產品名稱(cheng):NADH氧化酶(NOX)活性檢測試劑盒產品英(ying)文(wen)名: NADH Oxidase(NOX) Assay Kit產(chan)品貨號:BC0630 產(chan)地:北京市(shi)通州區(qu)馬駒橋聯東U谷(gu)8三樓產品規(gui)格:50管/24樣 產品(pin)商標:solarbio 保存與(yu)運輸(shu):4℃保(bao)存或-20℃保(bao)存(cun); 參考價(jia)格:560 庫存狀態:現(xian)貨 關鍵字:NADH氧化酶試劑盒|活性(xing)檢測試(shi)劑盒| NOX活性檢(jian)測|試劑盒
簡要介紹: NOX(EC 1.6.99.3)廣(guang)泛存(cun)在于(yu)動物、植(zhi)物、微生(sheng)物和培養細(xi)胞(bao)中,可在氧(yang)氣存(cun)在下(xia),直(zhi)接將NADH氧(yang)化為(wei)NAD。該酶(mei)不僅參與(yu)NAD的(de)(de)(de)再(zai)生(sheng),而且與(yu)免疫反應(ying)密切相(xiang)關。NOX能夠將NADH氧(yang)化為(wei)NAD,NADH的(de)(de)(de)氧(yang)化與(yu)2,6二氯酚靛藍(DCPIP)的(de)(de)(de)還(huan)原(yuan)相(xiang)偶聯,藍色(se)(se)的(de)(de)(de)DCPIP被(bei)還(huan)原(yuan)為(wei)無色(se)(se)的(de)(de)(de)DCPIP,在600nm下(xia)測定藍色(se)(se)DCPIP的(de)(de)(de)還(huan)原(yuan)速率(lv)計算出NADH氧(yang)化酶(mei)活(huo)性的(de)(de)(de)大(da)小。
產品詳(xiang)細描述 商品貨(huo)號: | 商(shang)品品牌: | 規格 | 基本售(shou)價: | 選擇規格 | BC0630-50管(guan)/24樣 | Solarbio | 50管/24樣 | 560.00元 | |
產品內(nei)容 試劑一:液體(ti) 25mL×1 瓶(ping),-20℃保存。 試劑二(er):液(ye)體 5mL×1 瓶(ping),4℃保存。 試劑三:液體 0.5mL×1 瓶,-20℃保存。 試(shi)劑四:液體 70mL×1 瓶(ping),4℃保存。 試劑五(wu):液體 10 mL×1 瓶,4℃保存(cun)。 試劑六:粉劑×2 瓶,-20℃保存;臨用前(qian)每瓶加(jia)入 9mL 雙蒸水,用不完的試劑仍-20℃保存。
產品說明 NOX(EC 1.6.99.3)廣泛存在(zai)于動物(wu)、植(zhi)物(wu)、微(wei)生物(wu)和培養細胞中,可在(zai)氧(yang)氣存在(zai)下(xia),直接(jie)將(jiang) NADH 氧(yang)化為(wei) NAD。該酶不僅參與 NAD 的(de)(de)(de)(de)再(zai)生,而且與免疫反應(ying)密切(qie)相關。 NOX 能夠將(jiang) NADH 氧(yang)化為(wei) NAD,NADH 的(de)(de)(de)(de)氧(yang)化與 2,6 二氯酚靛(dian)藍(lan)(DCPIP)的(de)(de)(de)(de)還(huan)原相偶聯, 藍(lan)色(se)的(de)(de)(de)(de) DCPIP 被還(huan)原為(wei)無色(se)的(de)(de)(de)(de) DCPIP,在(zai) 600nm 下(xia)測定藍(lan)色(se) DCPIP 的(de)(de)(de)(de)還(huan)原速率計算出 NADH 氧(yang)化 酶活(huo)性的(de)(de)(de)(de)大小。 自備儀器(qi)和試劑 可(ke)見分光光度計、臺式(shi)離心機、水(shui)浴鍋、可(ke)調式(shi)移液器(qi)、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水(shui)
