抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性檢測試劑盒 產品名稱(cheng):: 抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性檢測試劑盒產品英文名: Ascorbate Peroxidase (APX) Assay Kit產品(pin)貨號:BC0220 產地:北京(jing)市(shi)通州區馬(ma)駒橋聯(lian)東U谷(gu)8三樓產品規格:50管/48樣 產品(pin)商(shang)標:solarbio 保(bao)存與運輸:4℃保(bao)存或-20℃保(bao)存; 參考價格:720 庫存狀態:現貨 關(guan)鍵字: 抗壞血(xue)酸過氧化物酶檢測試劑盒|APX檢測試劑盒|抗壞血酸(suan)過(guo)氧化物酶|試劑盒
簡要(yao)介紹: APX 是(shi)(shi)植(zhi)物清除活性(xing)氧的(de)(de)重要(yao)抗(kang)氧化酶(mei)之一(yi),也是(shi)(shi)抗(kang)壞血酸代謝的(de)(de)關鍵酶(mei)之一(yi)。APX具有多種同功酶(mei),分(fen)別定(ding)位(wei)于葉(xie)綠體、胞質、線(xian)粒體、過(guo)(guo)氧化物和乙醛酸體,以及(ji)過(guo)(guo)氧化體和類囊體膜上。APX 催化H2O2 氧化AsA,是(shi)(shi)植(zhi)物AsA的(de)(de)主要(yao)消(xiao)耗者。APX 的(de)(de)活性(xing)直接影響到AsA 的(de)(de)含量,在脅迫(po)和解脅迫(po)條件(jian)下,APX 與AsA 具有一(yi)定(ding)的(de)(de)負相關性(xing)。 APX催化(hua)H2O2氧(yang)化(hua)AsA,通(tong)過(guo)測定(ding)AsA 的氧(yang)化(hua)速率(lv),可計算得(de)APX 活力。
產品詳細(xi)描述 產品內容: 試劑一:液(ye)體90mL×1瓶(ping),4℃保(bao)存; 試劑(ji)二:粉劑(ji)×1瓶,4℃保存。臨(lin)用前加入5mL雙蒸水(shui)充分溶解; 試(shi)劑三(san):液體(ti)5 mL×1瓶,4℃保存。 產(chan)品說明(ming): APX 是植物(wu)清除活(huo)性(xing)氧(yang)的(de)重要抗氧(yang)化(hua)酶之一,也是抗壞血酸(suan)代(dai)謝(xie)的(de)關鍵酶之一。APX具有多種同功酶,分別定位于葉綠體、胞質、線粒體、過氧(yang)化(hua)物(wu)和乙醛酸(suan)體,以及過氧(yang)化(hua)體和類囊體膜上。APX 催化(hua)H2O2 氧化AsA,是植物AsA的主要(yao)消耗(hao)者。APX 的活性(xing)直接影響到AsA 的含量(liang),在脅(xie)迫和解脅(xie)迫條件下(xia),APX 與AsA 具有一定(ding)的負相關性(xing)。 APX催化H2O2氧化(hua)AsA,通(tong)過測定(ding)AsA 的氧化(hua)速率,可(ke)計算得APX 活力(li)。 試驗中所(suo)需的儀器和(he)試劑: 低溫離心機、紫外(wai)分光光度(du)計、1mL石英比色(se)皿、移液(ye)槍、研(yan)缽、冰和(he)蒸餾水(shui)。 操作(zuo)步(bu)驟: 一(yi)、粗酶液(ye)提取 : 按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織(zhi),加入1mL試劑一)進行(xing)冰浴勻漿。13000g,4℃離心20min,取上(shang)清置冰上(shang)待測。 二、測定操作表: - 分光光度計預熱30 min以上,調(diao)(diao)節波長到290 nm,用(yong)蒸餾水調(diao)(diao)零。
- 試劑一在25℃中預熱(re)30min以上。
- 空白管:依次在1mL石英比色(se)皿中加入100μL蒸餾(liu)水、700μL預熱的試劑一、100μL試(shi)劑(ji)二和100μL試劑三,迅速混(hun)勻后在290nm測(ce)定(ding)10 s和130 s光吸收A1和A2,△A空白管=A1-A2。
- 測定管:依次(ci)在1mL石(shi)英比色皿中(zhong)加(jia)入100μL上(shang)清液、700μL預(yu)熱的試(shi)劑一、100μL試(shi)劑二和100μL試劑三,迅(xun)速混勻后(hou)在290nm測定(ding)10 s和130 s光吸收A3和A4,△A測(ce)定管(guan)=A3-A4。
三、APX 活力計(ji)算: (1) 按樣本蛋白濃度計算 活性單位定義:每(mei)毫克蛋白每(mei)分鐘(zhong)氧化1μmol AsA 為1U。 APX(U/mg prot) = (△A測定(ding)管-△A空白(bai)管)÷(ε×d)×V反總(zong)×106÷(Cpr×V樣)÷T =1.79×(△A測(ce)定管(guan)-△A空白(bai)管) ÷ Cpr ε:AsA在290nm處(chu)摩(mo)爾(er)吸光(guang)系數為2.8×103L/mol/cm;d:比(bi)色皿光徑(cm),1 cm;V反總(zong):反應體系總(zong)體積(L),1000μL=1×10-3 L;106:1mol=1×106μmol;Cpr:上清液蛋白質濃度(mg/mL),需要另外測定(ding),建議使用本(ben)公(gong)司BCA蛋(dan)白質含量(liang)測定(ding)試劑盒;V樣:加入反應體系中上清液體積(mL),100μL=0.1 ml;T:催化反應時間(min),2min。 (2)按樣本質量計(ji)算 單位的(de)定義:每(mei)(mei)g組織(zhi)每(mei)(mei)分鐘氧化1μmol AsA 為1U。 APX(U/g ) = (△A測(ce)定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總(zong)×106÷(W×V樣÷V樣總)÷T =1.79×(△A測定管-△A空白管) ÷W ε:AsA在(zai)290nm處摩(mo)爾吸光系(xi)數為2.8×103 L/mol/cm;d:比色皿(min)光徑(cm),1 cm;V反總:反應體系總體積(L),1000μL=1×10-3 L;106:1mol=1×106μmol;V樣(yang):加入(ru)反應體系中上清液體積(mL),100μL=0.1 mL;V樣總:加入(ru)試劑一體積(ji),1mL;W,樣本質量,g;T:催化反應時間(min),2min。 |