α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒 產品名稱:: α酮戊二(er)酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒產品英文名: αKetoglutarate Dehydrogenase(α-KGDH) Assay Kit產品貨號:BC0710 產地:北京市通州區馬(ma)駒(ju)橋(qiao)聯(lian)東U谷8三樓產品規格(ge):50管/48樣 產品商標:solarbio 保(bao)存與(yu)運輸(shu):4℃保(bao)存或(huo)-20℃保(bao)存; 參考價格:1300 庫存狀(zhuang)態:現貨 關鍵字:: α酮(tong)戊二酸脫氫酶檢測試(shi)劑盒|α-KGDH檢測試劑(ji)盒|α酮戊二酸脫氫酶(mei)|試劑盒
簡要介紹: α-KGDH(EC1.2.4.2)廣(guang)泛(fan)存在于動(dong)物、植物微生(sheng)物和培養細胞的線粒體中,是三羧酸(suan)循環調控(kong)關鍵酶之一,催化(hua)(hua)α-酮戊二(er)酸(suan)氧化(hua)(hua)脫羧生(sheng)成琥珀酰輔酶A。 α-KGDH催化(hua)α-酮戊二酸、NAD+和(he)輔(fu)酶A生成(cheng)琥珀(po)酰輔(fu)酶A、二氧化(hua)碳和(he)NADH,NADH在340nm有特(te)征吸收(shou)峰,以NADH的生成(cheng)速率表示(shi)α-KGDH活性。
產品詳(xiang)細描(miao)述 產(chan)品內容: 試劑(ji)一:液體60mL×1瓶(ping),4℃保存; 試劑二:液體0.6mL×1支,-20℃保(bao)存(cun); 試(shi)劑三:液體55mL×1瓶,4℃保存; 試劑四:粉(fen)劑×1支,4℃保(bao)存; 試劑(ji)五:粉(fen)劑(ji)×1支,4℃保存; 試劑(ji)(ji)六:粉劑(ji)(ji)×1支,-20℃保存; 試(shi)劑七:粉(fen)劑×1支,-20℃保存; 試劑(ji)八:粉(fen)劑(ji)×1支,-20℃避(bi)光保(bao)存。臨用前加(jia)入(ru)2mL雙蒸水(shui)充分混勻(yun)待(dai)用(yong)(yong),用(yong)(yong)不(bu)完的(de)試劑仍-20℃保存。 工作液的(de)配制:臨用前把試劑四、試(shi)(shi)劑五、試(shi)(shi)劑六、試(shi)(shi)劑七轉移到試(shi)(shi)劑三中混(hun)合溶解待(dai)用。
產品(pin)說明(ming): α-KGDH(EC 1.2.4.2)廣泛存在于(yu)動物、植物微(wei)生物和培養(yang)細(xi)胞的線粒體中,是(shi)三(san)羧酸循環調控(kong)關鍵酶之(zhi)一,催化α-酮戊(wu)二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶A。 α-KGDH催化(hua)α-酮戊二(er)酸、NAD+ 和輔酶A生成琥(hu)珀酰輔酶(mei)A、二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收(shou)峰,以(yi)NADH的生(sheng)成速率表示α-KGDH活性。
試驗所需自備儀器和樣品: 紫外分光光度計、水(shui)浴(yu)鍋、臺式離心機(ji)、可調式移液器(qi)、1mL石(shi)英(ying)比色皿、研缽、冰(bing)和蒸餾水。 操作(zuo)步驟: 一(yi)、α-KGDH的提(ti)取 稱取(qu)約(yue)0.1g組織或收(shou)集約500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL試劑二,冰(bing)浴(yu)用(yong)勻漿器或(huo)研(yan)缽充分(fen)研(yan)磨,4 ℃ 11000 g離心10min,取上清(qing),置冰上(shang)待測。 二、測定(ding)步驟 1. 分光光度(du)計預熱30min以上,調節波長到340 nm,蒸餾水調零 2. 空白管: 取1mL工(gong)作液加入1mL石英(ying)比色皿,37℃孵育5min后取出比色皿,再(zai)依(yi)次加入40μL試劑八和60μL蒸餾水,混(hun)勻并立即測量(liang)340nm處0s的(de)吸光值A1,37℃準(zhun)確反應2min,記錄340nm處2min時的吸(xi)光值(zhi)A2,計算ΔA空白=A2-A1。 3.