操(cao)作步驟 一、樣品測定的準(zhun)備: 1、 組(zu)織、細菌或細胞中胞漿(jiang)蛋白與線粒體(ti)蛋白的分離: 2、 準確稱取(qu) 0.1g 組織或收集 500 萬細胞,加入(ru) 1mL 試(shi)劑(ji)一和 10uL 試(shi)劑(ji)三,用(yong)冰浴(yu)勻漿器或研缽 勻漿。 3、 將勻漿 600g,4℃離心 5min。 4、 將上清液(ye)移另(ling)一離心管中,11000g,4℃離心 10min。 5、 將上清液轉移另一(yi) EP 管中,用于線粒體(ti)中泄露 NOX 活性測定。 6、 沉淀即為線(xian)粒體,加入 200uL 試劑二和(he) 2uL 試劑三(san),用于 NOX 活性測定(ding)。 7、 NOX 總酶活即為上清(qing)中 NOX 活性與(yu)沉淀(dian)中 NOX 活性之(zhi)和。 二、測定(ding)步驟和加樣(yang)表: 1、可見分光光度計預熱(re) 30min 以上; 2、試劑(ji)四 37℃保溫放(fang)置。
試(shi)劑名稱(µL) | 測定管 | 對(dui)照管 | 試劑四 | 700 | 700 | 試(shi)劑五(wu) | 100 | 100 | 樣本 | 40 | 40 | 蒸餾水 | | 160 | 試(shi)劑(ji)六(liu) | 160 | |
將上述試(shi)劑按順(shun)序在(zai) 1mL 玻璃比(bi)(bi)色皿(min)(min)中(zhong)操作,加入試(shi)劑六后立即混勻,同時(shi)開始(shi)計(ji)時(shi),在(zai) 600nm 波(bo)長(chang)下記(ji)(ji)錄(lu)(lu) 20 秒時(shi)的(de)初始(shi)吸光度 A1,迅速將比(bi)(bi)色皿(min)(min)連同反(fan)應液一(yi)起放入 37℃水(shui)浴中(zhong),準確反(fan)應 1 分(fen)鐘。迅速取出比(bi)(bi)色皿(min)(min)并擦干,記(ji)(ji)錄(lu)(lu) 1 分(fen) 20 秒時(shi)的(de)吸光度 A2。計(ji)算 ΔA=A1-A2,記(ji)(ji)錄(lu)(lu) A 測(ce)(ce)定(ding)、A 對照,ΔA1=ΔA 上清(qing)測(ce)(ce)定(ding)-ΔA 上清(qing)對照,ΔA2=ΔA 沉淀測(ce)(ce)定(ding)-ΔA 沉淀對照。 三、NOX 活力單位的計算: A、上清中 NOX 活力的計算(suan): 1、組織中 NOX 活力的(de)計算: (1)按(an)樣本蛋白濃度計算: 單(dan)位(wei)的定義:每 mg 蛋白在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義為(wei)一(yi)個酶活力單(dan)位(wei)。 NOX(U/mg prot)=ΔA1÷0.01×V 反總(zong)÷(Cpr 上清(qing)×V 樣(yang)本)=2500×ΔA1÷Cpr 上清(qing) - 按樣本(ben)鮮重計算:
單位的定義:每(mei)(mei) g 組織在反應體系中每(mei)(mei)分鐘 A600 變化 0.01 定義為一個酶(mei)活(huo)力單位。 NOX(U/g 鮮重)=ΔA1÷0.01×V 反總(zong)÷(W÷V 提取×V 樣本)=2525×ΔA1÷W 2、細菌(jun)或培(pei)養細胞(bao)中 NOX 活(huo)力的計算: (1)按(an)樣本蛋白(bai)濃度計算: 單位的定義:每 mg 蛋白在反應體系中(zhong)每分鐘 A600 變化(hua) 0.01 定義為一個酶活力單位。 NOX(U/mg prot)=ΔA1÷0.01×V 反總(zong)÷(Cpr 上清(qing)×V 樣本)=2500×ΔA1÷Cpr 上清(qing) - 按細菌(jun)或細胞(bao)密(mi)度計算:
單(dan)(dan)位(wei)的定義(yi)(yi):每 1 萬個細菌或細胞在(zai)反(fan)應體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定義(yi)(yi)為一(yi)個酶(mei)活力單(dan)(dan)位(wei)。 NOX(U/104 cell)=ΔA1÷0.01×V 反(fan)總÷(500÷V 提(ti)取×V 樣(yang)(yang)(yang)本(ben)(ben)(ben))=5.05×ΔA1 V 反(fan)總:反(fan)應總體積(ji),1mL;V 樣(yang)(yang)(yang)本(ben)(ben)(ben):加入樣(yang)(yang)(yang)本(ben)(ben)(ben)體積(ji),0.04mL;V 提(ti)取:加入提(ti)取液體積(ji),1.01mL; Cpr 上(shang)清:上(shang)清中蛋(dan)白(bai)濃(nong)度,mg/mL;W,樣(yang)(yang)(yang)本(ben)(ben)(ben)鮮重(zhong),g;500,細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)總數,500 萬。
