過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒 產品(pin)名稱:過氧(yang)化氫酶測定(ding)試劑盒 產品英(ying)文名(ming):Catalase (CAT) Assay Kit 產品貨號:BC0200 產(chan)地(di):北京(jing)市通(tong)州(zhou)區馬駒(ju)橋聯東U谷8三樓 產品規格:50管/48樣 產品(pin)商標(biao):solarbio 保(bao)存與運輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價格:130 庫(ku)存狀態:現貨 關鍵字:過氧(yang)化氫酶試劑盒
簡要介紹(shao): CAT(EC 1.11.1.6)廣泛(fan)存在于動物(wu)(wu)、植物(wu)(wu)、微生物(wu)(wu)和(he)培養細胞中,是(shi)主要的(de)H2O2清除酶,在活性(xing)氧清除系(xi)統中具有重要作用。H2O2在240nm下(xia)有特征吸收峰,CAT能夠分解H2O2,使反應溶液240nm下(xia)的(de)吸光度隨反應時間而下(xia)降,根據吸光度的(de)變化率可計算出CAT活性(xing)。
產(chan)品詳細描述 商品(pin)貨號: | 商品品牌: | 規(gui)格(ge) | 基本售(shou)價(jia): | 選擇規格(ge) | BC0200-50管/48樣 | Solarbio | 50管/48樣 | 130.00元 | |
產品(pin)內容: 提(ti)取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存; 試(shi)劑一:液體 60mL×1 瓶,4℃保存(cun); 試劑二:液體 100μL×3 瓶,4℃保存。
產品說(shuo)明: CAT(EC1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yang)細胞中,是主要的 H2O2清(qing)除(chu)酶,在活 性(xing)氧清(qing)除(chu)系統中具(ju)有重要作用。 H2O2在 240nm 下有特征吸收峰,CAT 能夠(gou)分解 H2O2,使反(fan)應(ying)(ying)溶液 240nm 下的吸光度(du)隨反(fan)應(ying)(ying)時 間(jian)而下降(jiang),根據(ju)吸光度(du)的變化率可計算出 CAT 活性(xing)。
操作步驟: 一(yi)、粗(cu)酶液提取(qu): 1、細(xi)(xi)菌(jun)(jun)、細(xi)(xi)胞(bao)或(huo)(huo)(huo)組織樣品的(de)制備 細(xi)(xi)菌(jun)(jun)或(huo)(huo)(huo)培養(yang)細(xi)(xi)胞(bao):收集細(xi)(xi)菌(jun)(jun)或(huo)(huo)(huo)細(xi)(xi)胞(bao)到離心(xin)管內,離心(xin)后棄(qi)上清;按(an)照細(xi)(xi)菌(jun)(jun)或(huo)(huo)(huo)細(xi)(xi)胞(bao)數量(104個): 提(ti)取液體積(ji)(ml)為 500-1000:1 的(de)比例(建議 500 萬細(xi)(xi)菌(jun)(jun)或(huo)(huo)(huo)細(xi)(xi)胞(bao)加(jia)入 1ml 提(ti)取液),超聲波破碎細(xi)(xi) 菌(jun)(jun)或(huo)(huo)(huo)細(xi)(xi)胞(bao)(功率 20%或(huo)(huo)(huo) 200w,超聲 3 秒,間隔 10 秒。重復 30 次(ci));8000g4℃離(li)心 10 分鐘(zhong),取上(shang) 清,置冰上(shang)待測。 組織(zhi):按照組織(zhi)質量(liang)(g):提(ti)(ti)取液體積(ji)(ml)為 1:5-10 的比(bi)例(建議稱取約 0.1g 組織(zhi),加 入 1mL 提(ti)(ti)取液),進行冰浴勻(yun)漿。8000g4℃離心(xin) 10 分(fen)鐘,取上(shang)清(qing),置冰上(shang)待測。 2、血清(漿)樣品:直接檢測。 二、CAT 測定操作 1、 分光(guang)光(guang)度計預熱 30min 以上,調節(jie)波長 240nm 處,蒸餾水(shui)調零。 2、 CAT 檢測工作液的(de)配置:用時在(zai)每瓶試(shi)劑二(er)(100μL)中加入 20ml 試(shi)劑一,充分混(hun)勻,作為工 作液;用不完(wan)的(de)試(shi)劑 4℃保(bao)存一周(zhou)。 3、 測定前(qian)將 CAT 檢測工作液 37℃(哺乳動物)或 25℃(其他物種)水浴(yu) 10min。 4、 取 1mLCAT 檢(jian)測工作液于 1mL 石英比色皿中,再加入 35μL 樣本(ben),混勻 5s;室(shi)溫(wen)下立即測定 240nm 下的初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。計算ΔA=A1-A2 三(san)、CAT 活性計算: 1、 血清(漿)CAT 活力(li)的(de)計算: 單(dan)位的定義:每毫升血清(漿(jiang))在反(fan)應(ying)體系中每分鐘催化(hua) 1nmolH2O2降解定義為一(yi)個酶活力單 位(wei)。CAT(U/mL)=﹝ΔA×V 反總÷(ε×d)×109﹞÷V 樣÷T=678×ΔA 2、 組織(zhi)、細菌或細胞中 CAT 活力(li)計算: (1) 按(an)樣(yang)本蛋白濃度計算(suan): 單位的(de)定義:每 mg 組織蛋白在(zai)反應體系中每分鐘催化 1nmolH2O2降解定義為(wei)一個酶活力單位。 CAT(U/mgprot)=﹝ΔA×V 反總÷(ε×d)×109﹞÷(V 樣(yang)×Cpr)÷T=678×ΔA÷Cpr (2) 按樣本鮮重(zhong)計算: 單(dan)位(wei)的(de)定義:每(mei) g 組織在(zai)反應體系中每(mei)分鐘催(cui)化 1nmolH2O2降解定義為一個(ge)酶活(huo)力單(dan)位(wei)。 CAT(U/g 鮮重(zhong))=﹝ΔA×V 反總÷(ε×d)×109﹞÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=678×ΔA÷W 3、 按(an)細(xi)(xi)菌或細(xi)(xi)胞中(zhong)(zhong) CAT 活力計算: 單位的定義:每 1 萬個細(xi)(xi)菌或細(xi)(xi)胞在(zai)每分鐘反應體(ti)系中(zhong)(zhong)每分鐘催化 1nmolH2O2降(jiang)解定義為一(yi)個 酶活力單位。 CAT(U/104 cell)=﹝ΔA×V 反總÷(ε×d)×109﹞÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T=1.356×ΔA V 反(fan)(fan)總:反(fan)(fan)應(ying)體(ti)系(xi)總體(ti)積,1.035×10-3L;ε:H2O2摩爾吸光系(xi)數(shu),4.36×104L/mol/cm;d:比色皿 光徑,1cm;V 樣(yang):加入樣(yang)本體(ti)積,0.035ml;V 樣(yang)總:加入提取(qu)液體(ti)積,1ml;T:反(fan)(fan)應(ying)時間,1min。 W,樣(yang)本質量(liang),g;Cpr:上清液蛋(dan)白濃度,mg/ml;500:細(xi)胞(bao)或細(xi)菌總數(shu),500 萬。
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