線粒體呼吸鏈復合體Ⅳ活性檢測試劑盒 產品英文名: Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅣActivity Assay Kit產品貨號:BC0940 產地:北京市通州區馬駒橋聯(lian)東U谷8三樓(lou)產(chan)品規格:50管/48樣 產品商標:solarbio 保(bao)存(cun)與運輸(shu):4℃保(bao)存(cun)或-20℃保(bao)存(cun); 參(can)考價(jia)格:1900 庫存狀態:現貨 關鍵(jian)字:: : : 線粒體呼吸(xi)鏈(lian)復合(he)體Ⅳ檢測試劑盒(he)| 線粒(li)體(ti)呼吸鏈復合體(ti)Ⅳ|線粒體呼吸鏈|試劑盒(he)
簡要介紹(shao): 線(xian)粒(li)體復(fu)合體Ⅳ又稱細(xi)胞色(se)素C 氧(yang)化酶,也是線(xian)粒(li)體呼吸電子(zi)傳(chuan)遞(di)鏈主路和(he)支(zhi)路的共有成分(fen),負責(ze)催(cui)化還原(yuan)型細(xi)胞色(se)素C 的氧(yang)化,并終把電子(zi)傳(chuan)遞(di)給氧(yang),生成水(shui)。 還原(yuan)型(xing)細胞(bao)色(se)素(su)C 在(zai)550nm 有特征(zheng)光吸收(shou),線(xian)粒體(ti)復(fu)合體(ti)Ⅳ催(cui)化還原(yuan)型(xing)細胞(bao)色(se)素(su)C 生成氧化型(xing)細胞(bao)色(se)素(su)C,因此(ci)550nm 光吸收(shou)下降速率能夠反映線(xian)粒體(ti)復(fu)合體(ti)Ⅳ酶活(huo)性。
產品詳(xiang)細描述 產品內容: 提取液:液體80mL×1 瓶,4℃保存(cun); 試劑(ji)一:液體21mL×2瓶,4℃保(bao)存; 試劑二:粉劑×2支,-20℃保存; 試劑三:粉劑×2支,4℃保存; 工作(zuo)液的(de)配制:臨用前取(qu)試劑(ji)一(yi)(yi)(yi)、試劑(ji)二、試劑(ji)三各(ge)一(yi)(yi)(yi)支,將試劑(ji)二和試劑(ji)三依次轉移到(dao)試劑(ji)一(yi)(yi)(yi)中混合溶(rong)解。 產品說(shuo)明: 線粒(li)(li)體(ti)復(fu)合(he)(he)體(ti)Ⅳ又稱細(xi)胞(bao)色(se)素C氧(yang)(yang)化(hua)酶,也是線粒(li)(li)體(ti)呼吸(xi)電子傳(chuan)遞(di)鏈主路和支路的(de)共有(you)成分,負責(ze)催(cui)化(hua)還原(yuan)型細(xi)胞(bao)色(se)素C的(de)氧(yang)(yang)化(hua),并終(zhong)把(ba)電子傳(chuan)遞(di)給氧(yang)(yang)生成水(shui)。還原(yuan)型細(xi)胞(bao)色(se)素C在(zai)550nm有(you)特征(zheng)光吸(xi)收,線粒(li)(li)體(ti)復(fu)合(he)(he)體(ti)Ⅳ催(cui)化(hua)還原(yuan)型細(xi)胞(bao)色(se)素C 生成氧(yang)(yang)化(hua)型細(xi)胞(bao)色(se)素C,因此(ci)550nm光吸(xi)收下降速率能夠反映線粒(li)(li)體(ti)復(fu)合(he)(he)體(ti)Ⅳ酶活性。 試驗中所(suo)需(xu)的儀器和試劑(ji): 可見分光光度計、臺(tai)式離心(xin)機、水(shui)浴鍋(guo)、可調(diao)式移液器(qi)、1mL玻(bo)璃比色(se)皿、研缽/勻漿器(qi)、冰和蒸餾水(shui)。
操作步(bu)驟: 一、復(fu)合體Ⅳ的提取(qu): - 稱取約0.1g組(zu)織或收集500萬細胞,加入(ru)1.0 mL提取液,用冰浴勻(yun)漿器或研缽勻(yun)漿。
- 4 ℃ 600 g離心(xin)10min。
- 將(jiang)上清液移另一離(li)心管中(zhong),4 ℃ 11000 g離(li)心15min。
- 上清液即胞(bao)漿提取物,可用(yong)于測定從線粒體泄漏的(de)復合(he)體Ⅳ(此步可選做,可以(yi)判斷線(xian)粒體(ti)提取(qu)效果)。
