產(chan)品名稱(cheng):谷胱甘肽S-轉移酶(GST)活性檢測試劑盒 微量法產品英文名:Micro Glutathione S-transferase (GST)Assay Kit產品貨號:BC0355 產地:北京市通州區(qu)馬駒橋聯東U谷8三樓(lou)產品規格:100管(guan)/96樣 產品(pin)商標(biao):solarbio 保存與運(yun)輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價格:650 庫存狀態:現貨 關鍵字:谷胱(guang)甘(gan)肽S-轉移酶(mei)| GST活性檢測|試(shi)劑盒|微(wei)量法 |
簡(jian)要介紹(shao): GST是(shi)一種(zhong)具(ju)有多種(zhong)生理功(gong)能的(de)蛋白質(zhi)(zhi)家族,主要存在(zai)于細胞(bao)質(zhi)(zhi)內(nei)。GST是(shi)體內(nei)解(jie)毒酶(mei)系統的(de)重要組成部分,主要催化(hua)各(ge)種(zhong)化(hua)學物(wu)質(zhi)(zhi)及其(qi)代(dai)謝產物(wu)與GSH的(de)巰基共價結合,使親(qin)(qin)電(dian)化(hua)合物(wu)變為(wei)(wei)親(qin)(qin)水物(wu)質(zhi)(zhi),易(yi)于從膽汁或尿液中排(pai)泄(xie),達到將體內(nei)各(ge)種(zhong)潛在(zai)或具(ju)備毒性(xing)的(de)物(wu)質(zhi)(zhi)降解(jie)并排(pai)出體外(wai)的(de)目的(de)。因此(ci),GST在(zai)保護細胞(bao)免(mian)受(shou)親(qin)(qin)電(dian)子(zi)化(hua)合物(wu)的(de)損(sun)傷中發揮著重要的(de)生物(wu)學功(gong)能。此(ci)外(wai),因為(wei)(wei)GST具(ju)有GSH-Px活(huo)性(xing),亦稱為(wei)(wei)non-Se GSH-Px,具(ju)有修復氧化(hua)破壞的(de)大分子(zi)如DNA、蛋白質(zhi)(zhi)等的(de)功(gong)能。注意,GST催化(hua)的(de)反應減少(shao)GSH含(han)量,但是(shi)不增加(jia)GSSG含(han)量。 產(chan)品詳細描述 商品貨號(hao): | 商品(pin)(pin)品(pin)(pin)牌: | 規(gui)格(ge) | 基(ji)本(ben)售價: | 選擇規格 | BC0355- 100管/96樣 | Solarbio | 100管/96樣 | 650.00元 | |
產(chan)品(pin)內(nei)容(rong): 試劑(ji)一:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。 試劑(ji)二(er):液體 22mL×1 瓶,4℃保存。 試劑三(san):粉(fen)劑×1 瓶(ping),4℃保存。臨用(yong)前(qian)加 2 mL 蒸餾水溶解。
產品說明: GST 是(shi)一種(zhong)(zhong)具有多種(zhong)(zhong)生理(li)功(gong)能的(de)(de)蛋白質家族,主(zhu)(zhu)要(yao)存在(zai)于(yu)細胞質內(nei)。GST 是(shi)體內(nei)解毒酶系(xi)統的(de)(de) 重要(yao)組成部分,主(zhu)(zhu)要(yao)催(cui)(cui)化(hua)(hua)(hua)各(ge)種(zhong)(zhong)化(hua)(hua)(hua)學物(wu)(wu)質及其(qi)代謝產物(wu)(wu)與 GSH 的(de)(de)巰基共價結(jie)合,使親(qin)電化(hua)(hua)(hua)合物(wu)(wu)變為 親(qin)水物(wu)(wu)質,易于(yu)從膽汁或(huo)尿液中(zhong)排泄,達到將體內(nei)各(ge)種(zhong)(zhong)潛在(zai)或(huo)具備毒性(xing)的(de)(de)物(wu)(wu)質降解并(bing)排出體外(wai)的(de)(de)目 的(de)(de)。因此(ci),GST 在(zai)保護(hu)細胞免受親(qin)電子(zi)化(hua)(hua)(hua)合物(wu)(wu)的(de)(de)損傷中(zhong)發揮(hui)著(zhu)重要(yao)的(de)(de)生物(wu)(wu)學功(gong)能。此(ci)外(wai),因為 GST 具有 GSH-Px 活性(xing),亦稱為 non-Se GSH-Px,具有修復氧(yang)化(hua)(hua)(hua)破壞的(de)(de)大分子(zi)如 DNA、蛋白質等(deng)的(de)(de)功(gong)能。 注意(yi),GST 催(cui)(cui)化(hua)(hua)(hua)的(de)(de)反應(ying)減少 GSH 含量(liang),但是(shi)不(bu)增(zeng)加 GSSG 含量(liang)。 