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鏈霉親和素（Streptavidin，SA）為Streptomyces Avicllrdi菌培養過程中的分泌產物。是大小為66KDa的四聚體蛋白，一分子鏈霉親和素可以高度特異性地與四分子生物素結合，鏈霉親和素-生物素復合物的解離常數處于10^-14 mol/L數量級(ji)，是已知自然界中(zhong)的(de)非(fei)共價相(xiang)互作(zuo)用之一(yi)。其特別的(de)結構特性使(shi)其廣泛(fan)應用于免(mian)疫學中(zhong)ELISA檢測信號的(de)放大。SA亦(yi)可用于免(mian)疫微(wei)孔板、免(mian)疫層(ceng)析硝酸纖維素膜、基(ji)因芯片，快速固定生物(wu)素化的(de)抗(kang)原、抗(kang)體、核酸等(deng)物(wu)質(zhi)，偶(ou)聯NHS磁珠、樹脂微(wei)球，廣泛(fan)應用于發(fa)光診斷(duan)、生物(wu)素化物(wu)質(zhi)分(fen)離、磁性試(shi)紙條免(mian)疫層(ceng)析等(deng)方面(mian)。

01

測定包被板結合活性

1. 用200μL洗(xi)滌緩(huan)沖液沖洗(xi)預包被酶標板(ban)，每孔三次；

2. 準(zhun)備1mg/mL的(de)Bio-HRP溶(rong)液，用1:2000的(de)稀釋(shi)度(du)對第一孔(kong)進(jin)行(xing)1:2連(lian)續(xu)倍比稀釋(shi)，在(zai)室溫(wen)下孵育1小時(shi)；

3. 用(yong)200μL洗(xi)滌緩沖液清(qing)洗(xi)每(mei)孔(kong)4次(ci)；

4. 用100μL底(di)物溶液室溫孵育15分鐘；

5. 加(jia)50μL終止液，測量(liang)每(mei)個孔的吸光度。

結(jie)(jie)果顯(xian)示(shi)：本(ben)公司所產(chan)SA包(bao)被板結(jie)(jie)合活性與X品(pin)牌(pai)及Y品(pin)牌(pai)平行(xing)，甚至更優(you)。

02

雙抗夾心法檢測

1. 用(yong)200μL的Wash Buffer洗滌預包被酶標板(ban)，每孔三次(ci)。在(zai)每孔中加入(ru)100μL生物(wu)素化捕獲抗體，在(zai)室溫振蕩孵育60分鐘(zhong)；

2. 用200μL的Wash Buffer洗滌每(mei)孔四次，連續稀釋抗原，64ng/mL作為(wei)高點，同時設置(zhi)0孔，每(mei)孔加(jia)100μL。在室溫振(zhen)蕩孵育60分鐘；

3. 用200μL的(de)Wash Buffer洗(xi)滌每孔四次。在每個(ge)孔中加入(ru)100μL一抗(kang)，室溫振蕩孵育60分鐘；

4. 用200μL的Wash Buffer洗滌每孔四次。每孔加入100μL酶(mei)標二(er)抗。在室溫振蕩孵育30分鐘；

5. 用200μL的Wash Buffer洗(xi)滌每孔四次。每孔加(jia)入100μL底(di)物溶液室溫孵(fu)育20分鐘(zhong)；

6. 加50μL終(zhong)止液，測量每個孔的吸(xi)光度。

結果(guo)表明：本包被板(ban)顯色更(geng)高，擬合曲線優于X品牌(pai)及Y品牌(pai)。

03

穩定性檢測

將包被好的SA板條放于37℃進(jin)行加速穩定(ding)性實驗(yan)，放置(zhi)16天（約(yue)4℃放置(zhi)24個月），隨后取(qu)出進(jin)行結合(he)活性檢(jian)測。

結果顯示：考(kao)核(he)16天后，結合活性OD值變化不大且梯度良好，表明包被板穩定性良好。