- 在沉淀中(zhong)加入400uL提取液,超聲波(bo)破碎(功率20%,超聲5秒(miao),間隔10秒(miao),重復15次),用于復合體(ti)Ⅳ酶活性(xing)測(ce)定(ding),并且用于蛋白(bai)含量(liang)測(ce)定(ding)。
二、測(ce)定步驟: - 可(ke)見分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)預(yu)熱(re)30min 以上(shang),調節波長550nm,蒸(zheng)餾水調零。
- 樣本(ben)測定
- 將工作液置于(yu)37℃(哺(bu)乳動物(wu))或(huo)25℃(其它物(wu)種)孵(fu)育15min;用不完(wan)的試劑(ji)4℃可保存一周;
- 在1mL玻(bo)璃比色皿(min)中分別加(jia)入
試劑名稱 | 測定管 | 空(kong)白 | 樣(yang)品(μL) | 40 | - | 蒸餾(liu)水(μL) | - | 40 | 工(gong)作液(ye)(μL) | 800 | 800 |
立即混勻,分(fen)別記錄(lu)測(ce)定管(guan)和(he)空(kong)白管(guan)550nm處初始吸(xi)光(guang)值(zhi)A1和(he)1min后的吸(xi)光(guang)值(zhi)A2,測定(ding)管(guan)的記(ji)為A1測定管,A2測定管(guan),空白管(guan)的記為A1空白管,A2空白管。計算(suan)ΔA1=A1測定(ding)管-A2測定(ding)管,ΔA2=A1空白(bai)管-A2空白(bai)管,ΔA=ΔA1-ΔA2。 三、復合體Ⅳ活力單位的計算: 單位定(ding)義:每(mei)mg組織蛋白每(mei)分鐘催化降解1nmol還原型細胞色(se)素C定(ding)義為一個(ge)酶(mei)活力單位。 復合(he)體Ⅳ活力(li)(U/mg prot)=[ΔA×V 反(fan)總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1099×ΔA÷Cpr V 反總:反應體系總體積(ji),8.4×10-4 L;ε:細胞(bao)色素C摩爾消(xiao)光系(xi)數,1.91×104 L / mol /cm;d:比色皿(min)光徑,1cm;V 樣(yang)(yang):加入(ru)樣(yang)(yang)本體積,0.04 mL; T:反(fan)應(ying)時間,1 min;Cpr:樣(yang)(yang)本蛋白質濃度,mg/mL,需(xu)自行測定,建(jian)議使用本公司BCA蛋(dan)白濃度測定試劑盒。 注意事(shi)項: - 為保證實驗(yan)結(jie)果(guo)的(de)準確性,需先取(qu)1-2個樣(yang)做(zuo)預實驗(yan),如果(guo)測定的(de)吸光值過高(高于1),可用蒸餾水稀釋(shi)上清(qing)液后再測定。計算結(jie)果(guo)時注意乘以稀釋(shi)倍(bei)數。若(ruo)(ruo)ΔA大于(yu)0.4,需將(jiang)樣(yang)本稀釋適當倍數(計算公(gong)式中(zhong)乘(cheng)以相應稀釋倍數),使A1-A2 小于(yu)0.2,可(ke)提(ti)高檢(jian)測靈(ling)敏(min)(min)度;若(ruo)(ruo)ΔA偏小,則可(ke)以通過增(zeng)加(jia)加(jia)入(ru)的(de)樣(yang)品體(ti)積來提(ti)高靈(ling)敏(min)(min)度。
- 由于提取(qu)液(ye)中(zhong)含有蛋(dan)(dan)白(bai),所以(yi)在(zai)測定樣(yang)品蛋(dan)(dan)白(bai)濃度時需要減去(qu)提取(qu)液(ye)本身的(de)蛋(dan)(dan)白(bai)含量(單獨測量)。
- 本試劑盒(he)試劑足夠完成50管反應。
- 附:使用(yong)樣本重量(liang)計算公式:(檢(jian)測(ce)樣本數為50T/24S)
