脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)活性檢測試劑盒 脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)活性測定試劑盒說明書 微量法 注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。 貨號: BC0665 規格: 100T/48S 產品內容: 提取液:液體 110 mL×1 瓶,4℃保存。 試劑一:液體 20 mL×1 瓶,4℃保存。 試劑二:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加入 3mL 蒸餾水充分溶解。 試劑三:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加入 3.5 mL 蒸餾水充分溶解。 試劑四:液體 8 mL×1 瓶,4℃避光保存。 標準(zhun)品(pin):粉劑 10 mg×1 支,4℃避光(guang)保(bao)存。臨用前加入 1 mL 蒸餾水,配制成 10 mg/mL 的(de)標準(zhun)溶(rong)液。 產品簡介: 脫氫(qing)(qing)抗(kang)壞(huai)血酸(suan)(suan)(suan)還原酶(Dehydroascorbate reductase,DHAR)是(shi)(shi)植(zhi)物體內一種重要的(de)(de)抗(kang)氧化(hua)(hua)(hua)酶,是(shi)(shi)抗(kang)壞(huai)血酸(suan)(suan)(suan)-谷胱甘肽氧化(hua)(hua)(hua)循(xun)環中(zhong)促進抗(kang)壞(huai)血酸(suan)(suan)(suan)再生(sheng)的(de)(de)關鍵酶。DHAR 在循(xun)環中(zhong)利用抗(kang)壞(huai)血酸(suan)(suan)(suan)維持植(zhi)物體內抗(kang)壞(huai)血酸(suan)(suan)(suan)的(de)(de)正(zheng)常代謝(xie)水平,保護細胞組分抵(di)御氧化(hua)(hua)(hua)損傷方面(mian)發揮著(zhu)重要作用。DHAR 催化(hua)(hua)(hua)還原性谷胱甘肽(GSH)還原脫氫(qing)(qing)抗(kang)壞(huai)血酸(suan)(suan)(suan)(DHA)生(sheng)成 AsA,GSH 能(neng)和 5,5’-二硫代-雙-(2-硝基(ji)苯(ben)甲酸(suan)(suan)(suan))(DTNB)反應產(chan)生(sheng) 2-硝基(ji)-5-巰基(ji)苯(ben)甲酸(suan)(suan)(suan)(TNB)和谷胱甘肽二硫化(hua)(hua)(hua)物(GSSG)。TNB 在波長 412 nm 處具有大光吸收。通(tong)過測定 GSH 的(de)(de)減(jian)少速率,計(ji)算 DHAR 活性。 自備儀器和用品: 研缽/勻漿器(qi)(qi)、冰、低溫離心(xin)機、可(ke)見分光(guang)光(guang)度計/酶標(biao)儀、水浴鍋、微量玻璃(li)比色皿(min)/96 孔板、可(ke)調(diao)式移液器(qi)(qi)和蒸(zheng)餾水。 操作步驟: 一、樣品的處理 1. 組織:按照組織質量(g): 提取液體積(mL)1 : 5-10 的比例(建議稱取約 0.1 g 組織,加提取液 1 mL),冰上充分研磨勻漿,8000 g,4℃ 離心 10 min,取上清液置于冰上待測。 2. 細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為 500-1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加入 1 mL 提取液),冰浴超聲超聲破碎細胞(功率 300w,超聲 3s,間隔 7s,總時間 3 min);然后 8000 g,4℃,離心 10 min,取上清置于冰上待測。 3. 血清等液(ye)體:直接檢測。 二、DHAR 測定操作: 1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min,調節波長到 412 nm,蒸餾水調零。 2. 標準溶(rong)(rong)液(ye)的(de)配制:將 10 mg/mL 標準液(ye)用蒸餾水稀(xi)釋為 0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.0015625mg/mL 的(de)標準溶(rong)(rong)液(ye)備用。 脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)活性檢測試劑盒 |