GST 催(cui)(cui)化(hua)(hua)(hua) GSH 與 CDNB 結(jie)合,其(qi)結(jie)合產物(wu)(wu)的(de)(de)光吸(xi)收峰波(bo)長(chang)為 340nm;通過測(ce)定 340nm 波(bo)長(chang)處(chu) 吸(xi)光度上升速率,即可(ke)計(ji)算出 GST 活性(xing)。 自(zi)備儀器和用品: 低溫離心機、水(shui)浴(yu)鍋(guo)、可調節移液器、紫外-可見分(fen)光光度計/酶標(biao)儀、微(wei)量(liang)石英比(bi)色皿/96 孔(kong) UV 板和蒸餾水(shui)。 操作步(bu)驟(zou): 一、粗酶液提取: 1. 組織:按照組織質(zhi)量(g):試劑(ji)一(yi)體(ti)積(mL)為 1:5~10 的(de)比例(li)(建議稱取(qu)約(yue) 0.1g 組織,加(jia)入 1mL 試劑(ji)一(yi))進行冰(bing)浴(yu)勻漿。8000g,4℃離心 10min,取(qu)上(shang)清置冰(bing)上(shang)待測(ce)。 2. 細(xi)(xi)菌、真菌:按照細(xi)(xi)胞數量(liang)(10 4個):試劑一(yi)體積(mL)為 500~1000:1 的比例(li)(建議 500 萬 細(xi)(xi)胞加入 1mL 試劑一(yi)),冰(bing)(bing)浴(yu)超(chao)聲(sheng)(sheng)波破碎(sui)細(xi)(xi)胞(功率 300w,超(chao)聲(sheng)(sheng) 3 秒,間(jian)隔 7 秒,總時間(jian) 3min); 然后 8000g,4℃,離心 10min,取上清(qing)置于冰(bing)(bing)上待測。 3. 血清(qing)等(deng)液體:直接(jie)測定。 二、測定: 1. 分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計/酶標儀預熱(re) 30 min 以上,調節波長(chang)到 340 nm,用(yong)蒸餾水(shui)調零。 2. 試劑二放(fang)在(zai) 25℃(一般物種(zhong))或(huo)者 37℃(哺乳動物)保溫。 3. 空(kong)白(bai)管:取(qu)微(wei)(wei)量石英(ying)(ying)比(bi)色(se)皿,加入(ru) 20μL 試(shi)劑一(yi),180μL 試(shi)劑二(er)和 20μL 試(shi)劑三(san),迅(xun)(xun)速(su)混勻(yun)后(hou)于 340nm 測(ce)定(ding)(ding) 10 s 吸(xi)光度(du)記 A1,37℃水(shui)浴 5min 后(hou),快速(su)取(qu)出(chu)測(ce)定(ding)(ding)吸(xi)光度(du)記 A2。 4. 測(ce)定(ding)(ding)管:取(qu)微(wei)(wei)量石英(ying)(ying)比(bi)色(se)皿,加入(ru) 20μL 上(shang)清液,180μL 試(shi)劑二(er)和 20μL 試(shi)劑三(san),迅(xun)(xun)速(su)混勻(yun)后(hou)于 340nm 測(ce)定(ding)(ding) 10 s 吸(xi)光度(du)記 A3,37℃水(shui)浴 5min 后(hou),快速(su)取(qu)出(chu)測(ce)定(ding)(ding)吸(xi)光度(du)記 A4。 三、GST 活性計算: a.使用微(wei)量石英比色皿測(ce)定(ding)的計算公(gong)式如下 (1)按蛋(dan)白濃度(du)計算 活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每毫克(ke)蛋白每分鐘催(cui)化 1μmol CDNB 與 GSH 結合為一個酶活 性單位。 GST(U/mg prot)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反(fan)總÷(Cpr×V 樣)÷T =0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷Cpr (2)按(an)樣本鮮重計算 活性單位定義:在 25℃或者(zhe) 37℃中(zhong),每(mei)(mei)克樣品每(mei)(mei)分(fen)鐘(zhong)催(cui)化 1μmol CDNB 與 GSH 結合為(wei)一個酶活性 單位。 GST(U/g 鮮(xian)重(zhong))=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反(fan)總÷(V 樣(yang)÷V 樣(yang)總×W)÷T =0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W (3)按細胞數量計(ji)算 活性單位定(ding)義:在 25℃或者 37℃中,每 10 4個(ge)(ge)細(xi)胞每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結合為一(yi)個(ge)(ge)酶 活單位。 