ATP含量檢測試劑盒 微量法 ATP 含量檢測試劑(ji)盒說明書 微量(liang)法(fa)
產地:北京(jing)市通州區(qu)馬(ma)駒(ju)橋聯(lian)東U谷8三樓 英文名稱:ATP content detection kit 產品商標:solarbio 注意:正式測定前務必取2-3 個預(yu)期差異較大的樣本做預(yu)測定。 貨號:BC0305 規格(ge):100T/96S 保存與(yu)運輸:4℃保(bao)存或-20℃保(bao)存; 參考價格:1560 庫存狀態:現(xian)貨 關鍵詞:ATP含量檢測|ATP含量|ATP|
產品內容: 提(ti)取液(ye):液(ye)體100mL×1 瓶,4℃保存; 試劑一:液體20mL×1 瓶,4℃保(bao)存; 試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存(cun)。臨用前加(jia)(jia)入3.5mL 蒸餾水充分溶解,可加(jia)(jia)熱促(cu)進溶解; 試劑三:液體4mL×1 瓶,4℃保存; 試劑(ji)四(si):粉(fen)劑(ji)×1 支,-20℃保(bao)存(cun)(cun)。臨用前每支加入0.4mL 蒸餾(liu)水溶解(jie),可分裝后-20℃保(bao)存(cun)(cun),避(bi)免反復凍(dong)融(rong); 試劑五:粉劑×1 瓶,4℃保存(cun)。臨用前加(jia)入1mL 蒸餾水; 試劑六:粉劑×1 支,-20℃保存。臨(lin)用前加入0.5mL 蒸(zheng)餾水備(bei)用,可分(fen)裝后-20℃保存,避免反復(fu)凍(dong)融; 標準(zhun)品:粉劑×1 支,-20℃保(bao)存。5mg ATP,臨(lin)用前(qian)加入(ru)0.826mL 蒸餾水配(pei)成10μmol/mL 的(de)ATP標準溶液。
產品說明(ming): ATP 廣(guang)泛存在(zai)于動物、植物、微(wei)生(sheng)物和培(pei)養細(xi)(xi)胞中,是生(sheng)物能(neng)量通貨,能(neng)荷(he)(he)是描(miao)述(shu)細(xi)(xi)胞能(neng)量代謝(xie)(xie)狀態的(de)主(zhu)要參(can)數。測定(ding)ATP 含量并(bing)且(qie)計算能(neng)荷(he)(he),能(neng)夠反映能(neng)量代謝(xie)(xie)狀態。 HK 催(cui)化葡萄(tao)糖和ATP 合(he)成6-磷(lin)酸(suan)(suan)(suan)葡萄(tao)糖,6-磷(lin)酸(suan)(suan)(suan)葡萄(tao)糖脫(tuo)氫酶進一步催(cui)化6-磷(lin)酸(suan)(suan)(suan)葡萄(tao)糖脫(tuo)氫生成NADPH,NADPH 在340nm 有特征(zheng)吸收峰,NADPH 和ATP 含量成正比,以此反應ATP 含量。
自備儀(yi)器和用品: 紫外分光(guang)(guang)光(guang)(guang)度(du)計/酶標儀、水浴鍋、可調式(shi)移(yi)液槍、微量石英比色皿/ 96 孔UV 板、研缽/勻漿(jiang)器、蒸餾水和lv仿。
操(cao)作步(bu)驟: 一、ATP 的提取: 1、血清(qing)(漿(jiang))中ATP 的(de)提(ti)取(qu):按照血清(qing)(漿(jiang))體積(mL):提(ti)取(qu)液體積(mL)為1:5~10 的(de)比例(li)(建議取(qu)約0.1mL 血清(qing)(漿(jiang)),加(jia)入1mL 提(ti)取(qu)液),充分震蕩,10000g,4℃離心10min;取(qu)上清(qing)液另一EP 管(guan)中,加(jia)入500μL 的(de)lv仿充分(fen)震蕩(dang)混勻,10000g 4℃離心3min,取(qu)上(shang)清,置冰上(shang)待測(不(bu)可用于蛋白(bai)質含量測定)。
2、組織(zhi)中ATP 的提(ti)取(qu):按照組織(zhi)質量(g):提(ti)取(qu)液體積(ji)(mL)為1:5~10 的比例(建議稱(cheng)取(qu)約0.1g組織(zhi),加入1mL 提(ti)取(qu)液),進(jin)行冰浴(yu)勻漿(jiang),8000g 4℃離心10min,取(qu)上清另(ling)一EP 管中,加入500μL 的lv仿(fang)充分震(zhen)蕩混勻,10000g 4℃離心3min,取上清,置冰上待(dai)測(ce)(ce)(不可(ke)用于蛋白質(zhi)含量(liang)測(ce)(ce)定)。 