抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性檢測試劑盒 產品名稱:: 抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性檢測試劑盒 微量法產品(pin)英(ying)文名: Micro Ascorbate Peroxidase (APX) Assay Kit產品貨號:BC0225 產地(di):北京市(shi)通州區馬駒橋聯(lian)東(dong)U谷8三樓產品規格:100管(guan)/96樣 產品商標:solarbio 保存(cun)與運(yun)輸:4℃保存(cun)或-20℃保存(cun); 參考價格:1300 庫存狀(zhuang)態:現(xian)貨 關鍵字(zi): 抗壞(huai)血酸(suan)過氧化物酶(mei)檢測試劑盒|APX檢(jian)測試劑盒|抗壞血酸過氧(yang)化物酶|試(shi)劑(ji)盒
簡(jian)要介(jie)紹(shao): APX 是植(zhi)物(wu)清除活性(xing)氧(yang)的(de)(de)重要(yao)抗(kang)氧(yang)化(hua)(hua)(hua)酶之一,也是抗(kang)壞血酸(suan)代謝的(de)(de)關(guan)鍵酶之一。APX具有(you)(you)多種同功酶,分別定位于葉綠體、胞質、線粒體、過氧(yang)化(hua)(hua)(hua)物(wu)和乙醛酸(suan)體,以(yi)及過氧(yang)化(hua)(hua)(hua)體和類囊體膜上。APX 催化(hua)(hua)(hua)H2O2 氧(yang)化(hua)(hua)(hua)AsA,是植(zhi)物(wu)AsA的(de)(de)主要(yao)消(xiao)耗(hao)者。APX 的(de)(de)活性(xing)直接影(ying)響到(dao)AsA 的(de)(de)含量,在(zai)脅迫和解脅迫條件下(xia),APX 與AsA 具有(you)(you)一定的(de)(de)負相關(guan)性(xing)。 APX催化H2O2氧化AsA,通過測定AsA 的氧化速率,可(ke)計(ji)算得APX 活力。
產品詳細(xi)描述(shu) 產品內容(rong): 試劑一:液體60mL×2瓶(ping),4℃保存。 試(shi)劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前(qian)加3 mL蒸餾水充(chong)分溶(rong)解。 試劑三(san):液體3mL×1瓶,4℃保存。 產品說(shuo)明: APX 是植(zhi)物清除(chu)活性氧的(de)重(zhong)要抗氧化酶(mei)(mei)之一,也是抗壞血(xue)酸代謝的(de)關鍵(jian)酶(mei)(mei)之一。APX具有多種同功酶(mei)(mei),分(fen)別定位于葉綠體、胞質、線粒(li)體、過氧化物和乙醛酸體,以及過氧化體和類囊(nang)體膜上。APX 催化H2O2 氧化AsA,是植物AsA的(de)主要消耗者。APX 的(de)活性直接影響到AsA 的(de)含(han)量,在(zai)脅迫(po)和解脅迫(po)條件下,APX 與AsA 具有一定的(de)負相關性。 APX催化H2O2氧(yang)(yang)化AsA,通過(guo)測(ce)定(ding)AsA 的(de)氧(yang)(yang)化速(su)率,可計算得APX 活力。 試(shi)驗中所需的儀器和試(shi)劑: 低(di)溫離心機、紫外分(fen)光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔UV板、移液槍、研缽、冰(bing)和蒸餾(liu)水。
