產品名稱: α-淀粉酶活性檢測試劑(ji)盒(he)產品英文名(ming): α-amylase Assay Kit產(chan)(chan)品貨(huo)號(hao):BC0610 產(chan)(chan)地:北京市通州區馬駒橋聯(lian)東(dong)U谷8三樓產品規(gui)格:50管/24樣 產品(pin)商標:solarbio 保(bao)(bao)存(cun)與運輸:4℃保(bao)(bao)存(cun)或-20℃保(bao)(bao)存(cun); 參(can)考(kao)價格(ge):450 庫存狀態:現貨 關(guan)鍵字: α-淀粉酶檢測試劑(ji)盒|淀粉(fen)酶檢測試劑盒|α-淀粉酶|試(shi)劑(ji)盒
簡要介(jie)紹: 淀(dian)(dian)(dian)粉(fen)(fen)(fen)酶(mei)(mei)負責水解淀(dian)(dian)(dian)粉(fen)(fen)(fen),包(bao)括(kuo)α-淀(dian)(dian)(dian)粉(fen)(fen)(fen)酶(mei)(mei)和β-淀(dian)(dian)(dian)粉(fen)(fen)(fen)酶(mei)(mei)。α-淀(dian)(dian)(dian)粉(fen)(fen)(fen)酶(mei)(mei)(EC 3.2.1.1)可隨機地(di)作用于淀(dian)(dian)(dian)粉(fen)(fen)(fen)中的(de)α-1,4-糖苷(gan)鍵,生成葡萄糖、麥(mai)芽(ya)糖、麥(mai)芽(ya)三糖、糊(hu)精等還原糖,同時(shi)使淀(dian)(dian)(dian)粉(fen)(fen)(fen)的(de)粘(zhan)度降低,因此又(you)稱為液化酶(mei)(mei)。 還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕(zong)紅色物質。β-淀(dian)粉酶不(bu)耐(nai)熱,在70℃鈍(dun)化15min,從而(er)測定(ding)α-淀(dian)粉酶活性。
產品(pin)詳(xiang)細描述(shu) 產品(pin)內容: 試(shi)劑一:液(ye)體40mL×1瓶,常溫保(bao)存,若有(you)黃色晶體析出,需加(jia)熱溶解(jie)后再(zai)用; 試劑二(er):粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加(jia)入(ru)20mL蒸餾水,置(zhi)于常溫水中并加熱(re)煮沸,期間不(bu)斷攪拌粉劑(ji)溶解; 標準品(pin):粉(fen)劑×1支(zhi),10mg無水葡萄糖。 產品說(shuo)明: 淀粉酶(mei)負(fu)責水(shui)解淀粉,包(bao)括α-淀(dian)粉酶(mei)和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機地作用(yong)于淀粉中的(de)α-1,4-糖(tang)(tang)苷鍵(jian),生成葡萄(tao)糖(tang)(tang)、麥(mai)芽糖(tang)(tang)、麥(mai)芽三糖(tang)(tang)、糊精等還原糖(tang)(tang),同時使淀粉的(de)粘度降低,因此(ci)又稱為液化酶。 淀(dian)粉水(shui)解酶催化淀(dian)粉水(shui)解生成還(huan)(huan)原糖,還(huan)(huan)原糖還(huan)(huan)原3,5-二(er)硝基水楊(yang)酸生(sheng)成棕紅色(se)物質,在540 nm有吸收峰(feng);通(tong)過測定540 nm吸光(guang)度(du)增加(jia)速率,計算(suan)淀粉酶活性。α-AL耐熱,但是β-淀粉酶可在70℃鈍化(hua)15min。因此粗酶液經過70℃鈍化15min,就只有α-AL能夠(gou)催化淀(dian)粉水解。 需(xu)自(zi)備的儀器和用品: 可見(jian)分(fen)光光度計(ji)、恒溫水浴鍋、臺式(shi)離心機、可調式(shi)移液器、玻璃(li)比色皿、研(yan)缽和蒸餾水。 操(cao)作步驟: 一、粗酶液提取: 稱取約0.1g樣本,加0.8mL蒸餾水勻漿;勻漿后在(zai)室溫下放置提(ti)取15min,每(mei)隔5min振蕩1次(ci),使其(qi)充分提取;6000g,常溫離心10min,吸取上清液并加蒸餾水(shui)定(ding)容10 mL,搖勻,即為淀(dian)粉酶原液(ye)。 二、測定步驟和加(jia)樣表: - 分光(guang)光(guang)度計或者(zhe)酶標(biao)儀預熱30min以上,調節(jie)波長540nm。
