Ca++Mg++ ——ATP酶活性檢測試劑盒 產品(pin)英文名:Ca++Mg++ ——ATPase Assay Kit產品貨號:BC0960 產地:北京市(shi)通州區(qu)馬駒橋聯東U谷8三(san)樓產品規格(ge):50管/24樣 產品商標:solarbio 保(bao)(bao)存與運輸(shu):4℃保(bao)(bao)存或-20℃保(bao)(bao)存; 參(can)考價格:260 庫存狀態:現(xian)貨 關鍵字(zi):ATP酶活性檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)|ATP檢測試劑盒|
簡(jian)要介紹(shao): Ca++ Mg++-ATP 酶廣泛分布于植物、動物、微生(sheng)物和細胞中(zhong),可(ke)催化ATP 水解生(sheng)成ADP 和無機磷。 根(gen)據Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 生成ADP 及無機磷,通過測定(ding)無機磷的(de)量來(lai)確定(ding)ATP 酶活性高低。
產品詳細描述 產品(pin)內容: 試劑一:液體30mL×1 瓶,4℃保存。 試劑二:液(ye)體4mL×1 瓶,4℃保存。 試劑三:粉劑×2支,-20℃保存;臨用前加(jia)入1mL蒸(zheng)餾(liu)水(shui)充分混勻待(dai)用,現用現配(pei)。用不完的(de)試劑-20℃可保存(cun)一周。 試(shi)劑四:液體(ti)2mL×1 瓶(ping),4℃保存(cun)。 試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存。用時加(jia)入(ru)3mL雙(shuang)蒸水(shui), 4℃保存。 試(shi)劑六:粉(fen)劑×1瓶(ping), 4℃保存。用(yong)時加入(ru)15mL雙蒸水(shui),溶解后4℃保存一周。 試劑七(qi):粉劑×1瓶, 4℃保(bao)存。用時加入(ru)15mL雙蒸水(shui),溶解后4℃保存一周。 試劑八:液體15mL×1 瓶,室溫保存。 標(biao)準品:10mmol/L 標準磷貯(zhu)備液1mL×1 支,4℃保存。 0.5μmol/mL 標準磷應用液配制:將標(biao)準品 20倍稀釋,即取(qu)0.1mL標準品加1.9mL蒸餾(liu)水(shui)充分混勻。 定磷劑的(de)配制:按H2O: 試劑六:試(shi)劑(ji)七:試劑八=2:1:1:1 的(de)比例(li)配制,配好(hao)的(de)定磷劑(ji)應(ying)為(wei)淺(qian)黃色。若(ruo)無色則試劑(ji)失效(xiao),若(ruo)是藍色則為(wei)磷污(wu)染,定磷劑(ji)現用現配。 注意(yi):配試劑用新的燒杯(bei)、玻棒和(he)玻璃(li)移液器,也可以用一次性塑料器皿(min),避免磷污(wu)染。 產品說明(ming): Ca++ Mg++-ATP酶廣泛(fan)分布(bu)于植物(wu)、動物(wu)、微(wei)生物(wu)和細(xi)胞中,可催(cui)化ATP水解生(sheng)成ADP和無機磷。 根(gen)據(ju)Ca++ Mg++-ATP酶(mei)分解(jie)ATP生成ADP及無機磷(lin)(lin),通過測定(ding)無機磷(lin)(lin)的(de)量來確(que)定(ding)ATP酶活性高低。 需自備的(de)儀器及用品: 可見分光光度計、水浴(yu)鍋、臺(tai)式(shi)離心機、可調(diao)式(shi)移液(ye)器、1mL玻璃比色(se)皿、研缽(bo)、冰和蒸餾水。 操作步驟: 一、樣品酶液的制備: 1、細(xi)菌、細(xi)胞或組織樣品的制(zhi)備: 細(xi)菌(jun)或培養細(xi)胞:先收集細(xi)菌(jun)或細(xi)胞到(dao)離心(xin)管內(nei),離心(xin)后棄上清;按照每500萬(wan)細(xi)菌或細(xi)胞加入1mL試(shi)劑一,超聲波破碎細(xi)菌或細(xi)胞(功率20%,超(chao)聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(ce)。 組(zu)織(zhi):稱取約0.1g組(zu)織,加(jia)入(ru)1mL試劑一進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上(shang)清,置冰上(shang)待測。 2、血清(漿)樣品:直接檢(jian)測。 二、測定(ding)步驟(zou): 1、分光光度計預(yu)熱30min以(yi)上,調節波長660nm,蒸(zheng)餾(liu)水調零。 2、酶促反應(在EP管(guan)中加入下列試劑) | 對照(zhao)管 | 測定管(guan) | 試(shi)劑(ji)一(μL) | 130 | 90 | 試(shi)劑二(μL) | 80 | 80 | 試劑三(san)(μL) | 40 | 40 | 試(shi)劑(ji)四(μL) | | 40 | 樣品(μL) | | 200 | 混(hun)勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種(zhong))準確水浴10min | 試(shi)劑五(wu)(μL) | 50 | 50 | 樣(yang)品(μL) | 200 | | 混(hun)勻(yun),4000g,常溫(wen)離心10min,取上清液 |