3、細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)或細(xi)(xi)(xi)(xi)菌中ATP 的提取:先收集細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)或細(xi)(xi)(xi)(xi)菌到離(li)心管內,棄上清,按照細(xi)(xi)(xi)(xi)菌或細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)數量(104個):提取液(ye)(ye)體積(ji)(mL)為(wei)500~1000:1 的比(bi)例(建議(yi)500 萬(wan)細(xi)(xi)(xi)(xi)菌或細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)加入1mL 提取液(ye)(ye)),超聲(sheng)波破(po)碎1min(冰浴,強度20%或200W,超聲(sheng)2s,停1s),10000g 4 ℃離(li)心10min;取上清液(ye)(ye)另(ling)一EP 管中,加入500μL 的lv仿充分震(zhen)蕩(dang)混勻,10000g 4℃離(li)心3min,取上清(qing),置(zhi)冰上待測(不可用(yong)于蛋白質含量測定)。
二、測定步驟: 1、紫外分光光度計(ji)/酶(mei)標儀預熱30 min 以上,調節波長到340nm,蒸餾(liu)水調零(ling)。 2、將10μmol/mL 的ATP 標準(zhun)溶液用蒸餾(liu)水稀釋16 倍(bei)即(ji)0.625 μmol/mL 標準(zhun)溶液備(bei)用。 3、工作液(ye)的配(pei)制(zhi):臨用(yong)前(qian)請(qing)按試劑二(mL):試劑三(mL):試劑四(mL):試劑五(wu)(mL):試劑六(mL)=1:1:0.1:0.4:0.1 的比(bi)例配(pei)制(zhi),現配(pei)現用(yong)。 4、加樣表(biao) 在微量石(shi)英比色皿或(huo)96 孔(kong)UV 板中加入: 試劑名稱(μL) 測定管(guan) 標準管 樣本(ben) 20 標(biao)準液(ye) 20 試劑一 128 128 工作液(ye) 52 52
充分(fen)混合后,立即測定(ding)340nm 下10s 的(de)吸光值A1,然(ran)后將比色(se)皿(min)連同反應液一起(qi)放(fang)入37℃(哺(bu)乳(ru)動物(wu))或25℃(其(qi)他物(wu)種)水浴(yu)中反應3min,拿(na)出擦拭干凈(jing)立即測(ce)定其(qi)在3min10s 時的(de)吸光值A2。用96 孔板則放(fang)入37℃(哺(bu)乳(ru)動物(wu))或25℃(其(qi)他物(wu)種)培養箱中(酶標儀若自帶控溫(wen)功能,則將溫(wen)度調(diao)37℃或25℃)。分別(bie)計(ji)算ΔA 測(ce)定=A2 測(ce)定管-A1 測(ce)定管,ΔA 標準=A2標(biao)準管-A1 標準(zhun)管
三、ATP 含量(liang)計算: 1、血清(漿(jiang))中ATP 含量計(ji)算 ATP 含量(μmol/mL) =ΔA 測定÷(ΔA 標(biao)準(zhun)÷C 標(biao)準(zhun))×(V 提(ti)取+V 血清(漿(jiang)))÷V 血清(漿(jiang))=6.875×ΔA 測定÷ΔA 標(biao)準(zhun) 2、組織、細(xi)菌或細(xi)胞(bao)中ATP 含量計算 (1) 按樣本(ben)鮮重計(ji)算 ATP 含量(μmol/g 鮮重)= ΔA 測定÷(ΔA 標(biao)(biao)準(zhun)÷C 標(biao)(biao)準(zhun))×V 提取÷W=0.625×ΔA 測定÷ΔA 標(biao)(biao)準(zhun)÷W (2) 按細菌或細胞密度計算 ATP 含量(μmol/106 cell)=ΔA 測定÷(ΔA 標準(zhun)÷C 標準(zhun))×V 提取÷5=0.125×ΔA 測定÷ΔA 標準(zhun)
C 標準管:標準液濃度,0.625μmol/mL; V 提取(qu):加入的(de)提取(qu)液體積,1mL; V 血(xue)(xue)清(血(xue)(xue)漿):血(xue)(xue)清(漿)體積(ji),0.1mL; W:樣本質量,g; 5:細胞或細菌(jun)總數,5×106 個。
注意事項 1、加入提(ti)取(qu)液離心后(hou)的上清若為(wei)渾濁為(wei)正常現象(xiang)。 2、提取(qu)過程嚴格在冰浴條件下進行。 3、用微量石英比色皿測(ce)量的(de)(de)吸(xi)光值大(da)(da)于1.4 或者ΔA 測(ce)定(ding)(ding)大(da)(da)于1.2 時(shi)(石英96 孔板的(de)(de)吸(xi)光值大(da)(da)于1.4 或者ΔA 測(ce)定(ding)(ding)大(da)(da)于1.2 時(shi)),可(ke)以將樣品稀(xi)釋后進行測(ce)定(ding)(ding)。若(ruo)吸(xi)光值小于0.01,則可(ke)以增加反應時(shi)間(5min 或10min)來測(ce)定(ding)(ding),標(biao)準品需要增加同樣的(de)(de)反應時(shi)間。 ?ATP含量檢測試劑盒 微量法 |