GST(U/10 4 cell)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反(fan)總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T =0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷500 (4)按(an)液(ye)體體積計算 活性單位定(ding)義:在(zai) 25℃或(huo)者(zhe) 37℃中(zhong),每毫升(sheng)液(ye)體每分鐘催(cui)化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jie)合為一個(ge)酶活 單位。 GST(U/mL)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總(zong)(zong)÷V 樣(yang)(yang)÷T =0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ε:產(chan)物摩(mo)爾消光系數,9.6×10 3 L/mol /cm;d:比色皿(min)光徑,1cm;10 6:1mol=1×10 6μmol;V 反總(zong)(zong):反應體系總(zong)(zong)體積(ji),220μL=2.2×10 -4 L;Cpr:上清液(ye)蛋白質(zhi)濃度(mg/mL),需(xu)要另外測定(ding),建 議選用本公(gong)司生產(chan)的 BCA 蛋白質(zhi)濃度測定(ding)試劑(ji)盒;W :樣(yang)(yang)品質(zhi)量,g;V 樣(yang)(yang):加入反應體系中上清 液(ye)體積(ji),20μL=0.02 mL;V 樣(yang)(yang)總(zong)(zong):試劑(ji)一(yi)體積(ji),1 mL;T:反應時間(min),5min;500:細(xi)胞數量, 500 萬。
b.使用 96 孔板測(ce)定的計算公式如下 (1)按蛋(dan)白濃度計算 活性(xing)單位定義:在 25℃或(huo)者 37℃中,每毫克蛋白(bai)每分鐘催(cui)化 1μmol CDNB 與 GSH 結合為一個(ge)酶活 性(xing)單位。 GST(U/mg prot)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反(fan)總÷(Cpr×V 樣)÷T =0.38×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷Cpr (2)按樣本鮮重計算 活(huo)性單(dan)(dan)位定義:在 25℃或者 37℃中,每(mei)(mei)克樣品每(mei)(mei)分鐘催化(hua) 1μmol CDNB 與 GSH 結合為一個酶活(huo)性 單(dan)(dan)位。 GST(U/g 鮮(xian)重)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T =0.38×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W (3)按細胞數量計算 活(huo)性單位(wei)定義(yi):在 25℃或者 37℃中(zhong),每 10 4個(ge)細胞每分(fen)鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結合為一 個(ge)酶活(huo)單位(wei)。 GST(U/10 4 cell)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反(fan)總÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T =0.38×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷500 (4)按液體體積計算 活性單位(wei)定義(yi):在 25℃或者 37℃中,每(mei)毫(hao)升液體(ti)每(mei)分鐘催化 1μmol CDNB 與(yu) GSH 結合為(wei)一個 酶活單位(wei)。 GST(U/mL)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總(zong)÷V 樣÷T =0.38×[(A4-A3)-(A2-A1)] ε:產物(wu)摩爾消光(guang)系數,9.6×10 3 L/mol /cm;d:96 孔板(ban)光(guang)徑,0.6cm;10 6:1mol=1×10 6μmol; V 反(fan)總:反(fan)應(ying)體系(xi)總體積,220μL=2.2×10 -4 L;Cpr:上清液(ye)蛋(dan)白質(zhi)濃(nong)度(mg/mL),需(xu)要另(ling)外(wai)測(ce)定(ding),建 議選用本公司生(sheng)產的 BCA 蛋(dan)白質(zhi)濃(nong)度測(ce)定(ding)試(shi)劑盒;W :樣(yang)品質(zhi)量;V 樣(yang):加入反(fan)應(ying)體系(xi)中上清液(ye) 體積,20μL=0.02 mL;V 樣(yang)總:試(shi)劑一體積,1 mL;T:反(fan)應(ying)時間(jian)(min),5min;500:細胞數量, 500 萬(wan)。 