輔酶ⅡNADP(H)含量檢測試劑盒 可見分光光度法 注意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定 BC1100 50T/24S 酸性提取液:50mL×1 瓶,4℃保存; 堿性提取液:50mL×1 瓶,4℃保存; 試劑一:基質緩沖液 15mL×1 瓶,4℃保存; 試劑二:粉劑×1 支,-20℃保存,用時加入 4mL 雙蒸水,混勻; 試劑三:粉劑×1 支,-20℃保存,用時加入 4mL 雙蒸水,混勻; 試劑四:粉劑×1 支,4 ℃保存,用時加入 4mL 雙蒸水,混勻; 試劑五:液體 1.8mL×1 支,4 ℃保存; 試劑六:液體 30mL×1 瓶,4 ℃保存; 試劑七:液體 50mL×1 瓶,4 ℃保存。 一、NADP 和 NADPH 的提取: 1、血清(漿)中 NADP 和 NADPH 的提取: NADP 的提取:取 0.1mL 血清(qing)(漿(jiang)),加入 0.9 mL 酸性(xing)提取液,煮沸 5min(蓋(gai)緊(jin));冰(bing)浴冷(leng)卻后,10000g 4℃離(li)心 10min;取上清(qing)加入等(deng)體積(ji)堿性(xing)提取液使之中和;混勻,10000g 4℃離(li)心 10min,取上清(qing),冰(bing)上保存(cun)待(dai)測(ce)。 NADH 的提(ti)取:取 0.1mL 血(xue)清(qing)(qing)(漿),加(jia)入 0.9 mL 堿性(xing)提(ti)取液,煮沸 5min,冰(bing)浴(yu)中冷卻(que)后,10000g 4℃離(li)心(xin)10min,取上(shang)(shang)清(qing)(qing)加(jia)入等體(ti)積酸性(xing)提(ti)取液使之中和(he);混勻,10000g 4℃離(li)心(xin) 10min,取上(shang)(shang)清(qing)(qing),冰(bing)上(shang)(shang)保存待測。 2、組織中 NADP 和 NADPH 的提取: NADP 的提取:稱取約 0.1g 組織,加入 0.9 mL 酸性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(蓋緊),冰浴冷卻后,10000g4℃離心 10min,取上清加入等體積堿性提取液混勻,10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。 NADPH 的提取(qu):稱取(qu)約 0.1g 組織,加入 0.9 mL 堿性提取(qu)液,冰浴研磨,煮沸 5min(蓋緊),冰浴冷卻后,10000g4℃離心 10min,取(qu)上清加入等體積酸性提取(qu)液混勻,10000g 4℃離心 10min,取(qu)上清,冰上保存待測。 3、細胞或細菌中 NADP 和 NADPH 的提取: NADP 的(de)提取(qu)(qu):收集 400-500 萬細胞或細菌,加入 0.9 mL 酸性(xing)提取(qu)(qu)液(ye),超聲(sheng)(sheng)波破碎 1min(強度 20%或 200W,超聲(sheng)(sheng) 2s,停 1s),煮沸 5min(蓋緊,以防止水分散失(shi)),冰(bing)浴中冷卻后,10000g 4 ℃離(li)心 10min,取(qu)(qu)上清(qing)液(ye)另一新的(de)離(li)心管(guan)中,加入等體積的(de)堿性(xing)提取(qu)(qu)液(ye)使之中和,混(hun)勻,冰(bing)上保存(cun)待(dai)測。 NADH 的提取(qu)(qu):收集 400-500 萬細胞或細菌,加入 0.9 mL 堿性(xing)提取(qu)(qu)液(ye),超(chao)聲波破碎 1min(強度 20%或 200W,超(chao)聲 2s,停 1s),煮沸 5min(蓋(gai)緊,以防止(zhi)水分散失),冰浴中(zhong)(zhong)冷卻后(hou),10000g 4 ℃離心(xin) 10min,取(qu)(qu)上清液(ye)另(ling)一(yi)新(xin)的離心(xin)管(guan)中(zhong)(zhong),加入等體積(ji)的酸(suan)性(xing)提取(qu)(qu)液(ye)使(shi)之中(zhong)(zhong)和,混勻,冰上保存(cun)待測 輔酶ⅡNADP(H)含量檢測試劑盒 |