3定磷(lin)(1.5mLEP管中(zhong)依次加入下列試劑) | 空白管 | 標(biao)準管 | 對照管 | 測定管 | 0.5μmol/ml標準磷應用液(μL) | | 100 | | | 上清液(μL) | | | 100 | 100 | 蒸餾水(μL) | 100 | | | | 定磷試劑(μL) | 1000 | 1000 | 1000 | 1000 |
混(hun)勻,40℃水浴10 min,冷卻室溫,在 660nm處(chu)比色。 三、計算 1、血清(qing)(漿)Ca++ Mg++- ATPase活力的計算: 定(ding)義:規定(ding)每小時每毫(hao)升血清(漿)中Ca++ Mg++- ATP 酶分(fen)解ATP 產生1μmol無機(ji)磷(lin)的量為一個(ge)酶活力(li)單位。 Ca++ Mg++-ATP酶活力(U/mL)= C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白(bai)管)×V總(zong)÷V樣÷T=7.5×(A測定管-A對照管(guan))÷(A標準管-A空(kong)白管(guan)) 2、組織、細菌或細胞中(zhong)Ca++ Mg++- ATPase活(huo)力的計(ji)算: (1)按蛋白濃度計(ji)算(suan): 定(ding)義:規(gui)定(ding)每(mei)小時每(mei)毫(hao)克組(zu)織(zhi)蛋白中Ca++ Mg++- ATP 酶分解(jie)ATP 產生1μmol無機磷(lin)的(de)量(liang)為一個酶活力(li)單(dan)位(wei)。 Ca++ Mg++-ATP酶(mei)活(huo)力(U/ mg)= C標準(zhun)管×(A測定管-A對照(zhao)管)÷(A標準管-A空白(bai)管(guan))×V總÷(Cpr×V樣)÷T=7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管(guan))÷Cpr (2)按樣本鮮(xian)重計算: 定義:規定每小時每克組(zu)織(zhi)中Ca++ Mg++-ATP 酶(mei)分解ATP 產生1μmol無機磷(lin)的量(liang)為一(yi)個(ge)酶活力(li)單位。 Ca++ Mg++-ATP酶活力(U/g)= C標準(zhun)管×(A測定(ding)管-A對照管)÷(A標(biao)準管-A空白管)×V總÷(V樣÷V樣總(zong)×W)÷T=7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管(guan))÷W (3)按細(xi)菌或細(xi)胞密(mi)度計算(suan): 定義:規定每(mei)小時每(mei)1萬個細菌(jun)或細胞(bao)中Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。 Ca++ Mg++-ATP酶活力(U/104)= C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準(zhun)管-A空白管)×V總÷(V樣÷V樣總×500)÷T=0.015×(A測定管-A對照管(guan))÷(A標準管-A空白管) C標準(zhun)管:標準(zhun)管濃度,0.5μmol/mL;V總(zong):酶促反應總(zong)體(ti)積,0.5mL;V樣(yang):加入樣(yang)本體(ti)積,0.2mL ;V樣(yang)總:加入提(ti)取液體積,1mL;T:反應時間(jian),1/6小時(shi);Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本(ben)鮮重(zhong),g;500:細菌或細胞總數(shu),500萬。 注意事項: 1、由于每一個樣都必須(xu)做對照,本試劑盒50管(guan)只能測 24份(fen)Ca++ Mg++-ATP酶。 2、此法具有微量、靈敏、快速(su)的(de)特點。所以對測定(ding)所用(yong)試管要(yao)求(qiu)嚴(yan)格(ge)無磷。避免(mian)磷污染是檢測成敗的(de)關鍵(jian)。 3、空白管和標(biao)準管只要(yao)做一管。
相(xiang)關(guan)文(wen)獻: 《Apigenin suppresses the apoptosis of H9C2 rat cardiomyocytes subjected to myocardial ischemia?reperfusion injury via upregulation of the PI3K/Akt pathway》 作者:Zhengwen Zhou, Yue Zhang, Luning Lin, Jianmei Zhou 期刊:Molecular Medicine Reports 影響因子:1.851 PMID:29901074 《Protein kinase C mediates juvenile hormone-dependent phosphorylation of Na+/K+-ATPase to induce ovarian follicular patency for yolk protein uptake》 作者(zhe):Yu-Pu Jing, Hongli An, Shanjing Zhang, Ningbo Wang, Shutang Zhou 期(qi)刊:Journal of Biological Chemistry 影響(xiang)因子(zi):4.106 PMID: Ca++Mg++ ——ATP酶活性檢測試劑盒 |