單脫氫抗壞血酸還原酶活性檢測試劑盒 產品名稱:單脫氫抗壞(huai)血酸還原酶(MDHAR)活(huo)性(xing)檢測試劑盒(he)產品英文名: Monodehydroascorbate Reductase (MDHAR) Assay Kit產品貨(huo)號:BC0650 產地(di):北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓產品(pin)規格:50管/48樣 產品商標(biao):solarbio 保存(cun)與運輸:4℃保存(cun)或(huo)-20℃保存; 參(can)考價格:1040 庫存狀態:現(xian)貨(huo) 關鍵字:單脫氫抗(kang)壞血酸還原酶|抗壞血酸還原酶|MDHAR活性檢(jian)測|試劑(ji)盒
簡要介紹: MDHAR 催(cui)化(hua) MDHA 還(huan)原MDHA 生成(cheng) AsA;在抗壞血酸(suan)氧化(hua)還(huan)原代謝中具有(you)重要作用。MDHAR 催(cui)化(hua) NADH 還(huan)原MDHA 生成(cheng) AsA和NAD+,NADH在340nm有(you)特征吸收峰,但NAD+沒有(you)。通過測(ce)定340nm光吸收下(xia)降速率,來(lai)計算MDHAR活性。
產品詳細描述 商品貨號: | 商品品牌: | 規格(ge) | 基(ji)本售(shou)價: | 選擇(ze)規格 | BC0650-50管/48樣 | Solarbio | 50管/48樣 | 1040.00元 | |
產品內容: 提(ti)取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存。 試劑一(yi):液體 40mL×1 瓶,4℃保存。 試劑二:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨(lin)用前(qian)加入 5mL 蒸餾水充(chong)分(fen)溶解。 試劑三:粉劑×1 瓶,-20℃避光保存。臨(lin)用前(qian)加入 5mL 蒸餾(liu)水(shui)充分(fen)溶解。 試劑四:液體×1 瓶,-20℃避光保存。臨用前加 5mL 試劑一充分(fen)溶解。
產品說(shuo)明: MDHAR 催化 MDHA 還(huan)原(yuan)(yuan)生(sheng)成 AsA,在(zai)抗壞血酸氧化還(huan)原(yuan)(yuan)代謝中具有(you)重要作(zuo)用。 MDHAR 催化 NADH 還(huan)原(yuan)(yuan) MDHA 生(sheng)成 AsA 和(he) NAD+,NADH 在(zai) 340 nm 有(you)特征吸收(shou)峰,但 是 NAD+沒有(you)。通過(guo)測(ce)定 340 nm 光吸收(shou)下降速率,來(lai)計算出 MDHAR 活性。 實(shi)驗中所(suo)需(xu)儀器(qi)及設備(bei): 研缽、冰(bing)、臺式(shi)離心機、紫外分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計、1mL 石英(ying)比(bi)色皿、可調(diao)式(shi)移液槍和雙蒸水。
操作步驟: 一、粗酶(mei)液提取: 1. 組織(zhi):按照組織(zhi)質量(g):提(ti)取(qu)液體積(mL)1:5-10 的(de)比例(建議稱取(qu)約(yue) 0.1g 組織(zhi),加(jia)入 1mL 提(ti)取(qu)液進行冰浴勻漿。10000rpm,4℃離心 10min,取(qu)上清置冰上待測。 2. 細(xi)菌、真(zhen)菌:按照細(xi)胞數量(10 4個):提取(qu)液體積(mL)為 500-1000:1 的比(bi)例(建議 500 萬 細(xi)胞加入 1mL 提取(qu)液),冰浴超聲(sheng)超聲(sheng)破碎細(xi)胞(功率 300w,超聲(sheng) 3s,間(jian)隔 7s,總時間(jian) 3min); 然后 10000rpm,4℃,離心 10min,取(qu)上(shang)清置于冰上(shang)待(dai)測。 二、MDHAR 測定操作: 1. 分光光度計預熱 30 min,調節波(bo)長到 340 nm,蒸(zheng)餾水調零。 2. 試劑(ji)一(yi)在 25℃水浴鍋中(zhong)預(yu)熱(re) 30 min。 3. 依次在石英比色(se)皿(min)中加入下(xia)列試劑