注意事(shi)項: 1. 樣(yang)品處理等(deng)過程均需要在(zai)冰上進(jin)行,且須在(zai)當日測(ce)定酶活力; 2. 細(xi)胞中 GST 活性測定時,細(xi)胞數目須(xu)在 300 萬-500 萬之(zhi)間(jian),細(xi)胞中 GST 的提(ti)取時可加試劑一后(hou) 研磨或超聲波處理(li),不(bu)能用細(xi)胞裂解液處理(li)細(xi)胞; 3. 測定(ding)前先(xian)用 1~2 個樣(yang)做預實驗,如 5min 內反應不成線性(xing),須對樣(yang)品用蒸餾水稀釋(shi),計算結果乘 以稀釋(shi)倍數; 4. 若樣品(pin)測定(ding)吸光度大(da)于 1,建議(yi)對樣品(pin)用(yong)蒸餾水稀(xi)釋,計算(suan)時結果乘以稀(xi)釋倍數(shu); 5. 測定反映的溫度對測定結果有影響,請控制在 25℃或者 37℃(哺乳動物)。
相關文獻: 《Chronic toxicity and biochemical response of Apis cerana cerana (Hymenoptera: Apidae) exposed to acetamiprid and propiconazole alone or combined》 作者:Wensu Han,Yemeng Yang,Jinglin Gao,Dongxiang Zhao,Chengcai Ren,Shijie Wang,Shan ZhaoYihai Zhong 期刊:Ecotoxicology 影響因子:2.46 PMID:30874992 《Systemic response of the stony coral Pocillopora damicornis against acute cadmium stress》 作者:Zhi Zhou,Xiaopeng Yua,Jia Tang,Yibo Wu,Lingui Wang,Bo Huang 期刊:Aquatic Toxicology 影響因子:3.794 PMID:29179148 《Transcriptome Sequence Analysis Elaborates a Complex Defensive Mechanism of Grapevine (Vitis vinifera L.) in Response to Salt Stress》 作者:Le Guan , Muhammad Salman Haider , Nadeem Khan , Maazullah Nasim , Songtao Jiu , Muhammad Fiaz , Xudong Zhu , Kekun Zhang and Jinggui Fang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30545146 《2′,4′-Dihydroxy-6′-methoxy-3′,5′-dimethylchalcone, a potent Nrf2/ARE pathway inhibitor, reverses drug resistance by decreasing glutathione synthesis and drug efflux in BEL-7402/5-FU cells》 作者:Xing Wei,Xuejun Mo,Faliang An,Xiang Ji,Yanhua Lu 期刊:Food and Chemical Toxicology 影響因子:3.775 PMID:29626576 《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638 《Cadmium detoxification induced by salt stress improves cadmium tolerance of multi-stress-tolerant Pichia kudriavzevii》 作者:Chunsheng Li,Xianqing Yang,Ying Xu,Laihao Li,Yueqi Wang 期刊:Environmental Pollution 影響因子:5.714 PMID:30036838 《Effects of Phytase Transgenic Maize on the Physiological and Biochemical Responses and the Gut Microflora Functional Diversity of Ostrinia furnacalis》 作者:Xiao Hui Xu, Yinghui Guo, Hongwei Sun, Fan Li, Shuke Yang, Rui Gao & Xingbo Lu 期刊:Scientific Reports 影響因子:4.011 PMID:29535326 谷胱甘肽S-轉移酶(GST)活性檢測試劑盒 微量
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