羥脯氨酸(HYP)含量檢測試劑盒 產品(pin)名稱: 羥脯氨酸(HYP)含量檢測試劑盒產品英文(wen)名: Hydroxyproline(HYP) Content Assay Kit產品貨號(hao):BC0250 產地:北京市通州(zhou)區馬駒橋聯東U谷8三樓產品規格:50管/48樣 產品商標:solarbio 保存與運輸:4℃保存或-20℃保存; 參考(kao)價格:420 庫存狀態(tai):現貨 關鍵(jian)字: :羥脯氨酸檢(jian)測試劑盒|HYP檢測試劑盒|羥脯氨酸|試劑盒
簡要介紹: HYP是機體膠(jiao)(jiao)原蛋(dan)白主要(yao)成分之一,膠(jiao)(jiao)原蛋(dan)白大(da)多分布于皮膚、腱(jian)、軟骨(gu)和(he)血管等,因此HYP含(han)量是反映(ying)膠(jiao)(jiao)原組(zu)織代謝及纖維化程(cheng)度的一項重(zhong)要(yao)指(zhi)標。 樣品(pin)(pin)經(jing)水解產生游(you)離的HYP,進一補被氯胺T氧化,氧化產物(wu)與對二甲(jia)氨基ben甲(jia)醛(quan)反應,產生紅(hong)色化合(he)物(wu),在560nm處有特征吸(xi)收峰。通過測定樣品(pin)(pin)水解液560nm吸(xi)光值,可計算HYP含量。
產品詳細描述 產品內(nei)容(rong): 提(ti)取液:6mol/L鹽(yan)酸,自備。濃鹽(yan)酸:H2O(V/V)= 1:1,室溫保(bao)存(cun)。 試劑一(yi):液體15mL×1瓶(ping),4℃避光保存。 試劑二:液體15mL×1瓶,4℃避光保(bao)存。 標準品:液體(ti)1mL×1支(zhi),0.5mg/mL 羥脯(fu)氨酸標準品,4℃保存(cun)。 產(chan)品說明: HYP是機體(ti)膠(jiao)原(yuan)(yuan)蛋白(bai)主要成分之一(yi),膠(jiao)原(yuan)(yuan)蛋白(bai)大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管(guan)等,因此(ci)HYP含(han)量(liang)是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標(biao)。 樣品(pin)經(jing)酸水解(jie)產生(sheng)游(you)離的HYP,進一(yi)步被氯(lv)胺T氧化(hua)(hua),氧化(hua)(hua)產物與對二甲(jia)氨基ben甲(jia)醛反應,產生紅色化(hua)(hua)合物,在560nm處有特征吸收峰。通過測定樣品(pin)水解液560nm吸光值,可(ke)計算HYP含量。 試驗中所(suo)需的儀器(qi)和試劑: 天平、烘箱、玻璃管、離心機(ji)、水浴(yu)鍋(guo)、可(ke)見分光光度計、1 mL玻(bo)璃比色皿、6mol/L鹽(yan)酸和蒸餾水。 操作步驟(zou): 一(yi)、羥脯(fu)氨酸提取 1. 組織:稱取約(yue)0.5g樣品于(yu)玻(bo)璃管,將組(zu)織盡(jin)量剪(jian)碎以便消(xiao)化,蓋(gai)子稍松(song)不密閉。加入5mL的提取液,煮沸(fei)或110℃烘(hong)箱26小時(shi)消化沒有(you)可見(jian)大的團塊,16000rpm,25℃,離心20min(若離(li)心后仍有雜質,可通過過濾(lv)去(qu)除),用10mol/LNaOH(約3mL)調節pH值6~8范圍內。蒸餾水定容8mL,取上(shang)清待測。(過程(cheng)中可(ke)(ke)能(neng)有黑色物(wu)質生成,若長時間不能(neng)消化,可(ke)(ke)能(neng)為碳化的物(wu)質) 2. 細胞:取500萬個細(xi)胞,加入1mL的提取液,煮沸或110℃烘箱(xiang)26小時(shi)消化透(tou)明狀,16000rpm,25℃,離(li)心20min,用10mol/LNaOH(約0.5mL)調節pH值6~8范(fan)圍內。蒸餾水(shui)定容2mL,取上清待測。 二、測定操作: - 將(jiang)標準品稀釋為15、7.5、3.75、1.875、0.938、0.469、0.234、0.117ug/mL的標準溶液。
- 按下(xia)表(biao)進行操作(zuo):
| 對照(zhao)管 | 測定管 | 標準管(guan) | 樣本(μL) | | 200 | | 標準溶液(μL) | | | 200 | 試劑一(μL) | 200 | 200 | 200 | 混勻(yun),室溫靜(jing)置20min | 試劑(ji)二(μL) | 200 | 200 | 200 | H2O(μL) | 600 | 400 | 400 | 混勻,60℃,20min,取出后室溫靜置15 min,用(yong)1mL比色(se)皿(min),在560nm下分別測定對照管(guan),測定管,標準(zhun)管的OD值,并記為A對照管,A測定管,A標準管。 |
三、羥脯氨酸含量計算(suan)公式
- 標準曲線(xian)的繪制(zhi):
以標(biao)準溶(rong)液的濃度為x軸,?A標準(?A =A標(biao)準管-A對照管(guan))為y軸,繪制標準曲線,得(de)到方程y=kx+b。將?A測定(?A =A測定管(guan)-A對照(zhao)管)帶入方程得到x。 - 羥(qian)脯氨酸含量的測定(ding):
(1)按(an)樣本鮮重(zhong)計算: 組織羥脯氨酸含量(liang)(µg/g 鮮重)= x×V樣(yang)品÷(W×V樣品÷V組提)=8x÷W。 (2)按樣(yang)本(ben)蛋白(bai)濃度計算: 組(zu)織羥脯氨酸含量(liang)(µg/mg prot)= x×V樣品÷(Cpr×V樣品)=x÷Cpr。 (3)按細菌或(huo)細胞密度計算: 細胞羥(qian)脯(fu)氨酸含量(µg/104 cell)= x×V樣品÷(細(xi)胞數量(liang)×V樣品÷V胞提)=2x÷細胞數量(liang)。 V樣品:加(jia)入的樣品體積,0.2mL;V組提(ti)(ti):組織(zhi)提(ti)(ti)取液體積(ji),8mL;V胞提(ti):細(xi)胞提(ti)取液體積,2mL;W:樣本鮮重;細胞數量:以(yi)104計;Cpr:樣本(ben)蛋(dan)白質濃(nong)度,mg/mL。 注意事項(xiang): - OD值大于1,樣品適當稀釋(shi)再測定(ding),注意計算(suan)公式(shi)里乘(cheng)以(yi)稀釋(shi)倍(bei)數(shu)。
- 試(shi)劑(ji)有一定的毒性(xing),請操作時(shi)做好防護措(cuo)施,防止吸入或(huo)與皮膚接觸。
3、按(an)樣(yang)本蛋(dan)白濃度計算時,需單獨(du)提(ti)取樣(yang)本中的(de)蛋(dan)白質并測定。
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