試劑名稱(μL) | 試(shi)劑二(er) | 試劑(ji)三 | 試劑四(si) | 試(shi)劑一 | 蒸餾水 | 上清液 | 空白管 | 100 | 100 | 100 | 600 | 100 | | 測定管 | | 100 |
迅速混勻后于 340nm 比色,記錄 30s 和 150s 的(de)吸光值(zhi)。分別記為 A1、A2,ΔA=A1-A2,得(de)到(dao) △A 測定、△A 空白。
三、MDHAR 活(huo)性計算: (1)按蛋(dan)白濃度計算(suan) MDHAR 活(huo)性單(dan)位定義:25℃中每毫克(ke)蛋白(bai)(bai)每分(fen)鐘氧(yang)化 1μmol NADH 為一個酶活(huo)單(dan)位。 MDHAR (U/mg prot) = [(△A 測定管(guan)-△A 空白(bai)(bai)管(guan))÷(ε×d)×V 反(fan)總×10 6]÷(Cpr×V 樣)÷T =0.804×(△A 測定管(guan)-△A 空白(bai)(bai)管(guan)) ÷Cpr (2)按樣本鮮(xian)重(zhong)計(ji)算 MDHAR 活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)(wei)定(ding)(ding)義:25℃中(zhong)每克樣(yang)(yang)(yang)品每分鐘(zhong)氧化 1μmol NADH 為(wei) 1 一個酶活(huo)單(dan)位(wei)(wei)。 MDHAR (U/g 鮮重) =[(△A 測(ce)定(ding)(ding)-△A 空白)÷(ε×d)×V 反總×10 6]÷(V 樣(yang)(yang)(yang)÷V 樣(yang)(yang)(yang)總×W)÷T =0.804×(△A 測(ce)定(ding)(ding)管(guan)-△A 空白管(guan)) ÷W (3)按(an)細胞數量計(ji)算 MDHAR 活性單(dan)(dan)位定(ding)(ding)義(yi):25℃中(zhong)每(mei)(mei) 10 4個細(xi)(xi)胞(bao)每(mei)(mei)分鐘氧化 1μmol NADH 為 1 一(yi)個酶活單(dan)(dan)位。 MDHAR (U/10 4 cell) =[ (△A 測定(ding)(ding)管-△A 空白(bai)管)÷ε÷d×V 反總×10 6]÷(細(xi)(xi)胞(bao)數量×V 樣÷V 樣總)÷T =0.804×(△A 測定(ding)(ding)管-△A 空白(bai)管) ÷細(xi)(xi)胞(bao)數量 ε:NADH 摩爾消光系數,6220 L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;10 6:1mol=1×10 6μmol;V 反 總:反應體系總體積,1mL=0.001 L;V 樣:加入反應體系中上清液體積,100μL=0.1mL;V 樣總: 提取液體積,1mL;Cpr:上清液蛋白濃度,mg/mL,蛋白質濃度需要另外測定,建議使用本公司蛋 白質含量 BCA 試劑盒;W :樣品質量,g;細胞數量:以 10 4為單位計量,萬個;T:反應時間, 2min
相關文獻: 《Exogenous 24-Epibrassinolide alleviates oxidative damage from copper stress in grape (Vitis vinifera L.) cuttings》 作者(zhe):Ya-li Zhou,Su-fang Huo,Li-ting Wang,Jiang-fei Meng,Zhen-wen Zhang,Zhu-mei Xi 期(qi)刊:Plant Physiology and Biochemistry 影響因子:3.404 PMID:30099273 單脫氫抗壞血酸還原酶活性檢測試劑盒 |