操作(zuo)步(bu)驟: 一、粗酶液提取 : 稱(cheng)取約(yue)0.1g樣品,加1 mL試劑一(yi),冰(bing)上(shang)充(chong)分研(yan)磨,13000g 4℃離(li)心20min,取(qu)上清液。 二、測定操作表: 1. 分光(guang)光(guang)度計/酶(mei)標儀(yi)預熱30 min以上,調節波長到(dao)265 nm,用蒸餾(liu)水調零。 2. 試劑(ji)一在25℃中(zhong)預熱30min以上。 3. 空(kong)白管:依次(ci)在微量(liang)石英比(bi)色皿/96孔板中(zhong)加入20μL蒸餾(liu)水、140μL預熱的試(shi)(shi)(shi)劑(ji)一、20μL試(shi)(shi)(shi)劑(ji)二和20μL試(shi)(shi)(shi)劑(ji)三,迅速(su)混勻后在290nm測定10s和130s光吸(xi)收A1和A2,△A空白管(guan)=A1-A2。 4. 測(ce)定管:依(yi)次在(zai)微量石英比(bi)色皿/96孔板中加入20μL上(shang)清(qing)液、140μL預熱的試(shi)劑(ji)一(yi)、20μL試(shi)劑(ji)二和20μL試(shi)劑(ji)三,迅速混勻后在(zai)290nm測定10s和130s光吸(xi)收A3和A4,△A測定管=A3-A4。 三、APX 活力計算(suan): a.使用微量石英比色皿測定(ding)的計算公式如下(xia) (1)按蛋白濃度計算 活性單位定義:每毫克蛋(dan)白每分鐘氧(yang)化(hua)1μmol AsA 為1U。 APX(U/mg prot) = (△A測(ce)定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總(zong)×106÷(Cpr×V樣)÷T =1.79×(△A測定管-△A空白(bai)管) ÷Cpr (2)按樣本鮮重計算 活(huo)性單位定義:每克(ke)樣品每分鐘(zhong)氧化1μmol AsA 為1U。 APX(U/g 鮮重) = (△A測定管-△A空白(bai)管)÷(ε×d)×V反總×106÷(V樣÷V樣(yang)總×W)÷T =1.79×(△A測定管(guan)-△A空白(bai)管) ÷W ε:AsA在(zai)290nm處摩(mo)爾吸光系數為2.8×103 L/mol/cm;d:比色皿光(guang)徑(jing)(cm),1 cm;V反(fan)總:反(fan)應(ying)體系總體積(ji)(L),200μL=2×10-4 L;106:1mol=1×106μmol;Cpr:上清液蛋白(bai)質濃度(mg/mL),需要另外測定,建議使用(yong)本公司BCA蛋白質(zhi)含量測定試劑盒;W :樣品質量,g;V樣:加(jia)入反應體系中上清液體積(ji)(mL),20μL=0.02mL;V樣(yang)總(zong):加入試劑一體積,1mL;T:催化反應時間(min),2min。 b.使(shi)用96孔板測定的計(ji)算公式如下 (1)按蛋白濃度計算 活(huo)性單位定義:每毫克蛋白每分鐘(zhong)氧(yang)化1μmol AsA 為1U。 APX(U/mg prot) = (△A測(ce)定管-△A空白(bai)管)÷(ε×d)×V反總(zong)×106÷(Cpr×V樣)÷T =3×(△A測定管-△A空白管) ÷Cpr (2)按樣本(ben)鮮重計算 活性單位(wei)定義:每克樣品每分(fen)鐘氧化1μmol AsA 為1U。 APX(U/g 鮮重(zhong)) = (△A測定(ding)管-△A空白(bai)管)÷(ε×d)×V反總×106÷(V樣(yang)÷V樣總×W)÷T =3×(△A測定管-△A空白管(guan)) ÷W ε:AsA在290m處摩爾吸光系數為(wei)2.8×103 L/mol/cm;d:96孔(kong)板光徑(jing)(cm),0.6 cm;V反(fan)總(zong):反(fan)應體系總(zong)體積(ji)(L),200μL=2×10-4 L;106:1mol=1×106μmol;Cpr:上清液(ye)蛋白質濃(nong)度(du)(mg/mL),需要另外測定,建(jian)議使(shi)用本公司(si)BCA蛋(dan)白質含量測定試劑盒(he);W :樣(yang)品(pin)質量,g;V樣:加入反應體系(xi)中(zhong)上清液體積(mL),20μL=0.02mL;V樣總:加入試劑一體積,1mL;T:催化(hua)反應時間(jian)(min),2min。 |