α-淀粉酶活性檢測試劑盒 產品名稱(cheng): α-淀粉酶(mei)活性(xing)檢(jian)測試劑盒 微(wei)量法(fa)產品英文(wen)名: Micro α-amylase Assay Kit產品貨號:BC0615 產地(di):北京市通(tong)州區馬駒橋聯(lian)東U谷8三樓產品(pin)規格(ge):100管/48樣 產(chan)品(pin)商標:solarbio 保(bao)存(cun)與運輸:4℃保(bao)存(cun)或-20℃保(bao)存(cun); 參(can)考價格:860 庫存狀態:現貨 關鍵(jian)字(zi): α-淀粉(fen)酶(mei)檢測試劑盒|淀粉(fen)酶(mei)檢測試劑盒|α-淀粉(fen)酶(mei)|試劑盒
簡要介(jie)紹: 淀粉酶(mei)(mei)負責水(shui)解淀粉,包括α-淀粉酶(mei)(mei)和β-淀粉酶(mei)(mei)。α-淀粉酶(mei)(mei)(EC 3.2.1.1)可隨機地作用于淀粉中的α-1,4-糖(tang)苷鍵,生(sheng)成葡(pu)萄糖(tang)、麥芽糖(tang)、麥芽三糖(tang)、糊精等還原糖(tang),同時(shi)使淀粉的粘度降低(di),因此又稱為液化酶(mei)(mei)。 還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質。β-淀粉酶不耐(nai)熱,在(zai)70℃鈍化15min,從而測(ce)定α-淀粉酶活性。
產品詳細描述 產品內容: 試劑(ji)一:液體20mL×1瓶,室溫保存(cun)。若有黃(huang)色(se)晶體析出,可適當加(jia)熱溶(rong)解(jie)后再用。 試劑二:粉(fen)劑×1瓶(ping),4℃保存。臨用前加入(ru)10mL蒸(zheng)餾水,置(zhi)于常(chang)溫水中并(bing)加(jia)熱(re)煮沸,期間不(bu)斷攪拌粉劑(ji)溶解。 標準品:粉劑×1支,10mg無水葡(pu)萄糖。 產品說(shuo)明(ming): 淀粉酶(mei)負責水解(jie)淀粉,包括α-淀粉酶(mei)和β-淀粉(fen)酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機地作用于(yu)淀粉中(zhong)的α-1,4-糖苷鍵,生成葡萄(tao)糖、麥(mai)芽糖、麥(mai)芽三糖、糊精等還原糖,同時使淀粉的粘度降低,因此又稱為液化酶。 淀(dian)粉(fen)水(shui)解(jie)酶催化淀(dian)粉(fen)水(shui)解(jie)生成還原(yuan)糖(tang),還原(yuan)糖(tang)還原(yuan)3,5-二(er)硝基水楊酸生(sheng)成棕紅(hong)色物質,在540 nm有吸收峰;通過(guo)測定540 nm吸光度增加速率(lv),計算(suan)淀粉酶(mei)活性(xing)。α-AL耐熱(re),但是β-淀粉酶可在70℃鈍(dun)化15min。因此粗酶液(ye)經過(guo)70℃鈍化(hua)15min,就只有(you)α-AL能夠催化淀粉水(shui)解。 需(xu)自備的儀器和用品(pin): 酶標儀或分光光度(du)計、恒溫水浴(yu)鍋、臺式離(li)心機(ji)、可調(diao)式移(yi)液(ye)器、96孔板/微量(liang)比色(se)皿、研缽和蒸餾水。 操作步驟: 一(yi)、粗酶液提(ti)取: 稱取約0.1g樣本,加0.8mL蒸餾水(shui)勻(yun)漿;勻(yun)漿后在(zai)室(shi)溫下放置提取15min,每隔5min振蕩1次,使其充分提(ti)取(qu);6000g,常(chang)溫(wen)離心10min,吸取(qu)上(shang)清(qing)液(ye)并加蒸餾水定容10 mL,搖勻,即為(wei)淀粉(fen)酶原液。 二、測(ce)定步驟和加樣(yang)表: - 分光光度(du)計(ji)或者(zhe)酶標儀預熱(re)30min以上(shang),調節波長540nm。
- 將葡萄糖(tang)用(yong)蒸(zheng)餾水稀(xi)釋為0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078和(he)0.0039 mg/mL的標準溶液(ye)。
- 按操作表依次(ci)加入(ru)各試(shi)劑(ji):
試(shi)劑(ji)(μL) | 對照管(guan) | 測定管 | 標準管(guan) | 空白管 | α淀粉酶原液 | 75 | 75 | - | - | 蒸餾水 | - | - | - | 75 | 標(biao)準溶液(mg/mL) | - | - | 75 | - | 70℃水浴(yu)15min左(zuo)右,冷卻 | 試(shi)劑一 | 150 | - | - | - | 將以上對照管(guan)(guan)、測(ce)定管(guan)(guan)和試劑二置于40℃恒溫水浴中保溫10min左右 | 試劑二 | 75 | 75 | 75 | 75 | 在40℃恒溫水浴中準確保溫5min | 試(shi)劑一 | - | 150 | 150 | 150 |
混勻,90℃水浴10min,蒸餾水(shui)調(diao)零,540nm處讀(du)取(qu)對照管、測定管、標準管、空白管吸光度,分別(bie)記為A對(dui)照、A測定、A標準和(he)A空白,計(ji)算ΔA測(ce)定=A測定(ding)-A對照(zhao),ΔA標準=A標(biao)準-A空白。 三、α-淀粉酶(mei)活(huo)性計算: - 標準(zhun)曲線的繪制
以ΔA標準(zhun)為y軸,以標準溶液濃度為(wei)x軸,繪(hui)制標準曲(qu)線(xian),得(de)到方程y=kx+b。將 ΔA測定帶入方程(cheng)得到x(mg/mL)。 2、α淀粉酶活(huo)性的計算 (1)按照樣本質量計算 單(dan)位(wei)定(ding)義:每g 組織每(mei)分鐘(zhong)催化(hua)產生(sheng)1mg 還原糖定義(yi)為(wei)1 個(ge)酶活力單位(wei)。 α- 淀粉酶活性(mg/min/g 鮮重(zhong))=x×V 樣÷(W×V 樣÷V 樣(yang)總(zong))÷T=2×x÷W (2)按照蛋(dan)白質含量計算 單位(wei)定義(yi):每(mei)mg 組織蛋白每分鐘催(cui)化(hua)產(chan)生1mg 還(huan)原糖(tang)定義為1 個酶(mei)活性(xing)單位。 α-淀粉(fen)酶活性(mg/min/mg prot)= x×V 樣(yang)÷(V 樣×Cpr)÷T==0.2×x÷Cpr (3)血(xue)清(漿(jiang))樣本中α-淀(dian)粉酶活性計算 單位定義:每(mei)ml血清(漿)每分鐘催(cui)化(hua)產生1mg 還原(yuan)糖定義為1 個酶活性單位(wei)。 α-淀粉(fen)酶活(huo)性(mg/ml)= x÷T=0.2×x V 樣:加入反應體(ti)系(xi)中樣本體(ti)積,0.25 mL;V 樣總(zong):提取液(ye)總(zong)體積,10 mL;Cpr:樣(yang)本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應(ying)時(shi)間(jian),5min。 注意事(shi)項: 當測(ce)定(ding)的吸光值(zhi)大于1時,可以對樣本進行(xing)適當稀釋后測定。
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