- 將葡(pu)萄糖用(yong)蒸餾水稀(xi)釋為0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078和0.0039 mg/mL的標準溶液。
- 按操作表依次加入(ru)各試劑:
試劑(μL) | 對(dui)照(zhao)管 | 測定管 | 標準管 | 空(kong)白管 | α淀粉酶(mei)原液 | 250 | 250 | - | - | 蒸餾水 | - | - | - | 250 | 標(biao)準(zhun)溶液(ye)(mg/mL) | - | - | 250 | - | 70℃水(shui)浴15min左右,冷卻 | 試劑一 | 500 | - | - | - | 將以上對照管、測定管和試劑二(er)置于40℃恒(heng)溫水浴中(zhong)保溫10min左右 | 試(shi)劑二 | 250 | 250 | 250 | 250 | 在(zai)40℃恒(heng)溫(wen)水浴中準確保溫(wen)5min | 試(shi)劑(ji)一 | - | 500 | 500 | 500 |
混勻(yun),90℃水浴10min,蒸餾(liu)水調零,540nm處讀取對照管、測定管、標(biao)準管、空白(bai)管吸光度(du),分別記為A對照、A測(ce)定、A標(biao)準(zhun)和A空(kong)白,計算ΔA測定=A測(ce)定-A對照,ΔA標準=A標(biao)準-A空白(bai)。 三、α-淀粉(fen)酶活性計(ji)算: - 標準曲線的繪制
以ΔA標準為y軸,以標準溶液濃度(du)為(wei)x軸(zhou),繪制標準(zhun)曲線,得到方程y=kx+b。將 ΔA測定帶(dai)入(ru)方程(cheng)得到(dao)x(mg/mL)。 2、α淀(dian)粉(fen)酶活(huo)性的(de)計算 (1)按照樣本質(zhi)量(liang)計算 單位定義:每g 組織每(mei)分鐘催化產生(sheng)1mg 還原糖定義為1 個酶(mei)活力單位。 α- 淀粉酶活性(mg/min/g 鮮重)=x×V 樣÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=2×x÷W (2)按(an)照蛋(dan)白(bai)質含量計算(suan) 單位定義:每mg 組織蛋白(bai)每分鐘催(cui)化產(chan)生1mg 還原糖(tang)定義為1 個酶活性單位。 α-淀粉酶(mei)活性(mg/min/mg prot)= x×V 樣÷(V 樣(yang)×Cpr)÷T==0.2×x÷Cpr (3)血清(漿)樣(yang)本中α-淀(dian)粉酶活性(xing)計算 單位定(ding)義:每ml血(xue)清(漿(jiang))每分鐘催化產生1mg 還原糖定義為1 個酶活性單位(wei)。 α-淀粉酶活性(mg/ml)= x÷T=0.2×x V 樣(yang):加入反應體系中樣(yang)本體積,0.25 mL;V 樣總(zong):提取液總(zong)體積(ji),10 mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反(fan)應(ying)時間,5min。 注意事項: 當測定的吸(xi)光值大于1時,可以對樣本進行適當稀釋(shi)后測(ce)定(ding)。
相(xiang)關文獻: 《Effects of extraction methods on the physicochemical characteristics and biological activities of polysaccharides from okra (Abelmoschus esculentus)》 作者:QinYuan1ShangLin1YuanFuXi-RuiNieWenLiuYanSuQiao-HongHanLiZhaoQingZhangDe-RongLinWenQinDing-TaoWu 期刊:International Journal of Biological Macromolecules 影響因子:3.909 PMID:30639655 α-淀粉酶活性檢測試劑盒 |