測(ce)定管: 取(qu)1mL工作(zuo)液加(jia)入1mL石英比色皿,在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)孵育5min后(hou)取出比色皿,再依次加(jia)入40μL試(shi)劑八和60μL樣本(ben),混勻并立即測量340nm處0s的吸(xi)光(guang)值A3,37℃(哺乳動(dong)物)或25℃(其(qi)它物(wu)種(zhong))中(zhong)準確反應2min,記錄(lu)340nm處2min時的吸光值A4,計算ΔA測定=A4-A3。 三、α-KGDH活性計算 1.按樣(yang)本蛋白濃(nong)度(du)計算 單位的定(ding)義:每mg組織(zhi)蛋白在反應(ying)體系中(zhong)每分(fen)鐘生成(cheng)1 nmol的NADH定義(yi)為(wei)一個酶(mei)活力(li)單位(wei)。 α-KGDH活性(U/mg prot)=[(ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總×109]÷(Cpr×V樣) ÷T =1473.7×(ΔA測定-ΔA空白(bai))÷Cpr 2.按樣本鮮重(zhong)計算(suan) 單位(wei)的定義:每g組(zu)織在反應體系(xi)中每(mei)分(fen)鐘(zhong)生成1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。 α-KGDH(U/g 鮮重)=[(ΔA測定-ΔA空(kong)白)÷(ε×d)×V反(fan)總(zong)×109]÷(V樣(yang)÷V樣總×W)÷T =1488.5×(ΔA測定(ding)-ΔA空白(bai))÷W 3. 按(an)細菌或細胞密(mi)度計算 單位的(de)定義:每1萬個(ge)細菌或細胞在反應(ying)體系中(zhong)每分鐘生成(cheng)1 nmol的NADH定義為一個(ge)酶活力單(dan)位。 α-KGDH活(huo)性(U/104cell)=[(ΔA測定-ΔA空(kong)白)÷(ε×d)×V反總(zong)×109]÷(V樣(yang)÷V樣總×500) ÷T =2.977×(ΔA測定(ding)-ΔA空白) V反總:反應體系(xi)總體積(ji),1.1×10-3 L;ε:NADH摩爾消光(guang)系數,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣(yang):加入樣(yang)本體積,0.06mL;V樣總:加入試劑一和試劑二(er)體(ti)積,1.01mL;T:反(fan)應(ying)時間,2min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質(zhi)量(liang),g;500:細(xi)菌(jun)或細(xi)胞總數(shu),500萬。 注(zhu)意事(shi)項: 1、測定過程中所有試劑和樣本在冰(bing)上(shang)放置,以(yi)免變(bian)性和失活。 2、比色皿(min)中(zhong)反應液的(de)溫度(du)必須保持37℃或25℃,取小燒杯(bei)一只裝入一定量(liang)的37℃或25℃蒸餾(liu)水,將(jiang)此燒杯放入(ru)37℃或25℃水浴鍋中(zhong)(zhong)。在反應過程中(zhong)(zhong)把比(bi)色皿連同反應液放在此燒杯中(zhong)(zhong)。 3、兩個人同時做此實(shi)驗,一個人比色,一個人計時,以保證實(shi)驗結果(guo)的準(zhun)確性。 4、測(ce)定管的ΔA值在0.01-0.25之(zhi)間,若測定管的ΔA值(zhi)大(da)于0.25,需將樣本進行(xing)稀釋。
相關文獻: 《Inhibition of?α?ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in?poplar via?changes in?GABA shunt》 作者:Jianyun?Yue,Changjian?Du,Jing?Ji,Tiantian?Xie, Wei?Chen,Ermei?Chang, Lanzhen?Chen, Zeping?Jiang,Shengqing?Shi 期刊:Planta 影響因子:3.06 PMID: 《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影響因子:3.571 PMID:29845188 《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影(ying)響因子(zi):5.657 PMID:31022448 |