B、沉淀中 NOX 活力的計(ji)算: 1、組織(zhi)中(zhong) NOX 活力的計算: (1)按樣本蛋白濃度計(ji)算: 單位(wei)的定義(yi):每 mg 蛋(dan)白(bai)在反應體系(xi)中每分鐘(zhong) A600 變化 0.01 定義(yi)為一個酶活力單位(wei)。 NOX(U/mg prot)=ΔA2÷0.01×V 反總÷(Cpr 沉(chen)淀(dian)×V 樣(yang)本)=2500×ΔA2÷Cpr 沉(chen)淀(dian) - 按(an)樣本鮮重計(ji)算:
單位(wei)的定義:每 g 組織(zhi)在反應體系中每分鐘(zhong) A600 變化 0.01 定義為一(yi)個酶活力單位(wei)。 NOX(U/g 鮮重(zhong))=ΔA2÷0.01×V 反(fan)總(zong)÷(W÷V 樣(yang)(yang)總(zong)×V 樣(yang)(yang)本(ben))=505×ΔA2÷W 2、細(xi)菌或培養(yang)細(xi)胞中 NOX 活力的計算: (1)按樣(yang)本(ben)蛋白濃(nong)度計算(suan): 單位的定義:每 mg 蛋白在(zai)反應(ying)體系(xi)中每分(fen)鐘 A600 變化 0.01 定義為(wei)一個酶活力(li)單位。 NOX(U/mg prot)=ΔA2÷0.01×V 反總÷(Cpr 沉淀(dian)×V 樣(yang)本)=2500×ΔA2÷Cpr 沉淀(dian) (2)按細(xi)菌或細(xi)胞(bao)密度計算: 單位的定義(yi):每(mei) 1 萬個(ge)細(xi)菌或細(xi)胞在反(fan)應體系中每(mei)分鐘 A600 變化(hua) 0.01 定義(yi)為一個(ge)酶活(huo)力單位。 NOX(U/104 cell)=ΔA2÷0.01×V 反總(zong)÷(500÷V 樣(yang)(yang)總(zong)×V 樣(yang)(yang)本(ben)(ben))=1.01×ΔA2 V 反總(zong):反應總(zong)體(ti)積,1mL;V 樣(yang)(yang)本(ben)(ben):加(jia)入樣(yang)(yang)本(ben)(ben)體(ti)積,0.04mL;V 樣(yang)(yang)總(zong):沉(chen)淀重(zhong)懸(xuan)體(ti)積,0.202mL; Cpr 沉(chen)淀:沉(chen)淀重(zhong)懸(xuan)后蛋白濃度,mg/mL;W,樣(yang)(yang)本(ben)(ben)鮮重(zhong),g;500,細菌或(huo)細胞總(zong)數,500 萬。
C、樣本 NOX 總活力的計算: 樣本(ben) NOX 總活(huo)(huo)力即為上清中(zhong)(zhong) NOX 活(huo)(huo)力與(yu)沉淀中(zhong)(zhong) NOX 活(huo)(huo)力之(zhi)和。 1、組織中 NOX 活力的計(ji)算: (1)按樣本蛋白濃(nong)度計算(suan): 單(dan)(dan)位(wei)的定義:每 mg 蛋白在反(fan)應體系中(zhong)每分鐘(zhong) A600 變化 0.01 定義為一個酶活力單(dan)(dan)位(wei)。 NOX(U/mg prot)=2500×ΔA1÷Cpr 上清+2500×ΔA2÷Cpr 沉淀 (2)按樣本(ben)鮮重計算: 單位的定(ding)義:每 g 組織在反應體系中每分鐘 A600 變化 0.01 定(ding)義為一個(ge)酶活(huo)力單位。 