A、上清中復合體Ⅳ活(huo)力的計算: 按樣本鮮重計算(suan): 單(dan)(dan)位定義(yi):每g組織在反應體系中每分鐘(zhong)催化降解(jie)1nmol還原型細胞色(se)素(su)C定義(yi)為(wei)一(yi)個(ge)酶活力單(dan)(dan)位。 復合體Ⅳ活力(U/g)=[ΔA1×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W÷V提取×V樣)÷T=1099×ΔA1÷W ΔA1:上(shang)清測(ce)定值;V 反總(zong):反應(ying)體(ti)系總(zong)體(ti)積,8.4×10-4 L;ε:細(xi)胞色素C摩爾消光系數(shu),1.91×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加(jia)入樣本體積,0.04 mL;V提取(qu):加(jia)入提取(qu)液體積,1.0mL。 w:樣本重量,g。T:反(fan)應(ying)時(shi)間,1 min; B、沉淀中復合體Ⅳ活(huo)力的(de)計算: 按樣(yang)本鮮重計算: 單(dan)位(wei)定(ding)義:每g組織在反應體系中每分(fen)鐘催化降解1nmol還原型細胞色素C定(ding)義為一個酶活(huo)力單(dan)位(wei)。 復(fu)合體Ⅳ活力(U/g)=[ΔA2×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W÷V提(ti)取(qu)×V樣)÷T=440×ΔA2÷W ΔA2:沉淀測定值;V 反總(zong):反應(ying)體系總(zong)體積,8.4×10-4 L;ε:細(xi)胞色(se)素(su)C摩爾消(xiao)光(guang)系數,1.91×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣(yang):加入(ru)樣(yang)本體積,0.04 mL;V提取:加入提取液體積(ji),0.4mL。 w:樣(yang)本重量,g。T:反應時間,1 min; C、樣本復合(he)體(ti)Ⅳ總活力的(de)計算: 樣本復合體(ti)Ⅳ總活(huo)力即為上清中復(fu)合體(ti)Ⅳ活力與(yu)沉淀中復(fu)合(he)體Ⅳ活力(li)之和。 按(an)樣(yang)本鮮重(zhong)計算: 復合體Ⅳ(U/g)=1099×ΔA1÷W+440×ΔA2÷W
相關文獻: 《GSK3β-mediated tau hyperphosphorylation triggers diabetic retinal neurodegeneration by disrupting synaptic and mitochondrial functions》 作者:Huazhang Zhu, Weizhen Zhang, Yingying Zhao, Xingsheng Shu, Wencong Wang, Dandan Wang, Yangfan Yang, Zhijun He, Xiaomei Wang & Ying Ying 期刊:Molecular Neurodegeneration 影響因子:8.274 PMID:30466464 《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638 《Roles of TRPA1 and TRPV1 in cigarette smoke -induced airway epithelial cell injury model》 作者:Muyun Wang,Yanbei Zhang,Mengmeng Xu,HaiZhang,Yuqing Chen,Kian Fan Chung,Ian M.Adcock,Feng Li 期刊:Free Radic. Biol. Med. 影響因子:5.657 PMID:30639616 《Nitrogen-doped graphene quantum dots (N-GQDs) perturb redox-sensitive system via the selective inhibition of antioxidant enzyme activities in zebrafish.》 作者:Shun Deng,Ailing Fu,Muhammad Junaid,Yan Wang,Qian Yin,Chen Fu,Li Liu,Dong-Sheng Su,Wan-Ping Bian,De-Sheng Pei 期刊:Biomaterials 影響因子:10.273 PMID:30925289 線粒體呼吸鏈復合體Ⅳ活性檢測試劑盒 |