo)培養細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao):先收集細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)到離心管內,棄上清(qing),按照每 500 萬細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)加入 1mL 提取 液,超聲(sheng)波破(po)碎細(xi)(xi)(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(功(gong)率 20%,超聲(sheng) 3s,間(jian)隔 10s,重(zhong)復 30 次)。8000g 4℃離心 10min, 取上清(qing),置冰上待(dai)測。 組織:稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提(ti)取液進行冰(bing)浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上(shang)清,置 冰(bing)上(shang)待測(ce)。 血清(漿)樣品:直接(jie)檢(jian)測(ce)。 - 測定步驟:
- 紫外分光光度(du)計預熱 30min 以(yi)上,調(diao)節波長 340nm,蒸餾水調(diao)零(ling)。
- 將試(shi)劑一(yi)在(zai) 37℃(哺乳動物(wu))或 25℃(其它(ta)物(wu)種)中保溫 15min 左右。
- 操作表:
試劑名稱(cheng)(μL) | 測定管 | 試劑一(yi) | 600 | 工作液 | 270 | 樣本 | 30 |
將上(shang)述(shu)試劑按順序加入(ru) 1 mL 石英比色皿中,混(hun)勻后(hou)在 37℃(哺(bu)乳動物(wu))或 25℃(其它物(wu)種), 340 nm 波長下記錄(lu)初(chu)始吸(xi)光(guang)(guang)度 A1 和(he)反應 1min 后(hou)的吸(xi)光(guang)(guang)度 A2,計算ΔA=A2-A1。
注意事項: - 若 A2-A1 大于 0.5,需(xu)將酶液用提取液稀釋,使 A2-A1 小于 0.5,可提高(gao)檢測(ce)靈敏度。
- 實驗時,試(shi)劑(ji)三、試(shi)劑(ji)四和樣本在冰上放(fang)置,以免變(bian)性和失(shi)活。試(shi)劑(ji)一 37℃或 25℃水浴(yu)放(fang)置。
- 比色皿(min)中反應(ying)(ying)液(ye)的(de)溫度必須保持 37℃或 25℃,取小燒(shao)杯一(yi)只裝入一(yi)定量的(de) 37℃或 25℃蒸餾水, 將此燒(shao)杯放(fang)入 37℃或 25℃水浴鍋中。在反應(ying)(ying)過程中把比色皿(min)連同反應(ying)(ying)液(ye)放(fang)在此燒(shao)杯中。
- 兩(liang)個人同時做此實(shi)驗(yan),一(yi)(yi)個人比色,一(yi)(yi)個人計時,以保證實(shi)驗(yan)結果的準確性(xing)。
- 如果ΔA<0.01,可(ke)將(jiang)反應時間延(yan)長到 5 分鐘或 10 分鐘。
- NADP-ME 活(huo)性(xing)計算:
- 組織中(zhong) NADP-ME 活(huo)力的計(ji)算:
- 按(an)樣本蛋白濃度計算:
單(dan)位的(de)定義:每 mg 組織(zhi)蛋(dan)白在(zai)反應(ying)體系中(zhong)每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單(dan)位。 NADP-ME(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=4823×ΔA÷Cpr - 按樣本鮮重計算:
單(dan)(dan)位的定義:每(mei) g 組織在反(fan)應體系中每(mei)分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一(yi)個酶(mei)活(huo)力單(dan)(dan)位。 NADP-ME(U/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T =4823×ΔA÷W - 細菌或細胞中 NADP-ME 活力的計算:
- 按樣本(ben)蛋白濃度計算(suan):
單(dan)位(wei)的定義:每(mei) mg 組織蛋白(bai)在反應體系中每(mei)分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為(wei)一個酶活(huo)力(li)單(dan)位(wei)。 NADP-ME(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=4823×ΔA÷Cpr - 按(an)細菌或細胞密度計(ji)算:
單(dan)位的(de)定義:每 1 萬個細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞在反應體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為(wei)一個酶活力(li) 單(dan)位。 NADP-ME(U/10 4 cell)=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷(ε×d)×10 9]÷(V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)×500) ÷T=9.65×ΔA。 - 血(xue)清中 NADP-ME 活力的計算:
單位的定義:每 mL 血清在反應體(ti)系(xi)中每分鐘(zhong)生(sheng)成 1 nmol NADPH 定義為一(yi)個酶(mei)活力(li)單位。 NADP-ME(U/mL)=[ΔA×V 反總(zong)÷(ε×d)×10 9]÷V 樣÷T =4823×ΔA。 V 反總(zong):反應體(ti)系總(zong)體(ti)積,9×10 -4 L;ε:NADPH 摩爾消光系數,6.22×10 3L/mol/cm;d:比色 皿光徑(jing),1cm;V 樣:加入樣本(ben)體(ti)積,0.03 mL;V 樣總(zong):加入提取液(ye)體(ti)積,1 mL;T:反應時間, 1min;Cpr:樣本(ben)蛋白質(zhi)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhi)量(liang),g;500:細菌或(huo)細胞總(zong)數,500 萬(wan)。
相關文獻: 《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者(zhe):Xiaofen Fu, Pengsong Li,Lei Zhang, Shizhong Li 期刊(kan):Applied Microbiology and Biotechnology 影響(xiang)因子:3.67 PMID:30673809 NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測試劑盒 |