NOX(U/g 鮮重)=2525×ΔA1÷W +505×ΔA2÷W 2、細(xi)菌或培(pei)養(yang)細(xi)胞中(zhong) NOX 活力的計算(suan): (1)按(an)樣本蛋白(bai)濃度(du)(du)計(ji)算(suan): 單(dan)位(wei)的定(ding)(ding)義:每 mg 蛋白(bai)在反應體系中每分鐘 A600 變化(hua) 0.01 定(ding)(ding)義為(wei)一(yi)個酶活(huo)力(li)單(dan)位(wei)。 NOX(U/mg prot)=2500×ΔA1÷Cpr 上清+2500×ΔA2÷Cpr 沉淀 (2)按(an)細菌(jun)或細胞密(mi)度(du)(du)計(ji)算(suan): 單(dan)位(wei)的定(ding)(ding)義:每 1 萬個細菌(jun)或細胞在反應體系中每分鐘 A600 變化(hua) 0.01 定(ding)(ding)義為(wei)一(yi)個酶活(huo)力(li)單(dan)位(wei)。 NOX(U/104 cell)=5.05×ΔA1+1.01×ΔA2
注意事項 1、粗酶液的(de)提(ti)取必須在 0℃- 4℃中操做完成,以防(fang)止酶變(bian)性失活。 2、比色皿(min)中(zhong)反(fan)應(ying)(ying)液(ye)的(de)溫度保持(chi) 37℃,取小燒(shao)杯(bei)一只裝入一定量(liang)的(de) 37℃蒸餾水(shui),將此燒(shao)杯(bei)放(fang)入 37℃水(shui)浴鍋(guo)中(zhong)。在反(fan)應(ying)(ying)過(guo)程(cheng)中(zhong)把比色皿(min)連同反(fan)應(ying)(ying)液(ye)放(fang)在此燒(shao)杯(bei)中(zhong)。 3、兩(liang)個人(ren)同時做此實驗,一(yi)個人(ren)比色(se),一(yi)個人(ren)計時,以保證實驗結(jie)果(guo)的準確(que)性。 4、實驗時,試劑六樣本在冰上放置,以免變性和失活。
相關文獻: 《Identification and characterization of GmMYB118 responses to drought and salt stress》 作者:Yong-Tao Du, Meng-Jie Zhao, Chang-Tao Wang, Yuan Gao, Yan-Xia Wang, Yong-Wei Liu, Ming Chen, Jun Chen, Yong-Bin Zhou, Zhao-Shi Xu & You-Zhi Ma 期刊:BMC Plant Biology 影響因子:3.67 PMID:30509166 《A combinational optimization method for efficient synthesis of tetramethylpyrazine by the recombinant Escherichia coli》 作者:Youqiang Xu,Chunyan Xu,Xiuting Li,Baoguo Sun,Ahmed Alaa Eldin,Yingmin Jia 期刊:Biochemical Engineering Journal 影響因子:3.371 PMID: 《Antioxidant and antihyperlipidemic activities of purified polysaccharides from Ulva pertusa》 作者:Weida Li,Kai Wang,Nanfang Jiang,Xiaolei Liu,Minghui Wan, Xintao Chang, Dongmei Liu, Huimin Qi,Shunmei Liu 期刊:Journal of Applied Phycology 影響因子:4.784 PMID:29476858 《Sensory plasticity of carotid body is correlated with oxidative stress in paraventricular nucleus during chronic intermittent hypoxia》 作者:Pei Liu Hong‐Mei Zhang Ke Hu Xiu‐Fang Zhou Si Tang 期刊:J Cell Physio 影響因子:4.522 PMID:30609027 NADH氧化酶(NOX)活性檢測試劑盒 |